氣相色譜法測定替比培南酯中的殘留溶劑

李 龍，顏世強，郭 偉*，鄭德強

（1.山東達因海洋生物制藥有限公司，山東 威海 264300；2.山東省藥學科學院，山東 濟南 250101 ）

替比培南酯是替比培南的前體藥物，口服后被酯酶水解釋放出母核替比培南，與細菌青霉素結合蛋白（PBP）結合，抑制細胞壁的合成，是可口服的碳青霉烯類抗生素。2009年首次在日本上市，本品具有廣譜抗菌性、活性強、副作用小等優點，臨床上用于治療兒童上呼吸道與耳鼻喉感染的治療[1-3]。

本品在合成過程中使用到乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚、N,N-二甲基甲酰胺等有機溶劑，根據2015年版中國藥典規定，對于合成所使用的有機溶劑應建立合理的檢測方法對殘留溶劑進行監控，并且其含量不得大于規定限度[4]。本文采用毛細管柱的氣相色譜法，以頂空方法進樣，測定替比培南酯中殘留溶劑。進行了精密度、回收率等方法學驗證，結果表明本法簡單、快捷、靈敏、可靠。

1 儀器和試劑

1.1 儀器

安捷倫7890A型氣相色譜儀，7697E型頂空進樣器，DB-624毛細管色譜柱（30 m×0.53 mm，3.0μm，安捷倫科技有限公司）。

1.2 試劑

替比培南酯（由本單位自制，批號：20130301，20130302，20130303）；乙腈（TEDIA，批號：16125072，含量：99.7 %）；無水乙醇（康科德，批號：160722，含量：99.9 %）；甲基叔丁基醚（TEDIA，批號：12110633，含量：99.0 %）；N,N-二甲基甲酰胺（科密歐，批號：20060701，含量：99.0 %）；乙酸乙酯，正丁醇，異丙醇（國藥集團，批號：20150916，T20100517，20151204，含量分別為99.5 %，99.5 %，99.0 %）。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液1制備 精密稱取乙腈8.6 mg，無水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚各約100 mg，置入同一50 ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液3 ml，置入25 ml量瓶，加N,N-二甲基乙酰胺稀釋至刻度，搖勻，精密量取2.0 ml，置入頂空瓶，密封，即得。

2.1.2 對照品溶液2制備 精密稱取N,N-二甲基甲酰胺11 mg，置入已加入二甲基亞砜約40 ml的50 ml量瓶，再加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 ml，置入10 ml量瓶，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 ml，置入10 ml頂空瓶，密封，即得。

2.1.3 供試品溶液1制備 精密稱取本品約100 mg，置入頂空瓶，精密加入N,N-二甲基乙酰胺2.0 ml，振搖使溶解，密封，即得。

2.1.4 供試品溶液2制備 精密稱取本品約0.5 g，置入10 ml量瓶，加入二甲基亞砜溶解并定稀釋刻度，精密量取2 ml，置入頂空瓶中，密封，即得。

2.2 色譜條件

2.2.1 乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚測定色譜條件 色譜柱為6 %氰丙基苯基-94 %二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管柱（DB-624，30 m×0.53 mm，3.0 μm）；柱溫為起始溫度40 ℃，以5 ℃/min速率升溫至70 ℃，再以30 ℃/min速率升溫至220 ℃，保持2 min；進樣口溫度200℃；檢測器溫度為250 ℃；載氣為氮氣，流速為2 ml/min。頂空瓶平衡溫度為90 ℃，平衡時間為30 min，進樣體積為1.0 ml。

2.2.2N,N-二甲基甲酰胺測定的色譜條件 色譜柱為6 %氰丙基苯基-94 %二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管柱（DB-624，30 m×0.53 mm，3.0 μm）；柱溫為程序升溫，起始溫度100 ℃，以15 ℃/min速率升溫至230 ℃，保持3 min；進樣口溫度220 ℃；檢測器溫度為250 ℃；載氣為氮氣，流速為2 ml/min。頂空瓶平衡溫度為110 ℃，平衡時間為20 min，進樣體積為1.0 ml。

3 結果與討論

3.1 頂空平衡溫度的選擇

本實驗首先使用同一色譜條件檢測乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚、N,N-二甲基甲酰胺，頂空平衡溫度90 ℃，但N,N-二甲基甲酰胺在此平衡溫度下，難以揮發至檢出濃度。因此采用平衡溫度110 ℃單獨檢測N,N-二甲基甲酰胺[5-6]。

3.2 柱溫選擇

3.2.1 乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚 選取乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚對照品溶液，按表1對色譜柱柱溫進行篩選，通過考察對照品的最小分離度，最終確定了選取色譜條件3作為乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚最終測定條件。

表1 升溫程序對最小分離度影響

3.2.2N,N-二甲基甲酰胺 由于N,N-二甲基甲酰胺響應較低[7-8]，通過改變頂空平衡溫度與頂空瓶體積，以期提高其響應值，最終確定了條件4作為測定條件。

表2 頂空條件對N, N-二甲基甲酰胺峰面積影響

3.3 方法學驗證[9]

3.3.1 線性 分別取乙腈、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、甲基叔丁基醚和N,N-二甲基甲酰胺對照品儲備液，配制濃度為6.85～34.24 μg/ml，0.083～0.416，0.083～0.415，0.083～0.415，0.083～0.416，0.084～0.420 mg/ml和1.089～10.89 μg/ml的對照品溶液，按2.2項色譜條件檢測，各組分的線性回歸方程及相關系數見表3。

表3 線性回歸方程及相關系數

3.3.2 精密度 按照分析步驟平行測定6份樣品，記錄峰面積（A）與保留時間（RT），計算RSD，結果見表4。

表4 殘留溶劑系統精密度試驗結果

3.3.3 回收率 按2.1.1項方法制備對照品貯備液，精密量取對照品貯備液2.4，3.0，3.6 ml，用N,N-二甲基乙酰胺分別稀釋成25 ml溶液，稱取替比培南酯約100 mg，共9份，置10 ml頂空瓶中，分別加入上述對照品溶液2 ml，密封，作為回收率供試品溶液1，依法測定。按2.1.2項方法制備對照品貯備液，精密稱取替比培南酯約0.5 g，共9份，置入10 ml量瓶，分別加入上述溶液1.6，2.0，2.4 ml，各3份，加入二甲基亞砜溶解并定容至刻度，搖勻，作為回收率供試品溶液2，精密量取回收率供試品溶液2各2 ml置入10 ml頂空瓶，依法測定，結果見表5。

3.3.4 檢測限 量取對照品貯備液，進行適當稀釋，使各成分產生約3倍基線噪音的信號。乙醇、異丙醇、乙腈、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、正丁醇和N,N-二甲基甲酰胺的最低檢測濃度分別為0.84，0.83，0.173，0.083，0.167，2.084和1.089 μg/ml。

表5 回收率試驗結果

3.4 樣品分析

按上述方法對多批樣品中殘留溶劑進行檢測，采用外標法進行定量，結果見表6。

表6 有機殘留溶劑測定結果