天水大櫻桃葉總黃酮體外抗氧化性能研究

廖天江

【摘要】通過超聲輔助方法提取櫻桃葉總黃酮并進行純化，考察了大櫻桃葉總黃酮的總抗氧化能力、清除超氧陰離子自由基能力、清除羥自由基能力，與抗氧化劑維生素C比較得出，大櫻桃葉黃酮具有良好的抗氧化效果，清除羥自由基的能力優于維生素C，但清除超氧陰離子自由基和總體抗氧化能力低于維生素C。

【關鍵詞】大櫻桃葉? 黃酮? 抗氧化

本文探討了超聲輔助方法提取天水地區種植的大櫻桃葉中黃酮類化合物的條件，并對大櫻桃葉黃酮與常見的抗氧化劑維生素C的抗氧化性能做比較，為大櫻桃葉黃酮在食品、保健品等領域的應用奠定了理論基礎。

一、材料與方法

（一）儀器

紫外分光光度計;旋轉蒸發器;恒溫水浴鍋;數控超聲波清洗器;酒精計;電子天平;高速臺式離心機;數顯恒溫水浴鍋;電熱恒溫鼓風干燥箱。

（二）材料與試劑

大櫻桃葉黃酮粗提物，由本研究的前期實驗提供。蘆丁對照品、乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、雙氧水、鄰苯三酚、VC等均為國產分析純。

（三）方法

（1）大櫻桃葉總黃酮的提取及純化。稱取粉碎后大櫻桃葉粉末50g 于三角瓶中，加入1L70%乙醇于70 ℃下進行提取，提取過程中進行超聲提取，超聲功率250W，超聲時間60min，不斷震搖。提取后真空抽濾，真空凍干得到粗提物粉末。經粗提后的大櫻桃葉黃酮用65%的乙醇溶解后，經DM-101大孔樹脂柱進行純化，收集純化液，真空旋蒸得到大櫻桃葉總黃酮純化物。加蒸餾水稀釋至濃度為1.0mg/m L櫻桃葉黃酮溶液的樣品儲備液。再配制1.0mg/m L的維生素C溶液的樣品儲備液。

（2）總抗氧化活性的測定一磷鉬絡合物法。將樣品儲備液用蒸餾水稀釋得到濃度分另4為0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.2mg/mL、0.25mg/mL、和0.3mg/mL的大櫻桃葉黃酮溶液、Vc溶液，作為樣品液。磷鉬試劑的終濃度為0.6mol/L濃硫酸，28 mmol/L磷酸鈉和4mmol/L鉬酸銨的溶液。在一系列10mL的比色管中加入0.4mL上述樣品液和4.0mL磷鉬試劑，迅速搖勻后置于95℃水浴中，恒溫90 min。在695nm波長下測吸光度A。平行測定3次，取其平均值。

（3）大櫻桃葉黃酮純化物對羥自由基清除率的測定。將大櫻桃葉黃酮純化物依次按1∶5、1∶10、1∶15、1∶20 和1∶25 稀釋，得到不同質量濃度的樣品醇溶物。精確吸取3mL不同質量濃度（0.509、0.768、0.914、1.691、3.318 mg·L-1）樣品醇溶物于試管中，依次向試管中加入2mL0.1mol·L-1FeSO4、2mL0.1mol·L-1水楊酸、2mL0.1mol·L-1H2O2，用蒸餾水定容至10mL并搖勻，在37 ℃條件下恒溫加熱30min后在510nm波長處測定其吸光度Aa;將體系中樣品用3mL無水乙醇代替，在相同條件下測定其吸光度A0;將體系中H2O2用蒸餾水代替在相同條件下測定其吸光度Ab。

（4）大櫻桃葉黃酮純化物對超氧陰離子自由基清除率的測定。取5支10mL離心管各加入pH8.2的50mmol/LTris-HC1緩沖液4.5mL，再分別加入大櫻桃葉黃酮純化物的樣品醇溶物0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，然后依次加蒸餾水0.8、0.6、0.4、0.2、0.0mL，混勻后在25℃恒溫水浴中保溫20min，取出后立即加入在25 ℃預熱過的3mmol/L鄰苯三酚溶液0.3mL啟動反應。5min后加10mol/L鹽酸溶液0.2mL終止反應。同時另取5支離心管，按上述步驟依次加入Tris-HCl緩沖液、黃酮提取液和蒸餾水，然后分別加10 m mol/L鹽酸溶液0.3 m L，5 min后加10 mol/L鹽酸溶液0.2 m L終止反應，搖勻。在325 nm波長處檢測吸光度。

二、結果與分析

（1）大櫻桃葉黃酮純化物總抗氧化活性分析。磷鉬絡合物法的測定原理是Mo（VI）被抗氧化物質還原生成綠色的Mo（V）絡合物，其最大吸收波長為695nm。抗氧化物質活性越強，測定的吸光度值越大。通過與抗氧化劑維生素C相比，大櫻桃葉黃酮的抗氧化性總體比維生素C弱。

（2）大櫻桃葉黃酮純化物清除羥自由基能力分析。實驗結果表明，大櫻桃葉黃酮純化物和VC清除羥自由基的能力與質量濃度呈上升趨勢。在相同濃度下，大櫻桃葉黃酮純化物對羥自由基的清除效果優于 Vc，當大櫻桃葉黃酮純化物的濃度為35μg/mL 時，大櫻桃葉黃酮純化物對羥自由基的清除率達到87.5%。

（3）大櫻桃葉黃酮純化物清除超氧陰離子自由基能力分析。實驗結果表明，大櫻桃葉黃酮純化物和VC清除羥自由基的能力與質量濃度呈上升趨勢。如圖 1所示，在相同濃度下，大櫻桃葉黃酮純化物清除超氧陰離子自由基能力低于維生素C當大櫻桃葉黃酮純化物的濃度為35 μg/mL 時，大櫻桃葉黃酮純化物對羥自由基的清除率達到71.2%。

三、結論

本文通過對大櫻桃葉總黃酮的總抗氧化能力、清除超氧陰離子自由基能力、清除羥自由基（·OH）能力等方面的考察表明，大櫻桃葉黃酮具有良好的抗氧化效果，清除·OH的能力優于維生素C，但清除超氧陰離子自由基和總體抗氧化能力略低于維生素C。因此，大櫻桃葉黃酮類化合物是一種很好的抗氧化劑，可作為天然的抗衰老保健品、食品抗氧化劑和具有輔助療效的藥物添加劑使用，在天然抗氧化劑和醫藥保健相關領域具有廣闊的開發前景。

參考文獻：

[1]李晨，姜子濤 ，李榮. 櫻桃葉黃酮的微波提取及抗氧化性質的研究[J].中國食品添加劑， 2012，4：103～108.

[2]王垣芳，等.櫻桃葉黃酮的體外抗氧化活性[J].食品與生物技術學報， 2014，33 （9）：966～970.

[3]齊善厚.茵陳黃酮的抗氧化及鎮痛作用研究[J].現代食品科技，2013，29（3）： 501～504.

[4]吳立軍.天然藥物化學[M].北京：人民衛生出版社，2007：60～107