miR-208a與miR-21檢測對急性心肌梗死的診斷價值比較

葉麗君 喻長法 蔡莎莎 任詩佳

（臺州市第一人民醫院 浙江 臺州 318020）

急性心肌梗死（AMI）是由冠狀動脈急性、持續性缺血和缺氧引起的心肌壞死，是最嚴重的心血管疾病之一[1]。AMI發生后，由于持繼缺血、缺氧而導致大量心肌細胞壞死，進而影響心臟功能及遠期預后。因此，快速準確的AMI診斷和及時再灌注是搶救患者生命、降低死亡率的關鍵[2]。近年來，隨著生物醫學的發展，微小核糖核酸（miRNAs）和AMI之間的相關性報道越來越多，微小核糖核酸RNA-208a（miR-208a）和微小核糖核酸RNA-21（miR-21）在AMI患者中呈高表達，對AMIA的診斷和治療有重要的價值[3-5]。本文旨在探討miR-208a和miR-21在AMI患者中的表達，為早期診斷和及時治療AMI提供實驗依據。

1.資料與方法

1.1 一般資料

2016年1月—2018年12月入住臺州市第一人民醫院的71例AMI的患者為對象，其中男性40例，女性31例，年齡為38～80歲，平均（62.0±12.5）歲，選取同期在該院30例健康體檢者作為對照組，其中男性17例，女性13例，年齡為37～78歲，平均（60.5±12.0）歲。兩組性別和年齡無統計學差異（P＞0.05）。

1.2 納入和排除標準

納入標準：（1）典型的胸痛持續時間超過 30min；（2）肌鈣蛋白水平比正常值高兩倍以上；（3）心電圖提示缺血（ST段抬高或壓低，或出現病理性Q波）；（4）經冠脈造影結果證實。

排除標準：（1）心肌損傷疾病（如主動脈夾層、充血性心力衰竭和陳舊性心肌梗死）；（2）合并肺栓塞、腦梗死者；（3）合并惡性腫瘤、自身免疫性疾病；（4）近期內有血栓性疾病而進行抗凝或溶栓治療者。（5）依從性差患者。

1.3 方法

1.3.1標本收集采集所有受試者的外周血5ml于枸櫞酸鈉抗凝管內，3000r/min (r=80mm)離心10min，分離血漿置于-80℃冰箱保存。

1.3.2 miR-208a和miR-21檢測取400μl 患者血漿用RNA提取液（Qiagen公司，USA）提取總miRNA，用逆轉錄試劑盒（Qiagen公司，USA）反轉錄成cDNA，用7500型實時熒光定量PCR（聚合酶鏈反應）儀（ABI公司，USA）進行擴增。采用 2－△△Ct的方法計算所測miR-208a和miR-21的相對表達量。

1.4 統計學分析

數據采用SPSS17.0統計軟件進行統計學分析，計數資料采用率（%）表示，進行χ2檢驗，計量資料采用（±s）表示，進行t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2.結果

2.1 miR-208a與miR-21 相對表達量比較

AMI組miR-208a與miR-21相對表達量顯著高于對照組（P＜0.01），見表1。

表1 AMI組和對照組miR-208a、miR-21相對表達量比較（±s）

表1 AMI組和對照組miR-208a、miR-21相對表達量比較（±s）

組別 例數miR-208amiR-21 AMI組712.75±0.693.14±0.95對照組300.91±0.360.93±0.28 t 6.3278.154 P＜0.01＜0.01

2.2 AMI發生冠脈單支阻塞和多支（包括2支和3支）阻塞miR-208a和miR-21相對表達量比較

miR-208a和miR-21在多支組中的相對表達量顯著高于單支組（P＜0.01），見表2。

表2 AMI發生冠脈單支阻塞和多支阻塞miR-208a和miR-21 相對表達量比較（±s）

表2 AMI發生冠脈單支阻塞和多支阻塞miR-208a和miR-21 相對表達量比較（±s）

組別 例數miR-208amiR-21單支組462.14±0.522.51±0.70多支組253.05±0.843.63±1.18 t 4.1494.660 P＜0.01＜0.01

