莫達(dá)非尼片在健康人體的藥代動(dòng)力學(xué)研究

黃 露，蘇 瓊，郭源源

（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬梨園醫(yī)院，湖北 武漢 430077）

莫達(dá)非尼（Modafinil）是一種覺(jué)醒促進(jìn)劑，用于治療發(fā)作性嗜睡病、阻塞性睡眠呼吸暫停相關(guān)的白天過(guò)度嗜睡等紊亂癥。莫達(dá)非尼也在適應(yīng)癥外被廣泛使用為認(rèn)知增強(qiáng)劑。國(guó)內(nèi)外在健康志愿者中進(jìn)行的莫達(dá)非尼藥動(dòng)學(xué)研究表明，口服莫達(dá)非尼后吸收迅速，血藥濃度約2～4 h達(dá)峰值，在人體內(nèi)分布非常廣泛，表觀分布容積達(dá)0.9 L/Kg；莫達(dá)非尼主要在肝臟中水解滅活，代謝產(chǎn)物經(jīng)腎臟排出體外，平均總血漿清除率約為0.6 ml/(min·kg)-1，多次給藥的血漿平均有效半衰期約為15 h[1-4]。本文研究莫達(dá)非尼片在中國(guó)健康男性體內(nèi)單次給藥和多次給藥的藥動(dòng)學(xué)行為[5]，為國(guó)內(nèi)外臨床應(yīng)用莫達(dá)非尼片提供藥動(dòng)學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（包括LC-20AT泵，SPDM20A型紫外檢測(cè)器，SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，日本島津）；數(shù)據(jù)采集：LCsolution工作站；AUW220D分析天平（日本島津）；H-101渦旋振蕩器（上?？岛蹋?；BP16型高速冷凍離心機(jī)（北京白洋醫(yī)用離心機(jī)公司）。

1.2 藥品與試劑

莫達(dá)非尼片（規(guī)格：100 mg/片，批號(hào)：20181101，北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司）；莫達(dá)非尼對(duì)照品（純度：＞99 %，批號(hào)：100156-199801，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；卡馬西平對(duì)照品（純度：＞99 %，批號(hào)：100142-199503，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；乙腈，甲醇（色譜純，天津科密歐公司）；雙蒸水（自制）；磷酸（分析純，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司）；鹽酸（分析純，上海山浦化工）。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)方案

因擬將莫達(dá)非尼片開(kāi)發(fā)成為治療男性少精和弱精癥藥物，本試驗(yàn)選取30名健康男性志愿者作為受試對(duì)象，并隨機(jī)分為3組，分別為低、中、高劑量組。試驗(yàn)前經(jīng)全面體檢證明心、肺、肝、腎功能正常。無(wú)煙酒等不良嗜好。試驗(yàn)前2周至試驗(yàn)期間不用任何其他藥物。3組受試者年齡分別為（22±1.75），（23±1.58），（22±1.91）歲，身高分別為（1.74±0.07），（1.67±0.06），（1.70±0.06）m，體質(zhì)量分別為（66.81±8.62），（58.86±7.45），（59.75±8.23）kg。試驗(yàn)方案經(jīng)醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)審批同意。受試者均在試驗(yàn)前由本人簽署知情同意書(shū)。

受試者服藥前禁食過(guò)夜至少10 h，于次日早晨空腹給藥，200 ml溫水送服。給藥2 h后方可飲水，4 h后統(tǒng)一進(jìn)食低脂清淡飲食。

單次口服給藥：低、中、高劑量分別為100，200，400 mg，給藥1次，并于給藥前0 h及給藥后0.25，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，6，8，12，24，36，48，60 h 于肘靜脈采血3 ml。

多次口服給藥：?jiǎn)未慰诜o藥中劑量組在單次給藥結(jié)束后即入組多次給藥試驗(yàn)。多次給藥組每天給藥1次，每次200 mg，每天早晨同一時(shí)間點(diǎn)給藥，連續(xù)給藥7 d。于給藥后的第3，4，5，6天早晨服藥前采血，第7天服藥前及服藥后0.25，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，6，8，12，24，36，48，60 h于肘靜脈采血3 ml。血標(biāo)本在30 min內(nèi)離心（3000 r/min） 10 min，收集血漿，保存于-70 ℃冰箱待測(cè)[6-7]。

