牛結(jié)節(jié)性皮膚病研究進(jìn)展

賽力克·巴合達(dá)吾列提 ， 劉 存 ， 劉硯涵 ， 如扎·阿布德哈勒克 ， 梁 琳 ， 崔尚金

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所 ， 北京 海淀 100193 ； 2.新疆阿勒泰地區(qū)動(dòng)物疾病控制與診斷中心 ， 新疆 阿勒泰 836500 ； 3.山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 ， 山東 濟(jì)南 250010 ； 4.阿勒泰地區(qū)職業(yè)技術(shù)學(xué)校 ， 新疆 阿勒泰 836500 ； 5.農(nóng)業(yè)部獸用藥物與獸醫(yī)生物技術(shù)北京科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站 ， 北京 海淀 100193)

牛結(jié)節(jié)性皮膚病(Lumpy skin disease,LSD)是由牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)引起的高度傳染性牛病毒性疾病[1]。該病被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列入須通報(bào)動(dòng)物疫病名錄，其也是《中華人民共和國(guó)進(jìn)境動(dòng)物檢疫疫病名錄》中的一類(lèi)動(dòng)物傳染病[2-3]。LSD起源于非洲，1929年首次在贊比亞發(fā)現(xiàn)LSD疫情[4]。1989年，LSD首次出現(xiàn)跨洲傳播，傳入中東地區(qū)并逐漸蔓延，但LSD疫情在該地區(qū)多以散發(fā)為主；2013年，LSD再次出現(xiàn)跨湖傳播，傳入歐洲并且蔓延趨勢(shì)擴(kuò)大[5]。2015年以后，LSD疫情在歐洲及歐亞交界處不斷蔓延，哈薩克斯坦、俄羅斯等我國(guó)周邊國(guó)家LSD疫情的暴發(fā)致使LSD疫情輸入我國(guó)的風(fēng)險(xiǎn)增加[5]。2019年，我國(guó)首次在新疆確診LSD疫情，隨后福建、江西、廣東、安徽、浙江等省份也報(bào)導(dǎo)了LSD疫情的發(fā)生，給養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[6-7]。如今LSD已傳入我國(guó)，應(yīng)重視該病宣傳及防控，阻止其在我國(guó)牛群中的蔓延，防止其進(jìn)一步危害我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)。

1 病原學(xué)特征

在病毒分類(lèi)學(xué)上，牛結(jié)節(jié)性皮膚病(LSDV)與綿羊痘病毒(Sheep pox virus，SPPV)、山羊痘病毒(Goat pox virus，GTPV)同屬于痘病毒科(Poxviridae)脊椎動(dòng)物痘病毒屬亞科(Chordopoxvirinae)山羊痘病毒屬(Capripoxvirus)[8]。LSDV病毒粒子呈磚型或者卵圓型。不同pH條件下，LSDV表現(xiàn)出不同的病毒粒子形態(tài)。pH 6.5時(shí)，負(fù)染后可觀察到與M型牛痘病毒病毒粒子表面結(jié)構(gòu)相似的LSDV病毒粒子；pH 8.6時(shí)，負(fù)染后可觀察到C型牛痘病毒形態(tài)相似的膠囊狀LSDV病毒粒子；中性條件下，負(fù)染后可觀察到M型和C型2種類(lèi)型的病毒粒子[9]。

LSDV基因組為線性雙股DNA，大小145～152 kb，高AT含量(約73%)，由編碼序列區(qū)及其兩端的末端反向重復(fù)序列(Inverted terminal repeat，ITR)組成[10-11]。與SPPV基因組的ITR區(qū)域組成相似，LSDV 的ITR序列區(qū)長(zhǎng)約2 418 bp且其最終端的核苷酸序列區(qū)包含24 bp的不完美串聯(lián)重復(fù)取和15 bp 的不完美串聯(lián)重復(fù)取[11]。LSDV編碼區(qū)編碼156個(gè)假定基因[11]，可分為早期基因和晚期基因。早期基因在病毒感染細(xì)胞后立即啟動(dòng)mRNA的轉(zhuǎn)錄合成，在細(xì)胞內(nèi)持續(xù)約9 h，而基因的轉(zhuǎn)錄在病毒感染細(xì)胞后約10 h逐漸轉(zhuǎn)向晚期基因轉(zhuǎn)錄，且晚期基因的轉(zhuǎn)錄需要DNA的復(fù)制[10]。當(dāng)DNA復(fù)制被阻止后，LSDV內(nèi)源性的晚期基因是不會(huì)轉(zhuǎn)錄的，而當(dāng)DNA復(fù)制發(fā)生后，LSDV內(nèi)源性晚期基因的轉(zhuǎn)錄被激活[10]。

