硒提高雛雞抗MDV感染能力的試驗

文│康晨張家森（安徽省阜陽市動物衛生監督所）

馬立克氏病是雞的一種淋巴組織增生性腫瘤病，其特征為外周神經淋巴樣細胞浸潤和增大，引起肢（翅）麻痹，以及在性腺、虹膜、各種臟器、肌肉和皮膚上發生腫瘤病灶。病原為馬立克氏病毒（MDV），屬于皰疹病毒科禽皰疹病毒2型，是雞重要的傳染病病原，馬立克氏病也是目前危害養雞業健康發展的三大主要疫病（馬立克氏病、新城疫、雞傳染性法氏囊炎）之一。馬立克氏病在國內呈散發流行。20世紀70年代在我國開始發現雞群感染馬立克氏病的病例，發病的雞群表現輕微的神經癥狀和部分病雞發生內臟型馬立克氏病。后來我國應用火雞皰疹病毒疫苗，一定程度上控制了馬立克氏病疫情。近年來，由于出現馬立克氏病毒變異株，少數地區出現免疫失敗。一些野毒株甚至能在免疫過CVI988/Rispens株的雞群引發嚴重的疾病。它們的出現可能是一些地區雞群仍發生馬立克氏病的重要原因之一，不僅國外進口的肉雞、鵪鶉、山雞等禽類發病，我國本土品種雞也被發現感染馬立克氏病，經火雞皰疹病毒（HVT）和馬立克氏病毒雙價苗免疫的雞群馬立克氏病發病率達1%～30%，神經型死亡率1%～3%，內臟型死亡率一般為25%～30%，給養雞業造成嚴重的經濟損失。

微量元素硒是有機體生命活動必不可少的元素，在有機體的生長、發育、防止疾病的發生有著直接關系，尤其是與抗腫瘤方面有著密切關系。硒具有抗癌變、提高機體免疫力、清除體內毒素、修復組織細胞、軟化血管、清理血管壁的膽固醇、改善血液循環通道、延緩衰老、預防多種疾病、降低患癌風險等作用。同時，對重金屬引起的中毒還具有一定的保護和解毒作用，有抑制其吸收和促進排泄的作用。流行病學研究表明，血漿中硒含量過低易導致癌癥、心腦血管疾病、骨關節炎的發生。Karam等人研究發現，合成的有機硒化物比無機硒化物、天然硒化物具有更強的抗腫瘤活性和更低的毒性。

近年來，由于含硒藥物在抗腫瘤、抗病毒以及治療神經系統相關疾病等方面的應用，已成為國內外學者研發的熱點，藥物研究主要集中在抗腫瘤、抗炎和抗高血壓等方面。

超氧化物歧化酶（SOD）是一種具有特定生物催化功能的蛋白質，由蛋白質和金屬離子組成，廣泛存在于自然界的動植物以及一些微生物體內。SOD活性的測定可以間接反映機體清除氧自由基的能力。丙二醛（MDA）作為脂質過氧化物的終產物之一，被稱為生物體內自由基的指示物，被廣泛作為各種氧自由基損傷機體的指標。通過研究雛雞在飼料中添加亞硒酸鈉感染MDV后腎臟內SOD活性和MDA含量，可以為硒在畜牧業生產過程中的應用以及在養雞業的科學飼養管理提供參考。

一、材料與方法

1.試劑和儀器。亞硒酸鈉化學純，含量為99%（上海金山縣興塔化工廠生產，批號：20130801），722分光光度計、水浴鍋、離心機、試管、燒杯、旋渦振蕩器、微量移液器等。

2.MDV的BJ-1株。

3.HVT疫苗。試驗用火雞皰疹病毒疫苗系美國Solvay公司生產，批號SerialNo.088/93。

4.M D A 測定試劑盒由南京建成生物研究所提供（批號：20140507）。

（1）操作方法。旋渦混勻器混勻，試管口用保鮮膜扎緊，用針頭刺一小孔，95℃水?。ɑ蛴缅侀_蓋煮沸）40分鐘，取出后流水冷卻，然后4000轉/分鐘，離心10分鐘，取上清液，532納米處，1厘米光徑，蒸餾水調零，測各管吸光度值。

