滿藥柞樹皮對番瀉葉致瀉大鼠的藥效學研究

張笑梅，陳光暉

（承德醫學院河北省中藥研究與開發重點實驗室，河北 承德）

0 引言

滿藥柞樹皮（mongolian oak bark），為殼斗科植物蒙櫟的樹皮，味微苦，澀，平。主要分布于華北、東北及山東等地，資源豐富。《吉林中草藥》和《全國中草藥匯編》中有記載：柞樹皮具有清熱解毒，消腫利濕的效用，主治細菌性痢疾，急性胃腸炎，小兒消化不良，黃疸，急慢性支氣管炎等疾病[1]。本實驗通過研究柞樹皮對番瀉葉致瀉大鼠的治療作用，來探究柞樹皮的止瀉藥效效果。

1 實驗材料及儀器

1.1 實驗動物

SD 大鼠60 只，雌雄各半，體重（240±20）g，SPF 級，購自遼寧長春生物技術有限公司，許可證號：SCXK（遼）2010-0001。于承德醫學院動物中心屏障環境內飼養。

1.2 藥物與試劑

柞樹皮，由承德醫學院中藥藥理教研室提供。番瀉葉，購自北京同仁堂藥店。藿香正氣水，太極牌，批號：18011024023。

1.3 實驗儀器

旋轉蒸發儀（N-1100），低溫冷卻循環泵（DLSB-10/20），循環水式真空泵（SHZ-D Ⅲ），凍干機（LGJ-22D），ExcelsiorTM E S 全自動組織脫水機，Histocentre 3TM 組織包埋機等。

2 實驗方法

2.1 藥物制備

2.1.1 柞樹皮凍干粉的制備

取750g 柞樹皮生藥煎成水煎劑，藥液抽吸過濾后進行減壓濃縮放入凍干機，凍干48h 得到柞樹皮凍干粉71.944g（1g 凍干粉相當于10.425g 生藥）。

2.1.2 番瀉葉凍干粉的制備

取250g 番瀉葉生藥放入燒杯內，加入四倍沸水1000mL 浸沒30min，兩層紗布濾過后再加入四倍沸水浸沒30min，將兩次濾液合并減壓濃縮放入凍干機，凍干48h 得到番瀉葉凍干粉70.098g （1g 凍干粉相當于3.566g 生藥）。

2.2 分組

將60 只大鼠按隨機數字表法隨機分為6 組，每組十只，雌雄各半。六組分別為：正常組（NC），模型組（Model），陽性對照組（PC），柞樹皮低劑量組（L），柞樹皮中劑量組（M）和柞樹皮高劑量組（H）。

2.3 大鼠腹瀉模型的制備

各組適應性飼養一周后開始進行實驗，除NC 組使用生理鹽水灌胃外，其余五組每天使用番瀉葉進行灌胃（1.5g 生藥/kg），連續一周造成嚴重腹瀉模型。

2.4 柞樹皮對腹瀉模型的治療

造模第七天在番瀉葉灌胃1h 后，NC 組使用生理鹽水灌胃，PC 組使用藿香正氣水灌胃（1.8mL/kg），三個治療組分別用不同劑量柞樹皮水煎劑進行灌胃（L 組1g 生藥/Kg，M 組2g 生藥/Kg，H組3g 生藥/Kg，分別相當于臨床劑量10g，20g，30g）。灌胃后將大鼠放置于鋪有定性濾紙的代謝籠內，觀察大鼠一般行為及腹瀉情況，并定時更換濾紙。最終計算6 小時內的腹瀉指數作為評價指標[2-4]。（腹瀉指數＝稀便率×稀便級。其中稀便率為每只大鼠所排稀便數與總便數之比，稀便級：根據稀便污染濾紙上的污跡范圍大小分為4 級：1 級：污跡直徑＜1cm，2 級：污跡直徑＜1～1.9cm，3 級：污跡直徑＜2～3cm，4 級污跡直徑＞3cm。）

2.5 大鼠結腸HE 染色

將各組大鼠注射20%烏拉坦麻醉處死后立即切開腹腔，每只取遠端結腸組織約1cm 用生理鹽水沖洗干凈后放入4%多聚甲醛中進行固定。充分固定48 小時以上使用PBS 浸泡1h 后進行常規脫水、透明、浸蠟和石蠟包埋，包埋后進行切片，片厚5μm。烘片2h 后經二甲苯脫蠟，不同濃度乙醇脫水，進行常規蘇木素-伊紅染色，染色后脫水透明行中性樹膠封片。在光鏡下對大鼠結腸組織切片進行觀察并拍照。

2.6 統計學處理

使用軟件SPSS 19.0 對各組實驗數據進行處理，結果用均數± 標準差（±s）進行表示，各組間差異采用單因素方差分析。若P＜0.05，代表組間數據對比差異明顯，具有統計學意義。

3 實驗結果

3.1 模型制備結果

使用番瀉葉連續灌胃一周后，對比空白組，造模大鼠腹瀉率達到100%，肛周可見黃色稀便附著，毛色稍顯晦暗，行為無明顯改變，說明造成大鼠腹瀉模型成功[5]。

3.2 柞樹皮治療作用

表1 各組腹瀉指數數據表

通過對數據進行統計學分析，可以發現，使用柞樹皮水煎劑治療后的模型大鼠無論是稀便次數還是腹瀉指數等指標與單純造模的大鼠相比都具有顯著差異（P＜0.05），對照組與柞樹皮各劑量組對模型大鼠都具有一定的止瀉作用，其中柞樹皮中、高劑量組腹瀉指數下降更為明顯（P＜0.01，F=7.432）。

3.3 HE 染色結果

通過在光鏡下觀察各組結腸組織HE 染色切片，可以發現正常組大鼠腸粘膜結構完整，絨毛排列整齊，未見到組織壞死脫落，而造模后大鼠結腸腸壁黏膜部分有淋巴細胞浸潤和輕度充血水腫。實驗中在使用柞樹皮水煎劑治療后，對比模型組，大鼠結腸組織充血水腫情況有一定改善，黏膜組織結構未見明顯異常。

4 討論

腹瀉作為一種臨床常見癥狀，常由于各種感染性因素及非感染性因素引起，主要是指便次增多超過平日習慣的頻率，糞質稀薄，含水量增加，每天排便量超過200 g， 或含未消化食物或膿血、黏液。通常還伴有排便急迫感、肛門不適、失禁等癥狀[6-7]。臨床治療通常采取補液糾正電解質紊亂并應用抗生素抑制腸道感染，長期使用易產生耐藥性，而濫用抗生素還可能會導致腸道菌群失調，引發藥源性腹瀉。中藥因其療效確切、毒副作用小等因素故而在治療急慢性腹瀉方面有著其獨到的優勢[8]。

表2 各組大鼠結腸組織HE 染色結果（HE 染色＊400）

滿藥作為民族醫藥的一種，也是中國傳統中醫藥的重要組成部分，現已錄入滿族非物質文化遺產。熱河是滿族的第二故鄉，在進行當地藥材普查中發現民間有使用柞樹皮來治療腹瀉的療法，后在對已有文獻的研究中也發現有運用柞樹皮煎劑治療牲畜腹瀉及小兒腹瀉的臨床案例存在[9-10]。通過本實驗的研究可以發現，柞樹皮的確具有良好的腹瀉治療作用，實驗中治療組在用藥后可明顯改善大鼠的稀便次數和稀便程度，對比模型組腹瀉指數有顯著下降，通過病理切片觀察還可以發現柞樹皮可以改善腸黏膜狀態，對腸道的后續恢復也有一定效果。