循環miR-26b水平變化與老年高血壓患者左心室肥厚及心功能的關系

馮崴，張俊，武文君，高蘭蘭

目前心血管疾病是全球范圍內導致死亡的重要原因，而高血壓則是心血管疾病的重要危險因素。近年來，隨著人們生活水平的提高和飲食結構的改變，我國高血壓患病人數激增。作為一種常見的慢性病，高血壓以動脈血壓持續升高為主要特征，長期發病會使心臟結構及功能發生改變，左心室肥厚及其舒張功能減退是高血壓的早期表現，隨著病情進展則會出現心室收縮功能減退及心腔擴大，最終導致心力衰竭的發生[1]。左心室肥厚(LVH)是高血壓導致的一種常見的靶器官損害，以心肌纖維增多為主要表現，目前其病理生理機制尚未完全闡明，但最新文獻報道，微小RNA(miRNAs)參與了心臟發育和重構、心律失常、心肌肥厚等心血管生理病理過程[2]。循環miRNAs即血清和血漿中的miRNAs，在高溫、酸堿性、RNA酶等惡劣條件下均能保持極高的穩定性[3]。關于循環微小RNA-26(miR-26b)水平變化與老年高血壓患者左心室肥厚及心功能的關系報道較為少見，現檢測老年高血壓患者循環miR-26b水平變化及超聲心動圖參數并分析其相關性，以期為高血壓左心室肥厚的早期發現及診斷提供一定指導，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年1月—2019年10月蚌埠醫學院第二附屬醫院心內科診治老年高血壓患者132例，男80例，女52例，年齡62～85歲，本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準，患者及家屬知情同意并簽署同意書。

1.2 選擇標準 (1)診斷標準：高血壓診斷標準參照2018年修訂版“中國高血壓防治指南”[4]，不使用降壓藥物，非同日 3次測量診室血壓，舒張壓≥90 mmHg和/或收縮壓≥140 mmHg。(2)納入標準：年齡在60歲以上；符合以上高血壓診斷標準；均為原發性高血壓患者；未接受降血壓藥物治療；對本研究積極配合者。(3)排除標準：原發性醛固酮增多癥、嗜鉻細胞瘤、腎性高血壓等繼發性高血壓患者；先天性心臟畸形；合并肥厚性心肌病、心臟瓣膜病、收縮性心力衰竭等心臟??；某些對心率有影響的疾病或已服用影響心率的藥物；有吸煙、飲酒及糖尿病史的患者；合并嚴重的肝、脾、肺、腎等系統疾??；代謝性疾病和腫瘤患者；接受瓣膜置換術、冠狀動脈搭橋術、起搏器植入術及近1年有外科手術史的患者。

1.3 觀測指標與方法

1.3.1 臨床資料：收集患者的基本資料，包括性別、年齡、體質量指數(BMI)、病程、入院時舒張壓(DBP)和收縮壓(SBP)、誘因等。

1.3.2 循環miR-26b水平檢測：患者入院次日清晨空腹采取肘靜脈血5 ml，離心獲取血漿并移入無RNA酶滅菌管中，用Trizol法提取血漿總RNA并用分光光度計進行定量，對miRNAs 3'末端加Poly (A)處理后進行逆轉錄反應，將合成的cDNA為模板采用SYBR Green Ⅰ法進行實時定量聚合酶鏈式反應(RT-PCR)。miR-26b上游引物: 5'-ACACTCCAGCTGGGTTTGGTCCCCTTCAAC-3'，下游引物: 5'-GGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG-3'；同時以U6作為內參基因，上游引物: 5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，下游引物: 5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。以2-ΔΔCt公式計算miR-26b的相對表達量。

1.3.3 生化指標檢測：取空腹肘靜脈血5 ml，離心后獲得血清，采用奧林巴斯AU400全自動生化分析儀檢測空腹血糖(FPG)、三酰甘油 (TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶 (AST)、血肌酐(SCr)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)、高敏C反應蛋白(hs-CRP)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)。

1.3.4 超聲心動圖檢查： 采用美國 GEVivid7型彩色超聲儀，探頭頻率2.5～3.5 MHz，測量左心室舒張末期內徑(LVEDD)、室間隔厚度(IVST)、左心室后壁厚度(LVPWT)、左心室射血分數(LVEF)及二尖瓣舒張早期血液流速峰值(E峰)及舒張晚期流速峰值(A峰)，并計算E/A值。取測量3個心動周期的平均值。左心室心肌質量(LVM) 采用Devereux公式計算，LVM =1.04[(LVEDD+IVST +LVPWT)3-LVEDD3]-13.6)，左心室質量指數(LVMI) 再根據體表面積(BSA)計算，LVMI=LVM/BSA。根據美國超聲心動圖協會推薦的標準[5]，男性 LVMI >125 g/m2，女性 LVMI >110 g/m2即診斷為LVH。