LSDV可在羔羊和犢牛的腎、睪丸、腎上腺、甲狀腺等原代細(xì)胞、牛腎細(xì)胞、牛肌肉細(xì)胞、LT細(xì)胞中傳代，引起細(xì)胞病變，產(chǎn)生胞內(nèi)包涵體[12-13]。LSDV也可通過(guò)雞胚成纖維細(xì)胞傳代，在雞胚內(nèi)增殖可產(chǎn)生痘斑[14]。LSDV可感染家兔，在全身形成丘疹。LSDV對(duì)環(huán)境抵抗力非常強(qiáng)，室溫下可長(zhǎng)期存活。在壞死的皮膚結(jié)節(jié)中存活33 d或更長(zhǎng)時(shí)間，在干燥的皮痂中存活35 d，在風(fēng)干的皮革中至少存活18 d[2]。 直射陽(yáng)光或紫外線可滅活病毒，但受污染的動(dòng)物棚屋，可能會(huì)存活數(shù)月[2]。LSDV對(duì)熱敏感，在55 ℃ 2 h或65 ℃ 30 min可滅活病毒，但4 ℃的葡萄糖鹽水或細(xì)胞培養(yǎng)基中可存活4～6個(gè)月，-80 ℃ 及以下條件可長(zhǎng)期保存[12]。耐凍融，反復(fù)凍融處理不影響病毒滴度。對(duì)酸或堿敏感，但保存在37 ℃、pH 6.6～8.6條件下5 d，病毒滴度不會(huì)顯著降低。對(duì)氯仿、乙醚等有機(jī)溶劑敏感。對(duì)苯酚(2%)、福爾馬林(0.5%～1%)、石碳酸(3%)、衛(wèi)康(2%)、次氯酸鈉(2%～3%)等敏感，可快速的使病毒喪失感染力[2,12]。

2 流行病學(xué)

牛是LSDV的自然宿主，不同品種的牛均易感[15]。長(zhǎng)角羚羊、跳羚、長(zhǎng)頸鹿等野生動(dòng)物也可感染[16-17]。LSD發(fā)病率在3%～85%，通常死亡率在1%～5%[18]，但在嚴(yán)重疫情情況下，LSD死亡率可達(dá)45%～75%[18-19]。我國(guó)發(fā)生LSD疫情后，采取的緊急流行病學(xué)調(diào)查顯示，該場(chǎng)疫情波及新疆多個(gè)市縣，發(fā)病率在17%～36.2%，病死率為0.8%[3]。

患病牛和攜帶病毒吸血蟲(chóng)媒是LSDV主要的傳染源[12]。與患病動(dòng)物的直接接觸和吸血蟲(chóng)媒(如蚊、蒼蠅、蜱蟲(chóng)等)傳播是LSDV重要的傳播途徑[20]。受污染的精液、飼料、共用被病牛污染的水槽、工具等也存在傳播風(fēng)險(xiǎn)[20-24]。通過(guò)被污染的牛奶或患病母牛乳房和乳頭上的皮膚損傷可以傳染給小牛。LSD主要發(fā)生在夏季，多雨、潮濕天氣，與蚊子、蜱蟲(chóng)、蒼蠅等叮咬蟲(chóng)媒動(dòng)物大量繁殖有關(guān)。在一定程度上，也與牛群季節(jié)性的遷移有關(guān)。

