紅細胞分布寬度對氣虛質大鼠輔助診斷的評價

徐 文，鄒 明，高丕明，張紅梅，劉小莉，張 靜，郭 莉，虞亞明

(1.成都體育學院附屬體育醫院，四川 成都 610041；2.四川省骨科醫院，四川 成都 610041)

紅細胞分布寬度(RDW)是衡量紅細胞體積異質性的指標，主要用于貧血的鑒別診斷，由血液分析儀通過測定大量紅細胞的體積，依據其粒度分布曲線得到，將其表示為紅細胞分布寬度標準差(RDW-SD)和紅細胞分布寬度變異系數(RDW-CV)，二者表示的臨床意義相似。但令人感興趣的是RDW也與多種疾病的發病率和死亡率緊密相關，其影響機制仍尚不清楚，推測主要是通過機體處于慢性炎癥來影響疾病的發生[1]。由于氣虛質者氣息低弱，其可能對血液循環的推動及血液成分造成影響，通過建立脾氣虛質大鼠模型，了解機體是否處于炎癥狀態，并試圖從常規檢查中篩選出方便、快速及廉價的指標以輔助診斷氣虛質體質。

1 材料與方法

1.1 動物分組與造模于2014年12月至2016年9月選擇4周齡SPF級SD雄性大鼠60只，購于四川省達碩生物技術有限公司，許可證編號：SCXK(111)2013-24，體重(202.9±5.6)g，采用隨機數字表法將其分為A組(脾氣虛質組，30只)和B組(對照組，30只)。A組大鼠：參考中醫體質的成因，采用限制飲食結合干擾睡眠的方法，建立大鼠脾氣虛質模型[2～4]。采用無鼠糧供給2 d、足量鼠糧供應1 d的方式進行干預，鼠糧投放及撤除時間均為每日早8：30。飲用水(本院純凈水)始終足量供應。每日測量剩余食/水量，食/水量均值=(投放量-剩余量)/大鼠只數。睡眠剝奪，將大鼠置于跑臺跑道內，設置跑臺速度為1 m/min左右，緩慢移動形成不穩定平面，大鼠不能長時間靜止站立不動或趴下，無法睡眠，每次24 h，隔日1次。每7 d觀察1次大鼠體表特征，測量1次大鼠體重、腋溫、攝食量、飲水量、抓力，體溫及抓力連續測量3次取平均值，造模干預時間為28 d，B組大鼠正常飼養，成功建立大鼠脾氣虛質模型[4]。

1.2 標本收集與處理造模完成后，10%(0.15 ml/100 g)水合氯醛于腹腔注射施行麻醉后，在心臟處行負壓采血。EDTA.2k抗凝管采血2 ml，日本Sysmex XN1000血細胞計數儀于2小時內完成全血細胞計數[19]，獲得RDW-CV和Hb。無添加劑采血管采血4 ml，各組大鼠TNF-α、IL-1β水平測定使用深圳欣博盛生物科技有限公司生產的ELISA試劑盒，用奧地利anthos2010酶標儀進行測定。

1.3 統計學方法使用SPSS 19.0和MedCalc19.0.2軟件進行統計分析。符合正態分布的計量資料以均數±標準差表示，組間比較用t檢驗。P< 0.05為差異有統計學意義。MedCalc19.0.2受試者工作特征曲線(ROC)評價觀察指標的診斷性能，曲線下面積(AUC)比較采用Delong檢驗。

2 結果

2.1 兩組各檢測指標比較A組TNF-α、RDW-CV及IL-1β明顯高于B組，差異有統計學意義(P< 0.05)，但兩組Hb比較，差異無統計學意義(P> 0.05)，見表1。

表1 兩組各實驗檢測指標比較

2.2 RDW-CV、TNF-α及IL-1β單獨用于氣虛質大鼠的診斷價值RDW-CV診斷氣虛質大鼠的AUC最大，明顯高于IL-1β及TNF-α(P< 0.05)，而IL-1β和TNF-α間差異沒有統計學意義(P> 0.05)，當RDW-CV的最佳截斷值為17.6%(95%CI：17.6%～18.7%)時，敏感性為80%，特異性為80%，陽性預測值為80%，陰性預測值為80%，見圖1、表2。

圖1 RDW-CV、TNF-α及IL-1β單獨診斷氣虛質的ROC

表2 各指標單獨檢測時診斷分析

2.3 RDW-CV與TNF-α及IL-1β聯合用于氣虛質大鼠的診斷價值聯合檢測時，RDW-CV與TNF-α及IL-1β分別進行兩項及三項聯合檢測，單獨檢測時與兩項、三項聯合檢測相比及兩項與三項聯合檢測相比，各組AUC差異均無統計學意義(均P> 0.05)。見圖2、表3。

