南方地區櫻桃砧木吉塞拉6號的組培快繁技術

張益，王琳，鄭佳鈮，王云冰*，洪莉，董軍

(1.臺州科技職業學院 農業與生物工程學院，浙江 臺州 318020； 2.臺州市農業科學研究院 果樹研究所，浙江 臺州 371000)

甜櫻桃砧木吉塞拉6號產自德國，是酸櫻桃與灰毛葉櫻桃雜交培育的品種。吉塞拉系列甜櫻桃砧木適應性廣，矮化性強，表現突出，抗病能力強[1-2]，但南方甜櫻桃對氣候有極其嚴格的要求，常規種植方式育苗速度慢，生長狀況不夠理想，難以滿足市場需求。采用組織培養技術可有效解決育苗難的問題，已經有大量的櫻桃或櫻桃砧木建立了組培體系[3-5]。南方地區缺乏甜櫻桃育苗技術，制約了甜櫻桃產業發展的問題，為滿足南方地區對甜櫻桃種苗的迫切需求，本研究建立了一套適宜南方甜櫻桃砧木吉塞拉6號組織培養快繁體系，現將研究結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗材料為臺州市農業科學研究院的櫻桃砧木吉塞拉6號，取其幼芽為外植體，幼芽取材時間為3月。

1.2 處理設計

1.2.1 外植體消毒

選晴朗天氣摘取生長健壯、無病蟲害的新生櫻桃砧木吉塞拉6號的幼芽，采用1 000倍多菌靈溶液處理，并套袋保護15 d，剪下幼芽備用。選取飽滿幼芽，在肥皂水中清理干凈，用流水沖洗30 min以上；隨后在無菌條件下，用75%乙醇溶液浸沒幼芽，均勻晃動進行消毒，無菌水沖洗3～4次，每次約1 min，然后用0.1%的HgCl2溶液浸沒幼芽均勻晃動進行消毒，再用無菌水沖洗3～4次，瀝干備用。其中75%乙醇處理時間分別為30、45 s，0.1%的HgCl2溶液處理時間分別是6、8、10 min，具體處理為：T1，75%的乙醇30 s+0.1%的HgCl26 min；T2，75%的乙醇30 s+0.1%的HgCl28 min；T3，75%的乙醇30 s+0.1%的HgCl210 min；T4，75%的乙醇45 s+0.1%的HgCl26 min；T5，75%的乙醇45 s+0.1%的HgCl28 min；T6，75%的乙醇45 s+0.1%的HgCl210 min。

所有處理的外植體接種于MS+0.5 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1NAA+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1瓊脂培養基上。每種處理15瓶，每瓶接種3株。10 d后統計污染率、褐化率和成活率。

1.2.2 培養基篩選

增殖培養以MS+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1瓊脂為基礎培養基，生根培養以1/2MS+蔗糖30 g·L-1+6 g·L-1瓊脂為基礎培養基，pH值為5.8，在不同生長時期添加不同含量的激素。

增殖培養：選取健壯、生長勢良好的分化苗，接種到含不同激素的增殖培養基上進行繼代培養。試驗共設置6種增殖培養基，標記為T7～T12。各培養基均以MS為基礎培養基，每個處理中NAA均為0.1 mg·L-1，T7～T9中KT為0 mg·L-1，6-BA分別為0.3、0.5、0.8 mg·L-1；T10～T12中，6-BA為0 mg·L-1，KT分別為0.3、0.5、0.8 mg·L-1。每種處理接種15瓶，每瓶接種3株。繼代培養30 d，統計分化苗的增殖率、株高和生長狀況。

生根培養：將株高約1.5～3.0 cm的健壯繼代增殖苗轉接到生根培養基中進行培養，試驗設置6種生根培養基，標記為T13～T18。各培養基均以1/2MS為基礎培養基，每個處理中IAA均為0.1 mg·L-1，T13～T15中IBA為0 mg·L-1，NAA分別為0.3、0.5、0.8 mg·L-1；T16～T18中NAA為0 mg·L-1，IBA分別為0.3、0.5、0.8 mg·L-1。每種處理接種15瓶，每瓶接種3株，放置培養室進行生根培養。生根培養30 d，統計瓶苗的生根長度、生根率和生長狀況。

2 結果與分析

2.1 消毒處理方式的影響

消毒劑對植物試驗材料有一定程度的傷害，消毒時間長，雖然污染率會降低，但是褐化率會升高。由表1可知，同種消毒劑消毒不同時間對吉塞拉6號生長影響也不同。75%乙醇溶液消毒45 s，吉塞拉6號的成活率低于消毒30 s；隨著HgCl2處理時間的延長，污染率逐漸下降，成活率呈先增高后下降的趨勢。綜合考慮，以75%乙醇溶液30 s+0.1% HgCl2溶液8 min的消毒處理效果較好，成活率達90%。

表1 消毒方式對外植體消毒效果的影響

2.2 增殖培養基的影響

表2數據表明：吉塞拉6號在T7、T12培養基中增殖率均較高，分別為90%、95%；T12培養基中的苗生長旺盛，葉片嫩綠；T9培養基的分化苗增殖率最低，且葉片生長不良，生長速度慢，還有過度水化現象發生，玻璃化比較嚴重。表明6-BA明顯影響櫻桃砧木的增殖，易導致培養材料玻璃化，KT不易產生玻璃化，是良好的替代品。綜合考慮，增殖培養基以MS+0.8 mg·L-1KT+0.1 mg·L-1NAA為宜。

表2 不同增殖培養基對櫻桃生長的影響

2.3 生根培養基的影響

表3表明，吉塞拉6號在T17、T18培養基中生根率較高，分別達93%和91%，T17培養基內的增殖苗生根速度快，一般7 d左右就有根長出，根長適宜，根系生長狀況良好，粗細適中，根系白，須根較多；T14培養基生根率最低，長根速度慢甚至不長根。IBA比NAA生根效果略好，綜合考慮，生根培養基以1/2MS+0.1 mg·L-1IAA+0.5 mg·L-1IBA為宜。

表3 不同生根培養基對櫻桃生長的影響

3 小結

以75%乙醇溶液30 s+0.1% HgCl2溶液8 min消毒處理為宜，誘導成活率可達90%，且生長良好；增殖培養基以MS+0.8 mg·L-1KT+0.1 mg·L-1NAA為宜，增殖率達95%，該培養基內生長的分化苗健壯，生長旺盛；生根培養基以1/2MS+0.1 mg·L-1IAA+0.5 mg·L-1IBA為宜，生根率達93%。

消毒處理環節的消毒劑含量越高，污染率越低，褐化率越高，成活率越低。通過試驗發現，增殖培養基中細胞分裂素6-BA含量越高，分化苗玻璃化程度越高，達到0.8 mg·L-1就會產生嚴重的玻璃化現象；同時加入KT，玻璃化癥狀消失，這與組培中植物激素種類影響玻璃化發生的理論基本一致。在生根試驗中，各個激素的種類和配比至關重要，是影響植株能否成活的關鍵。本實驗分化苗的須根不多，這還要考慮到各方面因素，如基礎培養基的影響、是否需要添加活性炭和有機物、苗的生理狀態，以及培養的環境條件等因素。