3 臨床癥狀與剖檢病變

3.1 臨床癥狀 LSDV感染可形成急性感染、亞臨床感染和慢性感染。試驗(yàn)感染時(shí)，潛伏期為4～14 d， 而自然感染時(shí)，潛伏期1～4周[25]。LSDV感染后，引起發(fā)熱(40～41 ℃)、精神沉郁、食欲不振、呼吸困難、流涎過(guò)多、眼鼻分泌物增多、結(jié)膜炎等癥狀[26-27]，引起淺表淋巴結(jié)腫大，觸摸敏感。急性感染病例，垂皮和四肢遠(yuǎn)端水腫。在發(fā)熱癥狀出現(xiàn)后48 h內(nèi)，發(fā)病牛身體上可觀察到皮膚結(jié)節(jié)，頭、頸、四肢、乳房、生殖器和會(huì)陰等部位皮膚容易發(fā)生，隨著疾病的發(fā)展，皮膚結(jié)節(jié)覆蓋全身[26-27]。皮膚結(jié)節(jié)呈圓形、隆起，具有堅(jiān)固性和局限性，有時(shí)累及皮下組織，甚至底層肌肉[27]。大結(jié)節(jié)可能壞死并纖維化，形成的疤痕長(zhǎng)久保留。發(fā)生嚴(yán)重疾病的牛，恢復(fù)緩慢。臨床癥狀輕微甚至觀察不到臨床癥狀的亞臨床感染和慢性感染牛容易被忽略，容易隨牛的貿(mào)易和轉(zhuǎn)運(yùn)造成LSDV傳播。

3.2 剖檢病變 靜脈注射攻毒后，不同牛只間感染發(fā)病程度不同。產(chǎn)生LSD典型臨床癥狀的牛，剖檢可見(jiàn)淋巴結(jié)腫大、充血、局灶性出血；在牛垂皮、四肢和皮膚病變周?chē)膩喖?xì)胞脂肪組織中稻草狀、膠凍狀滲出物；氣管黏膜和氣管旁淋巴結(jié)表面出現(xiàn)出血灶；睪丸組織水腫、出現(xiàn)稻草狀、膠胨狀滲出物和出血灶；部分感染動(dòng)物肺臟出現(xiàn)病灶[28]。我國(guó)確診的LSD疫情中，對(duì)發(fā)病牛剖檢發(fā)現(xiàn)多器官腫大、出血(心、肝、脾、肺、腎)，氣管黏膜充血、含大量黏液，淋巴結(jié)腫大，病變部位有膠胨樣滲出物[3]。

4 診斷

4.1 鑒別診斷 患病嚴(yán)重病例，具有LSD典型的臨床癥狀，易于診斷。臨床癥狀輕緩的病例與牛皰疹性乳腺炎(牛皰疹病毒2型感染)、牛丘疹性口炎、蚊蟲(chóng)叮咬等難以區(qū)分，需借助實(shí)驗(yàn)室診斷進(jìn)行確診[2]。

4.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.2.1 病原鑒定方法 病原鑒定方法主要包括PCR方法、病毒分離和電鏡觀察。PCR方法是最簡(jiǎn)便快速的鑒定方法，并且樣品采取方便，皮膚結(jié)節(jié)或結(jié)痂、唾液、鼻腔分泌物、血液等均適用該方法[2,26]。病毒分離，消耗時(shí)間長(zhǎng)，但可以鑒定活病毒存在。電鏡觀察用于鑒別典型的痘病毒，但不可區(qū)分種屬。

4.2.2 血清學(xué)鑒定 常用的血清學(xué)檢測(cè)方法，包括間接免疫熒光試驗(yàn)、ELISA和蛋白印跡等。血清學(xué)方法無(wú)法區(qū)分山羊痘病毒屬的3種病毒，無(wú)法對(duì)病毒種進(jìn)行特異性的鑒定[2,26]。病毒中和試驗(yàn)是檢測(cè)山羊痘病毒抗體的金標(biāo)準(zhǔn)。