2 結 果

2.1 2組臨床資料比較 根據循環miR-26b水平檢測結果，132例患者miR-26b的相對表達量為4.56～16.93，以中位數7.62為分組界值，<7.62納入miR-26b低水平組(對照組)76例，≥7.62納入miR-26b高水平組(觀察組)56例。2組患者的性別、年齡、BMI、病程、DBP、SBP、高血壓分級、誘因及生化指標FPG、TG、TC、LDL-C、HDL-C、HbA1c、ALT、AST、SCr、CK、CK-MB、LDH、hs-CRP、BUN、UA比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 2組患者臨床特征比較

2.2 2組超聲心動圖參數比較 與對照組比較，觀察組IVST、LVPWT、LVMI水平及LVH病例數均減少，E/A值升高(P<0.01)。2組患者LVEDD、LVEF比較差異無統計學意義 (P>0.05)，見表2 。

表2 2組患者超聲心動圖參數比較

2.3 循環miR-26b水平與IVST、LVPWT、LVMI及E/A的相關性 循環miR-26b水平與IVST、LVPWT和LVMI均呈負相關(r=-0.493、-0.526、-0.789，P均<0.001)，與E /A 值呈正相關(r=0.421,P<0.001)。

2.4 2組NYHA心功能分級比較 根據NYHA標準評估結果，對照組心功能減退患者72例(94.74%)，高于觀察組26例(41.08%) (χ2=42.861，P=0.000)，見表3。

表3 2組患者NYHA心功能分級比較 [例(%)]

2.5 老年高血壓患者左心室肥厚的影響因素分析 Logistic多因素分析結果顯示，年齡、IVST、LVPWT及LVMI增加是導致老年高血壓患者左心室肥厚發生的獨立危險因素(P<0.05)； miR-26b水平升高則是保護因素(P<0.01)，見表4。

表4 老年高血壓患者左心室肥厚影響多因素Logistic分析

注：自變量賦值，年齡>75歲=1，≤75歲=0；IVST增加=1，未增加=0；LVPWT增加=1，未增加=0；LVMI男性>125 g/m2、女性>110 g/m2=1，男性≤125 g/m2、女性≤110 g/m2=0； miR-26b≥7.62=1，<7.62=0

2.6 循環miR-26b水平對老年高血壓患者左心室肥厚的診斷價值 ROC曲線分析結果顯示，miR-26b曲線下面積為0.836，95%CI為0.757～0.916(P<0.05) ，最佳臨界值為8.83， 敏感度為81.4%，特異度為78.9%，約登指數為0.603。miR-26b對老年高血壓患者LVH有較高的診斷價值，見圖1。

圖1 miR-26b診斷老年高血壓患者LVH的ROC曲線圖

3 討 論

LVH 是高血壓的常見并發癥之一，長期高血壓可增加心臟左心室后負荷，因而導致慢性適應性改變，即LVH的發生[6-7]。心肌重塑及質量增加、心室壁增厚是LVH的重要特征。研究顯示高血壓患者合并LVH 時發生心律失常的比率顯著高于單純高血壓患者[8]。有文獻報道[9]，高血壓合并LVH 患者冠狀動脈儲備能力顯著下降，導致急性心肌缺血事件極易發生從而使死亡風險增加。高血壓伴發LVH是心腦血管事件和死亡發生的獨立危險因素，因此及早準確地診斷LVH臨床意義重大。目前常用的心電圖、磁共振成像及超聲心動圖等診斷方法均有一定的弊端或局限性[10]，臨床上急需找到一種簡單并且特異度和敏感度高的診斷方法。

miRNAs為一類在生物進化過程中高度保守的內源性非編碼小分子RNA，在轉錄后水平具有調控基因表達的作用[11]。在細胞的分化、增殖、遷移、凋亡等多種病理生理過程中均有miRNAs參與。以往文獻報道[12]，miRNAs在消化系統、神經系統及生殖系統等疾病中均取得了較大的研究進展。近年來研究發現[13]，miRNAs參與了心臟發育和重構，并且與心肌纖維化、心肌肥大及心力衰竭等多種心血管疾病密切相關。早期研究發現[14]，冠心病患者血漿中miR-26b的表達水平顯著低于健康人，miR-26b有望成為輔助診斷冠心病的標志物。趙欣等[15]報道，在建立的小鼠心房纖維化—房顫模型中，miR-26通過抑制心房組織中血管緊張素Ⅱ/Kruppel樣因子4/轉化生長因子-β (angiotensin / Kruppel like factor 4/transforming growth factor-β,Ang Ⅱ/KLF 4/TGF-β)信號通路的激活，從而起到抗房顫、心房纖維化的效應。本研究檢測了132例老年高血壓患者靜脈血miR-26b水平，結果發現其相對表達量在4.56～16.93之間，中位數為7.62。