試驗(yàn)期間受試者均在監(jiān)護(hù)室內(nèi)，避免劇烈運(yùn)動(dòng)，禁服茶、咖啡類(lèi)和醇類(lèi)飲料，由研究人員及臨床醫(yī)師實(shí)施醫(yī)療監(jiān)護(hù)。觀察試驗(yàn)期間可能出現(xiàn)的不良事件，并做出詳細(xì)記錄和及時(shí)處理。試驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行全面檢查，對(duì)比試驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，并作出異常判斷。

2.2 HPLC測(cè)定血藥濃度

2.2.1 色譜條件 固定相為T(mén)hermo ODS-2色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈：水（磷酸調(diào)pH 3.0）＝30：70，流速為1.0 ml/min，柱溫為25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 以甲醇為溶劑，配制莫達(dá)非尼標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為0.8，2，10，25，50，100，120，150 μg/ml。另用甲醇配置濃度為12 μg/ml的卡馬西平標(biāo)準(zhǔn)液（內(nèi)標(biāo)液）。標(biāo)準(zhǔn)溶液均于室溫密封保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.3 樣品處理 精密吸取血漿樣本200 μl，加入20μl內(nèi)標(biāo)溶液（12 μg/ml），加入10 mol/L的鹽酸溶液20 μl，渦旋混勻后加入甲醇0.4 ml，渦旋混勻5 min，14 000 r/min離心10 min，取上清20 μl進(jìn)樣，按2.2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣分析。

2.2.4 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 按2.2.3項(xiàng)血漿處理方法和2.2.1項(xiàng)色譜條件分析，所得色譜圖見(jiàn)圖1。莫達(dá)非尼和內(nèi)標(biāo)卡馬西平的保留時(shí)間分別為8.3，13.0 min，血漿中雜質(zhì)不干擾測(cè)定，峰形良好。

圖1 莫達(dá)非尼專(zhuān)屬性色譜圖

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量限 吸取空白血漿180 μl，加入莫達(dá)非尼系列標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μl，配制成相當(dāng)于莫達(dá)非尼血藥濃度為0.08，0.2，1.0，2.5，5.0，10.0，12.0，15.0 μg/ml的血漿樣本，按2.2.3項(xiàng)方法操作，以莫達(dá)非尼與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值（Y）對(duì)莫達(dá)非尼濃度（C）進(jìn)行回歸運(yùn)算（權(quán)重為1/C2），所得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0.381C-0.011（r=0.9994），線性范圍為0.08～15.0 μg/ml。

2.2.6 方法精密度和相對(duì)回收率 吸取空白血漿180μl，加入莫達(dá)非尼標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μl，配制成相當(dāng)于莫達(dá)非尼血藥濃度為0.2，2.5，12.0 μg/ml的低、中、高濃度血漿樣本，按2.2.3項(xiàng)方法操作，每個(gè)濃度平行處理5份，連續(xù)測(cè)定3 d，計(jì)算相對(duì)回收率及日內(nèi)、日間精密度，結(jié)果見(jiàn)表1。相對(duì)回收率為將藥物與內(nèi)標(biāo)峰面積比代入回歸方程計(jì)算所得的莫達(dá)非尼濃度與理論濃度的比值。由表1可見(jiàn)，日內(nèi)、日間精密度均小于9.00 %，相對(duì)回收率RSD均小于5.0 %，符合試驗(yàn)要求。

2.2.7 絕對(duì)回收率 吸取雙蒸水180 μl，加入莫達(dá)非尼低、中、高濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μl，配制成終濃度為0.2，2.5，12 μg/ml的標(biāo)樣各5份，按2.2.3項(xiàng)方法自“加入20 μl內(nèi)標(biāo)溶液”起操作，記錄峰面積；分別測(cè)定低、中、高濃度（0.2，2.5，12 μg/ml）血漿樣本，每個(gè)濃度配制5份，記錄峰面積。絕對(duì)回收率為低、中、高濃度血漿樣本峰面積與相應(yīng)濃度標(biāo)樣峰面積均值的比值，見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，絕對(duì)回收率RSD均小于6.0 %，符合試驗(yàn)要求。

2.2.8 穩(wěn)定性考察 配制莫達(dá)非尼血藥濃度為0.2，2.5，12.0 μg/ml的低、中、高濃度血漿樣本，分別對(duì)血漿樣本室溫放置穩(wěn)定性（室溫放置6 h）、凍融穩(wěn)定性（反復(fù)凍融3次）、長(zhǎng)期冷凍穩(wěn)定性（-70℃冰箱保存4周）及血漿樣本處理后穩(wěn)定性（室溫放置12 h）進(jìn)行考察。各濃度穩(wěn)定性考察的RSD均小于7.0 %，表明血漿樣本在上述條件下放置穩(wěn)定。