表3 RDW-CV與TNF-α及IL-1β聯合檢測時診斷分析

圖2 RDW-CV與其它指標聯合檢測的ROC

3 討論

RDW是反應紅細胞大小異質性的參數，而紅細胞大小易受季節、衰老及運動等生理因素的影響。但當機體有缺鐵、缺乏維生素B12和葉酸、溶血和輸血等影響紅細胞大小的病理因素時，因血流中釋放的紅細胞比正常人更不成熟，可導致RDW增加。其在臨床主要應用于貧血的鑒別診斷及療效觀察，但最近累積的研究證據表明RDW在糖尿病[5，6]、血糖不良控制[7]、高血壓[1，8]、心血管事件[9～11]、心力衰竭[12]和髖部骨折[13]等多種疾病的診斷和與疾病短期和長期預后的預示中是一個有價值指標。目前認為RDW對疾病的影響是因機體處于慢性炎癥的狀態，特別是通過炎癥細胞因子的存在和高氧化應激來影響機體的發病，甚至Bilal[1]、 Hassan[14]等認為RDW升高本身就是慢性炎癥的標志物之一，慢性炎癥可能導致RDW升高，而RDW水平升高可能反映潛在的慢性炎癥。而人體健康涉及多方面，由于醫學發展，現在已非常強調在機體處于已有病因但尚未發病的疾病前期時即對機體采取干預措施。即使對已發生疾病也強調同病異治，異病同治，這要求臨床醫生必須正確了解機體處于何種狀態，即辨清體質，強調因人而異的重要性。體質是客觀存在的生命現象，個體間有不同的差異，不同的體質對疾病的易感性不一，這與機體先天遺傳和后天獲得有關，但這種差異性是可分可調的。王琦[15]將體質劃分為9類，認為氣虛質是由于元氣不足，以氣息低弱、機體、臟腑功能狀態低下為主要特征的一種體質狀態，有肌肉不健壯，性格內向等表現，為先天本弱，后天失養或病后氣虧所致，不利于機體血液循環推動。

TNF-α是重要的促炎細胞因子，可由巨噬細胞，NK細胞等產生，促進細胞凋亡，通過參與血管擴張和水腫的形成，白細胞粘附，促進炎癥部位的氧化應激等方式參與炎癥[16]。IL-1也是一種典型的促炎細胞因子，有IL-1α和IL-1β兩種形式，它們的生物活性相似，常與另一種促炎細胞因子腫瘤壞死因子協同作用。IL-1β由巨噬細胞、單核細胞、樹突狀細胞及上皮細胞等分泌的，可以旁分泌的方式或系統地發揮作用，有多重作用，可參與T細胞、NK細胞和巨噬細胞活話，誘導急性期反應蛋白、發熱而發揮有效促炎活性，生物活性由于其功能的強大和廣泛，其合成、加工、分泌和活性是受到嚴格調控的，在正常條件下，在低水平表達[17]。

本研究發現脾氣虛質大鼠TNF-α、IL-1β明顯高于對照組，表明機體處于炎癥狀態，已有研究表明機體RDW升高與高敏C反應蛋白、紅細胞沉降率等炎癥標志物強相關。因而RDW-CV水平升高與炎性細胞因子TNF-α、IL-1β表達水平升高相關。炎性細胞因子的過高表達，可通過調節紅細胞生成，包括抑制紅細胞成熟、鐵代謝受損以及抑制促紅細胞生成素的產生或反應及增加細胞凋亡等損害紅細胞的存活，導致未成熟紅細胞過早的進入血液循環，使得RDW增加[6]。本研究通過限制大鼠飲食的方法來構建脾氣虛質模型，可能會引起對脾氣虛質大鼠的營養攝入而致貧血進而影響RDW-CV，因而將氣虛質與對照組的血紅蛋白的含量進行比較，發現二者的含量并未出現明顯變化，也進一步表明其RDW的升高與貧血沒有相關性，是因機體炎性因子升高所致，與Hassan等[14]排除貧血患者后發現RDW的升高與炎癥因子的升高相關一致。

正常血液不停地周流于全身，運載營養及代謝物質，使得各組織和器官血液供應得有效保證。要保證血液循環正常流動則需機體能提供充足動力，祖國醫學認為氣為血帥，血為氣母，氣行則血行，氣虛則血行無力[18]。氣虛質實因元氣不足所致，若需元氣充沛則需后天之精氣不斷滋養。機體若要獲得充足之精氣來維持元氣充沛，則需主運化之脾功能正常，因其有運化水谷精微功能，為氣血生化之源，為化生精、氣、血、津液提供足夠動力。脾氣虛質者則氣血無源，脈中氣虛血少，血行也難以正常，可致組織、器官的血、氧供應不足和代謝障礙，其RDW-CV的升高可能代表多種生理機制的綜合指標，即慢性炎癥、更大的氧化應激、營養不足、器官供血供氧不足等共同作用[7，10，11]。對于治未病，包括未病先防均需先辨清體質，而氣虛質的辨識現多依據相關臨床的主觀表現，如何通過實驗室的客觀指標快速有效進行定量判斷仍尚缺乏。本研究顯示，單獨檢測時，RDW-CV較TNF-α、IL-1β有更好的診斷效能。為提高RDW-CV在氣虛質大鼠中的診斷性能，通過與TNF-α、IL-1β進行兩項和三項聯合檢測，并不能明顯提高診斷性能。而RDW可通過自動血細胞計數很方便、快捷的獲得，是一個廉價、常規可用的實驗室參數，從檢測的便捷性、檢測成本及診斷性能等方面綜合考慮，在氣虛質診斷時，RDW可作為臨床診斷中較好的客觀輔助指標。本研究顯示，RDW可以作為脾氣虛質風險辨識的標記物，在機體向疾病轉化，出現臨床癥狀前可以盡早發現，進行風險評估并積極采取干預措施進行體質調節，防止機體向疾病轉化，對治未病具有十分重要的意義。

綜上所述，RDW與氣虛質有直接關系，其升高與機體處于炎癥狀態相關。作為一項相對容易獲得的測試，它可以作為一個早期預警指標，供臨床醫生用來識別氣虛質，為調節體質，防疾病過早出現提供客觀的輔助診斷，但因本研究是在脾氣虛質大鼠中進行的觀察，臨床應用及其升高機制需要進一步的在大樣本的人群中進行觀察。