為探討miR-26b水平與LVH發生的關系，本研究分析顯示，與對照組相比，觀察組室間隔厚度、左心室后壁厚度、左心室質量指數及左心室肥厚病例數均顯著減少 (P<0.01)。室間隔厚度和左心室后壁厚度決定了左心室質量指數，而左心室質量指數可直接作為衡量左心室肥厚的重要臨床指標，左心室質量指數值越大則左心室肥厚越嚴重[16]。該結果提示循環miR-26b水平越低，越容易發生左心室肥厚，且與伍崇海[17]報道相符。二尖瓣舒張早期血液流速峰值下降，舒張晚期流速峰值升高，則兩者比值(E/A值)下降，E/A值<1，說明左心室舒張功能下降[18]。文獻報道[19]，老年高血壓伴發左心室肥厚患者常出現左心室舒張功能下降。本研究顯示，2組患者E/A值均<1，且對照組顯著低于觀察組 (P<0.01)。提示2組患者均出現左心室舒張功能不全，且miR-26b水平越低越嚴重。最新研究表明，抑制miR-26b后可使脂肪細胞分化被有效抑制，抑制miR-26b對細胞增殖有促進作用。推測可能是miR-26b水平較低的老年高血壓患者，更利于心肌細胞增殖且發生代償性肥大，心肌間質膠原隨之增多，心肌發生纖維化樣變，持續肥厚的心肌出現功能和生化反應異常，使其順應性和僵硬度均發生改變，進而心臟舒張功能出現進行性下降，最終導致心臟舒張功能不全。相關性分析結果顯示，循環miR-26b水平與室間隔厚度、左心室后壁厚度和左心室質量指數均呈負相關(P均<0.01)，與E /A 值呈正相關(P<0.01)。根據NYHA標準評估顯示，miR-26b低水平組心功能減退比例顯著高于miR-26b高水平組(P<0.05)。以上結果均證實miR-26b水平低的老年高血壓患者更容易合并左心室肥厚及心功能減退。

多因素分析結果顯示，年齡、室間隔厚度、左心室后壁厚度及左心室質量指數增加是導致老年高血壓患者左心室肥厚發生的獨立危險因素(P<0.05)；miR-26b水平升高是保護因素(P<0.05)。有研究指出[20]，隨著年齡的增加，心肌細胞體積增大，心臟膠原成分和心臟質量增加，長期超負荷壓力及左心室適應性反應衰竭可能導致了左心室肥厚的發生，因而老年患者LVH的發生率升高。室間隔厚度和左心室后壁厚度增加，左心室質量指數隨之增加，當男性 LVMI >125 g/m2，女性 LVMI >110 g/m2時即診斷為左心室肥厚。以往研究報道，大鼠心臟肥厚組織中miR-26a和miR-26b表達下調，并且通過對靶點糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)進行抑制以調控心臟肥厚過程[21]。本研究結果提示，miR-26b在老年高血壓患者心室肥厚過程亦發揮了調控作用，但其作用機制有待進一步研究。ROC曲線分析顯示，曲線下面積為0.836，95%CI為0.757～0.916，最佳臨界值為8.83，敏感度81.4%，特異度78.9%，提示miR-26b相對表達量<8.83即可診斷為心室肥厚，且具有較高的敏感度和特異度。

綜上，循環miR-26b水平與老年高血壓患者左心室肥厚呈負相關，與左室舒張功能呈正相關，是老年高血壓患者發生左心室肥厚伴舒張功能不全的保護因素，同時可作為潛在的生物標志物用于老年高血壓患者左心室肥厚的診斷。今后需進一步開展循環miR-26b對左心室肥厚發揮保護作用機制的研究。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

馮崴：設計研究方案，實施研究過程，論文撰寫；張?。禾岢鲅芯克悸?，分析試驗數據，論文審核；武文君、高蘭蘭：實施研究過程，資料搜集整理，論文修改