2.3 質(zhì)控樣本制備和質(zhì)量控制

按2.2.6項(xiàng)方法配制莫達(dá)非尼血藥濃度分別為0.2，2.5，12.0 μg/ml的血漿樣本，在受試者血樣分析過(guò)程中均勻分配，進(jìn)行分析質(zhì)量控制。結(jié)果表明所有質(zhì)控樣本偏差均小于15.0 %，表明該分析方法穩(wěn)定。

2.4 數(shù)據(jù)分析

采用非房室模型參數(shù)估算方法，應(yīng)用藥理學(xué)計(jì)算軟件DAS2.0計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，應(yīng)用SPSS15.0軟件包進(jìn)行參數(shù)方差分析（ANOVA），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)為P＜0.05。單次口服給藥低、中、高3個(gè)劑量組及中劑量單次和多次口服給藥兩個(gè)劑量組間藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的比較：AUC0-t、AUC0-∞、Cmax經(jīng)劑量校正后采用方差分析；Tmax、Vz/F、CLz/F、t1/2z直接采用方差分析[8-9]。結(jié)果見(jiàn)表2、圖2～4。

單因素方差分析結(jié)果表明，單次口服莫達(dá)非尼片100，200，400 mg后，3個(gè)劑量組主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)劑量校正后血藥濃度-時(shí)間（0-t）曲線下面積（AUC0-t/D）、劑量校正后血藥濃度-時(shí)間（0-t∞）曲線下面積（AUC0-∞/D）、劑量校正后達(dá)峰濃度（Cmax/D）、t1/2z、CLz/F和Vz/F組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明單次口服莫達(dá)非尼片在男性健康受試者體內(nèi)代謝規(guī)律符合線性藥動(dòng)學(xué)特征。

中劑量組多次給藥達(dá)穩(wěn)態(tài)時(shí)的AUC0-t、AUC0-∞比單次給藥時(shí)升高，單次和多次給藥組間AUC0-t、AUC0-∞、Cmax、t1/2z、CLz/F和Vz/F差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；AUCss與單次給藥時(shí)AUC0-t相近；AUC和Cmax的蓄積因子RAUC和RCmax分別為（1.43±0.16）和（1.28±0.29），與文獻(xiàn)報(bào)道相近[1-2]，結(jié)果見(jiàn)表3。

表1 莫達(dá)非尼精密度及回收率考察（n=5）

表2 單次和多次口服莫達(dá)非尼片后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)和統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果（n=10）

圖2 單次口服莫達(dá)非尼片血藥濃度-時(shí)間曲線

圖3 單次和多次組第7天口服莫達(dá)非尼片血藥濃度-時(shí)間曲線

圖4 多次口服莫達(dá)非尼片穩(wěn)態(tài)血藥濃度-時(shí)間曲線

2.5 臨床觀察

受試者在試驗(yàn)進(jìn)行過(guò)程中，由研究人員及臨床醫(yī)師實(shí)施醫(yī)療監(jiān)護(hù)，觀察試驗(yàn)期間可能出現(xiàn)的不良事件，并做出詳細(xì)記錄和采取有效措施及時(shí)處理。本次試驗(yàn)中30名受試者發(fā)生不良反應(yīng)少且輕微（4/30），單次給藥受試者中有兩例輕微紅疹發(fā)生，持續(xù)時(shí)間未超過(guò)8 h；多劑量組出現(xiàn)輕微胃部不適和輕微胸悶各一例，持續(xù)時(shí)間均未超過(guò)2 h。發(fā)生不良反應(yīng)受試者均未用藥自行好轉(zhuǎn)。試驗(yàn)過(guò)程中監(jiān)測(cè)受試者生命體征平穩(wěn)，試驗(yàn)結(jié)束后入組受試者進(jìn)行全面體檢，結(jié)果表明各項(xiàng)生化指標(biāo)無(wú)異常，表明莫達(dá)非尼具有良好的耐受性和安全性[10-11]。

3 結(jié)論

莫達(dá)非尼片在中國(guó)健康男性體內(nèi)呈線性藥動(dòng)學(xué)特征，其血漿有效半衰期較長(zhǎng)；采用多次給藥方案，可盡快獲得穩(wěn)態(tài)血藥濃度。在100～400 mg劑量范圍內(nèi)，口服莫達(dá)非尼片的不良反應(yīng)較少且輕微，表明莫達(dá)非尼在中國(guó)健康人體中耐受性良好。

表3 單次和多次口服莫達(dá)非尼片后蓄積因子（R）比較