5 危害與防控

我國(guó)畜牧業(yè)已取得長(zhǎng)足發(fā)展，已經(jīng)進(jìn)入以“規(guī)模化、數(shù)字化、物聯(lián)網(wǎng)化”為特征的畜牧業(yè)新時(shí)代，提出了“綠色、高效、健康、可持續(xù)發(fā)展”的新要求。動(dòng)物疫病的發(fā)生和流行是阻礙畜牧業(yè)發(fā)展的最重要因素。牛結(jié)節(jié)性皮膚病(LSD)是《中華人民共和國(guó)進(jìn)境動(dòng)物檢疫疫病名錄》中的一類(lèi)動(dòng)物傳染病，對(duì)養(yǎng)牛業(yè)具有嚴(yán)重的威脅，導(dǎo)致重大經(jīng)濟(jì)損失。LSD的直接經(jīng)濟(jì)危害，主要表現(xiàn)在導(dǎo)致奶牛產(chǎn)奶量降低、導(dǎo)致母牛流產(chǎn)、公牛暫時(shí)或永久性不育，造成動(dòng)物皮膚損傷而影響毛皮質(zhì)量低下，造成動(dòng)物死亡[27-28]。雖然LSD致死率不高，從1%～5%不等，但其容易導(dǎo)致牛其他病原的繼發(fā)感染，導(dǎo)致死亡率上升[2]。LSD間接經(jīng)濟(jì)損害，主要體現(xiàn)于限制了活動(dòng)物和動(dòng)物源性產(chǎn)品的貿(mào)易，增加了疫苗接種、消毒等生產(chǎn)費(fèi)用支出，導(dǎo)致生產(chǎn)成本增加[27]。

LSD疫情已在我國(guó)多地發(fā)生。針對(duì)病原來(lái)源的流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國(guó)發(fā)生的多起LSD疫情的可能的原因包括與邊境地區(qū)帶毒嗜血蟲(chóng)媒傳播，境外輸入帶毒種畜，由蟲(chóng)媒或進(jìn)出人員、交通工具等引入病毒等[3,6-7]。為阻止LSD疫情進(jìn)一步蔓延，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部制定了《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范》，為早確診、早處置和快速阻斷疫情傳播提供了保障。

從歐洲、西亞的LSD防控經(jīng)驗(yàn)得出，成功防控和根除LSD有賴(lài)于及早發(fā)現(xiàn)該病，然后迅速制定和實(shí)施相應(yīng)的防疫措施，同時(shí)開(kāi)展疫苗接種[27]。節(jié)肢動(dòng)物媒介是LSDV主要的傳播途徑，攜帶病毒節(jié)肢動(dòng)物會(huì)導(dǎo)致LSDV更難凈化。撲滅感染動(dòng)物的延遲可能導(dǎo)致節(jié)肢動(dòng)物的污染并導(dǎo)致疾病傳播，而無(wú)癥狀感染牛的遺漏也是造成該病傳播的潛在風(fēng)險(xiǎn)。在LSD防控中，除必要的防控措施實(shí)施外，也應(yīng)加強(qiáng)宣傳，提高基層工作人員和牧民對(duì)疾病的判斷能力，切實(shí)落實(shí)“早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早確診、早處置”。

6 展望

LSDV可感染所有牛，可致感染牛死亡、生產(chǎn)性能下降、皮張利用價(jià)值降低等，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。當(dāng)前，LSD已傳入我國(guó)并已在我國(guó)多地確診該疫情發(fā)生，對(duì)我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。處于一線的基層工作人員，是突發(fā)疫情應(yīng)急處置系統(tǒng)中的“感應(yīng)器”，是“早發(fā)現(xiàn)”措施落實(shí)的關(guān)鍵，因此加強(qiáng)對(duì)LSD的宣傳，對(duì)提高基層工作人員、養(yǎng)殖人員和牧民對(duì)疫病的認(rèn)知和落實(shí)“早處置”疫情是必要的。吸血蟲(chóng)媒攜帶病原是LSDV難以?xún)艋匾蛑唬趽錃⒋_診牛的同時(shí)，加強(qiáng)環(huán)境及吸血蟲(chóng)媒的監(jiān)測(cè)，對(duì)LSD疫情的有效阻斷、凈化具有重要的意義。