肉類中氟苯尼考和氟苯尼考胺的殘留量檢測

李娜

摘 要：采用液質聯合檢測方法檢測雞肉中氟苯尼考及氟苯尼考胺殘留量，利用堿性乙酸乙酯等完成色譜及質譜條件優化處理，完成電噴霧離子源正負模式切換，檢測出其中的氟苯尼考及氟苯尼考胺殘留量，并通過不同水平的加標處理，觀察回收率。該檢測方法較為簡便，具有較高的應用價值。

關鍵詞：氟苯尼考；氟苯尼考胺；殘留

氟苯尼考作為氯霉素的隔代產品，在禽類及畜類動物感染疾病控制中應用廣泛，具有良好的抗菌能力，安全性較高。隨著研究的不斷深入發現，氟苯尼考會導致胚胎毒性反應，動物在使用后易發生厭食及腹瀉等反應。不正當的使用氟苯尼考也會導致禽類、畜類、水產品等動物體內殘留藥物，對食用者的健康造成不利影響。氟苯尼考代謝物是以氟苯尼考胺的形態存在，國家規定其最大殘留量為100μg/ kg，可利用氟苯尼考代謝物等對氟苯尼考胺進行檢測。在檢測過程中構建高靈敏度的檢測流程，從而滿足檢測需求。在本次研究過程中，對動物體中的氟苯尼考胺殘留量進行檢測，并形成以下報告。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇Dr.Ehrenstorfer公司的甲醇、氨水、乙酸乙酯、正己烷和一級水等配置儲備液，并在4 ℃的環境中保存，選擇標準規格的氟苯尼考、氟苯尼考胺、D5-氯霉素。

選擇Agilent企業所生產的1200超高液相色譜儀-6410串聯四級質譜，其中配置噴霧型離子源及U；traTurrax T25均質器，選擇應用能效良好的20PR-520離心機。

1.2 方法

在50 mL的具塞容量管中加入2 g氟苯尼考、正己烷等，加入一定量的D5-氯霉素或者污無水硫酸鈉，在管中繼續加入15 mL乙酸乙酯及小劑量氨水。拿出規格等同的另一個具塞容量管，其中氨水及乙酸乙酯的劑量不發生變化，加入一定量的洗滌液進行混合，經過1 min的離心處理后，觀察上清液的變化，并將氨水及乙酸乙酯上清液倒入錐形容量瓶，加入5 mL的正己烷渦旋30 s，在處理后將上層部分過濾，向其中添加正己烷溶液，從而繼續離心處理，等待的進一步檢測。

對色譜條件進行優化，色譜柱規格為2.1 mm×50 mm，1.8 μm，流動相中甲醇與水的比例為70∶30.色譜柱溫度控制在40 ℃，樣本進入量為10 μL，流動速度控制在0.2 mL/min。

對質譜條件進行優化，干燥氣的質量控制在9 μL /min，干燥溫度控制在350 ℃，噴霧氣體的壓力控制在35 psi，MRM的相關參數見表1。

2 結果

2.1 前處理方法

氟苯尼考融水能力差，采取有機溶液對樣本進行提取，查閱相關研究[1]發現，可利用乙酸乙酯進行提取。氟苯尼考的化學結構與氟苯尼考胺較為相似，可通過堿化乙酸乙酯進行提取，均質提取耗時較短，具有較高的回收率。在均質過程中洗滌刀頭的乙酸乙酯溶液能作為第二次提取液，避免樣本的肆意浪費，也能提升回收率。經過旋轉蒸發后，分別加入1、3、5 mL的水，但1 mL水的溶解效率低下，3、5 mL的回收率類似，可采取3 mL水的方式降低氟苯尼考胺的檢出限。

2.2 色譜及質譜條件的優化

氟苯尼考胺是堿性物質，在C18色譜柱上容易脫落，選擇Zorbax Eclipse Plus C18色譜柱，該色譜柱能滿足堿性物質的檢測需求，并保證理想的峰形。在本次檢測過程中，將流動相甲醇-水作為優化對象，氟苯尼考具有較強的保留性能，氟苯尼考胺保留能力相對較弱，60 s內便可出峰形，在檢測過程中流速控制在0.2 mL/min即可，有利于延長保留時間。在檢測過程中為區分雜質，避免反復實驗，甲醇與水的比例可控制在70∶30，這種比例能保持良好的分離度。5 min時雜質部分流出，避免對后續檢測的樣本造成影響[2]。

氟苯尼考質譜條件較為成熟，在定性離子及負模式電噴霧離子源下能展開檢測。氟苯尼考胺中含有一定量的NH2，選擇ESI+離子掃描模式，并分析氟苯尼考胺的結構，提取m/z 230、m/z130作為定性離子，最大值為230m/z，能避免雜質的影響。氟苯尼考胺先出峰，D5-氯霉素最后出峰，ESI-模式調整為負模式，從而在氟苯尼考胺出峰前利用切換閥對色譜柱進行急性調節，開啟廢液閥，進一步縮小雜質的干擾影響[3]。

2.3 標準曲線

對氟苯尼考及氟苯尼考胺系列標準溶液進行檢測，其濃度范圍分別為0.5～45 μg/L、2～50 μg/L，結合同位素標準測試方法，得到的曲線為：氟苯尼考曲線y=1.854 1x-0.008 3（r=0.985 4）；氟苯尼考胺曲線方程為y=1.325 4x+0.111 2（r=0.956 5）。

2.4 回收率及精密度

在雞肉中加入不同質量的混合標準液體，經過15 min的靜置，并展開相應的回收試驗，每項操作6次，對精密度進行計算，見表2。

自上表中能觀察到，氟苯尼考及氟苯尼考胺回收率處于87.1%～110.3%范圍，RSD處于1.2%～6.1%范圍，根據3倍信噪比進行處理，氟苯尼考及氟苯尼考胺檢出限是1 μg/kg及5 μg/kg。

3 討論

在肉類食品氟苯尼考及氟苯尼考胺檢測過程中，通過液相色譜串聯質譜法檢測，具有較高的靈敏度及準確度，檢出限較低，具有良好的應用價值。在本次實驗過程中，采取的檢測方法較為快捷，有效率較高，能進行重復檢測，可同時對氟苯尼考及氟苯尼考胺進行測定，在大產量檢測中具有應用價值。

參考文獻

[1]王君.養殖場牛肉樣品中氟苯尼考以及氟苯尼考胺的殘留檢測分析[J].農家科技，2015（S1）：66.

[2]張守明.高效液相色譜法檢測豬肉中氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺的殘留[D].吉林：吉林大學，2017.

[3]李瑩瑩，宋永青，趙榕，等.液質聯用檢測魚肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺的殘留量[J].食品科學，2019， 31（12）：219-222.