不同硒源和劑量對成年馬的代謝和血液學特征的影響

郭永清，楊 鳳，趙宇飛，張小宇

（內蒙古農業大學職業技術學院，內蒙古包頭 014109）

硒在動物體內具有免疫調節和抗炎作用，主要介導免疫刺激性作用，調節α和β亞基受體的表達，特別是T和B淋巴細胞（李冰心等，2018）。硒的抗炎作用依賴于其影響細胞氧化還原狀態的能力和硒化合物清除活性氧的能力。硒補充劑有兩種形式：無機硒（如亞硒酸鈉）或有機硒（如硒代蛋氨酸），后者是酵母硒中硒的主要形式。硒代蛋氨酸不同于亞硒酸鹽，其在吸收過程中通過蛋氨酸轉運機制在腸道膜上進行主動轉運，可以非特異性地整合到機體蛋白中（孟田田等，2017）。但無論來源如何，硒在被同化為硒代半胱氨酸并隨后并入硒蛋白前必須經歷一個代謝轉換（徐巧林等，2017）。關于補充硒對血液學變量影響的研究結果很少，而且常常相互矛盾。本研究旨在研究酵母硒及相應劑量的無機硒對成年馬血液系統、酶活性和血漿氧化狀態的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與飼養管理 將25匹（13.5±4.5）年的成熟馬根據體重隨機分為5組，每組5個重復，每個重復1匹，分別飼喂對照組日糧（不添加硒）、0.2、0.3和 0.4 mg/kg酵母硒及 0.3 mg/kg亞硒酸鈉，試驗共進行112 d。日糧硒設計值與分析值結果見表1。每天早上對馬補充硒，硒補充劑以石粉為載體，每天為每匹馬提高6 g。

表1 日糧硒設計與分析值

1.2 樣品采集 分別于第 1、28、56、84 和 112 天早晨飼喂前對每匹馬靜脈穿刺采集血液樣本。立即將血液樣本放入冰浴中保存，直到采集后大約30 min內進行處理。

1.3 樣品分析 血液樣品一部分離心分離血漿，血漿用試劑盒測定相應的生化指標。一部分全血用于血液學指標分析。

1.4 統計分析 試驗數據采用SAS軟件進行單因素方差分析，同時采用線性回歸研究酵母硒的劑量效應。用多因素方差分析日糧處理及采血時間的交互效應，采用Tukey法進行多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 不同硒源和添加水平對馬血漿能量和蛋白代謝相關指標的影響 由表2可知，飼料中添加亞硒酸鈉和不同水平的酵母硒對馬血漿葡萄糖、膽固醇、甘油三酯、尿素、肌酸酐、總蛋白和白蛋白濃度的影響均無顯著差異（P＞0.05）。

表2 硒源和水平對馬血漿能量和蛋白代謝相關指標的影響

2.2 不同硒源和添加水平對馬血漿礦物質濃度、酶活及抗氧化標記物含量的影響 由表3可知，對照組與各處理間馬臨床健康狀況無顯著差異（P＞ 0.05）。0.4 mg/kg酵 母 硒 和 0.3 mg/kg亞硒酸鈉組較對照組顯著提高了血漿鈉濃度（P＜0.05），且日糧處理與時間對血漿氯濃度的影響具有顯著交互作用（P＜0.05），但各處理對其他礦物質濃度無顯著影響（P＞0.05）。此外，不同硒源和添加水平對大部分血漿酶活和抗氧化標記物含量無顯著影響（P＞0.05）。但日糧添加0.3和0.4 mg/kg酵母硒較對照組和0.3 mg/kg亞硒酸鈉組顯著降低了血漿總抗氧化物水平（P＜0.05），同時隨著日糧酵母硒添加水平的升高，血漿總抗氧化物含量表現為顯著劑量-依賴效應（P＜0.05）。日糧處理顯著影響血漿谷氨酰胺轉移酶活性（P＜0.05），其中對照組和0.2 mg/kg酵母硒組較0.3 mg/kg亞硒酸鈉組顯著提高了血漿谷氨酰胺轉移酶活性（P＜0.05）。

2.3 不同硒源和添加水平對馬血液學指標的影響 由表4可知，0.3 mg/kg亞硒酸鈉組血液淋巴細胞和嗜酸性粒細胞數最低（P＜0.05），而0.4 mg/kg酵母硒組中性粒細胞與淋巴細胞比值及中性粒細胞占比最低（P＜0.05）。0.4 mg/kg酵母硒組和0.3 mg/kg亞硒酸鈉組較對照組顯著提高了淋巴細胞占比（P＜0.05）。此外，對照組較酵母硒組顯著提高了紅細胞平均血紅蛋白濃度（P＜0.05），但與亞硒酸鈉組無顯著差異（P＞0.05）。且0.2 mg/kg酵母硒組紅細胞分布寬度最高（P ＜ 0.05）。

表3 硒源和水平對馬血漿礦物質濃度、酶活及抗氧化狀態標記物含量的影響

表4 硒源和水平對馬血液學指標的影響

3 討論

硒蛋白參與的生理功能很多，如甲狀腺活性、肌肉代謝、抗氧化活性、免疫反應和紅細胞穩定性，主要是酶的重要組成部分（Surai，2006）。本研究中血漿肌酸酐值不受硒源和添加水平的影響，處于Amory等（2005）報道的參考范圍。炎癥狀態不受補充硒源或劑量的影響，這是由于血漿銅藍蛋白和結合珠蛋白濃度沒有顯著差異，這與Hanzawa等（2002）的研究結果一致。在酶活性中，只有谷氨酰胺轉移酶活性受到處理的影響顯著，此外，總膽紅素濃度不受處理的影響，表明肝膽未受損傷（Boone等，2005）。

日糧處理對肌肉細胞損傷相關酶活性無顯著影響可以用本研究的實驗條件來解釋，本試驗中馬只進行輕微運動，并沒有導致任何肌肉細胞代謝標志物的增加，避免了與細胞膜完整性相關酶活性的變化（Kozat，2007）。硒在保護細胞膜和細胞器免受氧化損傷方面的作用已得到很好證明（Surai，2006），正是這種功能幫助維持肌肉和血管的完整性。

馬運動誘導的氧化應激被認為會加速肌肉疲勞和肌纖維損傷，導致不同動物種類的運動耐受不良和表現不佳（Sen和 Packer，2000），硒營養因其對運動耐受的影響而受到關注。Demoffarts等（2005）報道，給高強度訓練的馬和在采血前一天參加比賽的馬長期口服抗氧化劑可以提高親水性、親脂性和酶性抗氧化劑的血液容量，部分平衡由運動引起的氧化應激。本研究中馬的活動水平非常輕微，因此，在本研究實驗條件并沒有太大的應激來誘導可能的氧化損傷，導致不同硒源和添加劑量對相關標記物水平無顯著影響。

4 結論

本研究結果表明，日糧硒的來源和濃度對肝膽炎癥狀態和反映細胞損傷的酶活性無顯著。隨著酵母硒添加量的增加，血漿總抗氧化物水平呈線性下降，說明酵母硒在預防自由基形成和斷鏈抗氧化物質方面具有改善作用。酵母硒對淋巴細胞和中性粒細胞數量的輕微影響表明其具有一定的免疫調節作用。