2.3 PCI治療前后miR-208a和miR-21相對表達量比較

PCI術后AMI患者miR-208a和miR-21的相對表達量顯著降低（P＜0.01），見表3。

表3 PCI治療前后miR-208a和miR-21 相對表達量比較（±s）

表3 PCI治療前后miR-208a和miR-21 相對表達量比較（±s）

組別 例數miR-208amiR-21治療前712.75±0.693.14±0.95治療后711.04±0.371.09±0.33 t 5.3126.967 P＜0.01＜0.01

2.4 6個月后再次發生AMI與未再次發生AMI

PCI治療前 miR-208a和miR-21相對表達量比較：miR-208a和miR-21相對表達量越高，越易再次發生AMI（P＜0.01），見表4。

表4 再次發生AMI與未再次發生AMI miR-208a和miR-21相對表達量比較（±s）

表4 再次發生AMI與未再次發生AMI miR-208a和miR-21相對表達量比較（±s）

組別 例數miR-208amiR-21未再次發生AMI組522.06±0.472.62±0.71再次發生AMI組193.09±0.883.95±1.32 t 4.9774.313 P＜0.01＜0.01

3.討論

隨著社會經濟的發展和居民生活方式的變化，人口老齡化進程不斷加快，心血管危險因素水平不斷增加，心血管病已成為重大的公共衛生問題[6]。2014年中國AMI死亡率達到61.96/10萬，超過腫瘤疾病，成為中國死亡率最高的疾病。因此，心血管疾病，特別是心肌梗死的預防和治療顯得尤為緊迫[7]。

微小RNA是內源性非編碼RNA，由大約18～25個核苷酸構成，在進化過程中高度保守[8]。近年來，心血管疾病中miRNAs的研究也很普遍，miRNA與AMI等心血管疾病有一定的關系，它在心臟的生長發育和功能發揮中起著重要作用[9]。

miR-208主要在心肌中表達，由α肌球蛋白重鏈編碼，包括分別由MYH6和MYH7編碼的miR-208a和miR-208b[10]。miR-208a在AMI早期即大量釋放入血，AMI發作4小時后，血清中miR-208a水平增加了36倍，其預測心肌梗死面積優于肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T[11]。本文結果顯示，AMI組miR-208a的相對表達量顯著高于對照組，多發冠狀動脈閉塞患者的相對表達量顯著高于單發閉塞患者。miR-208a可通過抑制Nemo樣激酶和促進血管緊張素Ⅱ誘導的心肌細胞調亡，還能夠促進心臟成纖維細胞的增殖分化[12]。多發冠狀動脈閉塞患者的miR-208a水平高于單發冠狀動脈閉塞患者，提示miR-208a對冠狀動脈病變損傷程度有一定的預測作用，與Wang C等[13]報道一致。這可能是由于在AMI期間形成不穩定的動脈粥樣硬化斑塊破裂，導致冠狀動脈出血，血管內血栓形成和管腔閉塞，其進而導致心肌細胞的急性持續性缺血和缺氧，導致壞死。經PCI治療后，AMI患者miR-208a水平明顯下降，通過抑制心肌細胞調亡和心肌成纖維細胞的增殖和分化，改善心室重構和心功能。這說明miR-208a對評估AMI患者心肌缺血有效再灌注有重要的價值，對評估早期的臨床干預治療有一定的意義。

miR-21是位于基因組第十七號染色體上的一個跨膜蛋白基因，它是單個基因編碼的miRNA 家族中的一個亞型，miRNA在進化上屬于高度保守[14]。miR-21參與心房纖維化和心房顫動的發生和發展，當AMI后，成纖維細胞富集miR-21，這有助于心血管系統的纖維化和心力衰竭的發展[15]。在AMI的早期階段，miR-21表達的增加可能通過促進炎癥反應參與心肌細胞損傷。PCI治療后，miRNA-21表達顯著下降，通過巨噬細胞的抗炎作用來減少支架再狹窄。miR-21參與了冠狀動脈粥樣硬化過程，與調控炎性因子、促進炎癥反應來影響斑塊穩定性有關，其表達增加導致冠心病患者心血管事件風險增加[16]。

綜上所述，miR-208a和miR-21可作為診斷AMI的新型生物標記物，并且其表達量的高低可作為評估AMI病情嚴重程度、心肌缺血再灌注治療臨床效果的敏感指標。