穿心蓮有效成分的提取與分離研究

馬超，楊靜

（南充市林業科學研究所，四川南充 637000）

傳統中藥穿心蓮為爵床科穿心蓮屬植物穿心蓮（Andrographis paniculata Nees）的干燥地上部分，具有清熱解毒、涼血、消腫等作用，用于感冒發熱、咽喉腫痛、口舌生瘡、泄瀉痢疾、熱淋澀痛、癰腫瘡痛和毒蛇咬傷等[1-2]。穿心蓮內酯在臨床試用于上呼吸道炎癥和細菌痢疾療效較好，且副作用較小，是目前抗菌、抗炎、抗鉤端螺旋體的良藥。穿心蓮的主要成分為多種內酯類化合物，統稱為穿心蓮總內酯。現在市面上的穿心蓮片多為穿心蓮植物的浸膏所制。

穿心蓮內酯的提取方法多種多樣，主要有水提、堿水提和醇提。水提成本較低，但有效成分含量也較低；堿水提操作不當極有可能使有效成分變性，因為穿心蓮總內酯不耐酸堿性；醇提取有效成分含量高，但提取成本高。綜合比較后，進一步研究醇提工藝有更加長遠的意義[3-8]。

在穿心蓮總內酯的分離過程中，可采用液相色譜（HPLC）、高速逆流色譜（HSCCC）、薄層色譜（TLCS）和柱色譜法等。經典的硅膠柱色譜分離效能不如HPLC和HSCCC高，但是其操作簡單，對實驗室的要求不高，分離成本相對較低，且一次性上樣量較大。因此，對其分離條件和溶劑進行探討，并用于穿心蓮內酯的粗分離具有廣闊的應用前景[9-10]。

1 材料與方法

1.1 儀器及設備

RE-3000A新型旋轉蒸發儀，上海市旋轉蒸發儀廠家；SHB—Ⅲ循環水式多用真空泵，北京科偉永興儀器有限公司。

帶活塞20 L廣口瓶、與旋轉蒸發儀磨口配套的250 mL圓底燒瓶、1000 mL燒杯、橡膠管、抽濾瓶、布氏漏斗、抽濾紙、150 mL錐形瓶、薄層層析缸、硅膠板、點樣毛細管、鉛筆、小廣口瓶、電熱帽、鑷子、脫脂棉、鐵架臺、玻璃棒。

1.2 藥品

穿心蓮植物干燥地上部分5 kg；活性炭為分析純，由康宏碳業提供；碘晶體、200～300目硅膠、丙酮、環己烷、甲苯、甲醇、氯仿、乙醇（95%）、乙醚、乙酸乙酯、乙丙醇、異戊醇、正丁醇和正己烷均為分析純，由成都市科隆化工試劑廠提供。

1.3 試驗方法

1.3.1 穿心蓮總內酯的提取

取穿心蓮地上部分2.5 kg切成小段后，用95%乙醇）分兩次在常溫下浸泡，每次1天，合并提取液備用。將提取液用旋轉蒸發儀濃縮至1 L時，用活性炭脫色去膠質，用真空抽濾法將活性炭溶液分離。取溶液繼續濃縮至小體積且無晶體析出。

1.3.2 尋找總內酯各組分粗分離合適的展開劑

取濃縮提取液進行薄層層析：首先將硅膠板用玻璃刀切成適當寬度，畫上相同寬度的點樣線和溶劑層析底線。

在點樣線上用點樣毛細管點上少量且相同的提取樣本，分別用丙酮、甲苯、甲醇、氯仿、乙醇、乙醚、乙酸乙酯、異丙醇、異戊醇、正丁醇、正己烷進行薄層層析分析，并將這11種溶劑分別標記為溶劑1～11。層析過程中，使點樣線到溶劑前沿的距離基本相同，完成后取出風干待用。

將小廣口瓶放入電熱帽中，加入兩粒碘晶體，微加熱至碘蒸氣形成，將各層析硅膠板放入廣口瓶中顯色，取出照相記錄。

2 結果與分析

2.1 總內酯各組分粗分離展開結果

如圖1所示為總內酯各溶劑層析圖，對圖中層析現象進行描述，匯總于表1。由表1可知，在分離的過程中，乙酸乙酯是最好的單組分洗脫劑。

圖1 總內酯各溶劑層析圖

乙酸乙酯作為單組分洗脫劑，其分離的各組分Rf值（物質移動的距離和溶劑線距離的比值）如表2所示（點的編號按照點樣線到溶劑前沿方向依次編號）。

表1 總內酯各溶劑層析現象記錄表

表2 乙酸乙酯層析板上各點的Rf值

另外極性較大的甲醇和非極性較大的氯仿、甲苯以及正己烷配合調節極性也可成為洗脫劑。配比不同濃度的非極性溶液做薄層層析，試驗得甲醇和氯仿是配比較好的混合洗脫劑，這兩種溶液不同配比下薄層分析結果如圖2和表3所示。

根據圖中的分離結果，各種比例的溶劑分離出的物質的Rf值如表4所示（點的編號按照點樣線到溶劑前沿方向依次編號）。由表3和表4可知，氯仿、甲醇的最佳比例為8∶1，其分出了6個較清楚的組分，且彼此距離均勻。

圖2 氯仿甲醇溶液不同配比下層析圖

表3 氯仿甲醇溶液不同配比下層析現象描述

表4 氯仿甲醇溶液不同比例下各點的Rf值

3 硅膠柱色譜分離

3.1 裝柱

將色譜柱1/3體積的硅膠與適量氯仿混合，攪拌以除去空氣泡，徐徐傾入色譜管中，然后再加入氯仿，將附著于管壁的硅膠洗下，使色譜柱表面平整。在色譜柱頂部加入一小部分脫脂棉，并用玻璃棒壓平。再繼續加入部分氯仿，使其沿色譜柱自然流下，直到液面和柱表面相平。

3.2 試樣的加入

將提取的樣品溶于少量層析時使用的氯仿中，再沿色譜管壁緩緩加入。

3.3 洗脫

試樣加入后，先加入氯仿進行洗脫，當樣品進入硅膠后，再用氯仿、甲醇比例為8∶1的溶液進行洗脫，在層析柱的下端按時間用試管收集提取液，每分鐘換一支試管。一邊分離一邊檢測Rf值。當檢測到表4中最大的Rf值時，則表示組分分離完全，然后用乙酸乙酯洗脫。同樣，每一分鐘換一支試管，一直洗脫至檢測到表2中最大的Rf值時，完成洗脫。

3.4 分離物的檢測

將收集的分離液點樣以相應的洗脫劑作溶劑進行薄層層析，層析結果由碘顯色。將Rf值基本一致的分離液合并，旋轉蒸發，濃縮至小體積，即為相應溶劑作洗脫劑的粗分離物。

用氯仿甲醇溶液經硅膠柱色譜洗脫出5個組分，在經硅膠板薄層層析時，各個組分的Rf值如表5所示，其Rf值與相同同比例下氯仿甲醇薄層層析混合提取物上的各個組分的Rf值基本一致。

表5 分離組分用洗脫劑做薄層層析的Rf值

在用乙酸乙酯溶液作洗脫劑進行洗脫的過程中，出現一個新的組分，其薄層層析的Rf值為0.13，與乙酸乙酯薄層層析混合物時，混合物上最靠近點樣線的點的Rf值基本一致。

4 結論

通過薄層層析的方法對硅膠柱色譜的提取物進行洗脫分離，找到較好的洗脫劑為乙酸乙酯和比例為8∶1的氯仿甲醇溶液。用此混合液作洗脫劑，可以提取物分離5種物質，再用乙酸乙酯繼續洗脫，可分離出單個組分。