（2）計算公式。血漿中MDA含量（納摩爾/毫升）=（測定管吸光度-測定空白管吸光度）/（標準管吸光度-標準空白管吸光度）×標準品濃度（10納摩爾/毫升）×樣本測試前稀釋倍數。

5.SOD試劑盒由南京建成生物研究所提供（批號：20130513）。

（1）操作方法?；靹颍覝胤胖?0分鐘。在波長550納米處，1厘米光徑比色杯，蒸餾水調零，比色。

（2）計算公式。血漿中SOD的含量＝（對照管吸光度-測定管吸光度）/對照管吸光度/50%×反應的稀釋倍數×樣本測試前的稀釋倍數。

6.試驗設計。150只商品羅曼雛雞在1日齡隨機分為3組，分別為對照組、攻毒組、攻毒加硒組（在基礎日糧中添加硒0.065毫克/千克）；攻毒組和攻毒加硒組雞群于第13天腹腔注射經稀釋的BJ-1株血毒0.2毫升/只。分別從攻毒后7、14、28、56日齡的每組雞中隨機取5只雛雞，各取出1克腎臟樣品和生理鹽水按照1∶9放在研磨器中研磨，然后取上清液測定SOD的活性和MDA的含量。

表1蛋雞飼料配方

表2預混料成分及保證值（每千克含量）

7.試驗動物來源及管理。雛雞購于安徽吉鳳禽業有限公司，免疫雞群在1日齡時接種火雞皰疹病毒疫苗。攻毒組與非攻毒組雞在整個試驗期間分別隔離飼養于經消毒的繁殖實驗室和動物房內，予以同等的飼養管理，適時接種雞新城疫疫苗和雞傳染性法氏囊病疫苗。定期稱重，計算飼料消耗和料重比。飼養管理規范化，自由采食和飲水。日糧配方見表1、表2。

8.測定指標與方法。血漿中SOD活性的測定嚴格按試劑盒說明書方法進行；血漿中MDA的含量測定嚴格按試劑盒說明書方法進行。

9.數據處理。數據處理測定結果以平均數和標準誤（Mean±SE）表示，用軟件對數據進行處理，確定差異顯著性。

二、結果

1.硒對雛雞感染MDV后腎臟中MDA含量的影響。從表3和圖1可知：7日齡攻毒組腎臟中MDA的含量高于對照組肝臟中MDA的含量（P＞0.05），但未達到顯著水平。攻毒加硒組腎臟中MDA的含量低于攻毒組和對照組腎臟中MDA的含量（P＞0.05），但未達到顯著水平；14日齡攻毒組腎臟中MDA的含量顯著地高于對照組腎臟中MDA含量（P＜0.05），攻毒加硒組肝臟中MDA的含量低于攻毒組中MDA的含量（P＞0.05），但未達到顯著水平；28日齡攻毒組腎臟中MDA的含量顯著高于對照組腎臟中MDA的含量（P＜0.05），攻毒加硒組腎臟中MDA的含量極顯著低于攻毒組腎臟中MDA的含量（P＜0.01），低于對照組腎臟中MDA的含量（P＞0.05）；56日齡攻毒組腎臟中MDA含量高于對照組腎臟中MDA含量（P＞0.05），但未達到顯著水平。攻毒加硒組腎臟中MDA的含量低于攻毒組和對照組腎臟中MDA的含量（P＞0.05），但未達到顯著水平。試驗結果表明，日糧中添加硒元素在28日齡雞只時可以有效地降低腎臟中MDA的含量，即使是感染MDV后的雞群；7日齡、14日齡以及56日齡腎臟中MDA的含量與對照組相比有降低的趨勢，但未達到顯著水平（P＞0.05）。

◎圖1雛雞感染MDV后腎臟中MDA含量變化柱形圖

◎圖2雛雞感染MDV后腎臟中SOD活性變化的柱形圖

2.硒對雛雞感染MDV后腎臟中SOD活性的影響。從表4和圖2可知：7日齡攻毒組腎臟中SOD的活性極顯著地低于對照組腎臟中SOD的活性（P＜0.01），攻毒加硒組腎臟中SOD活性高于攻毒組腎臟中SOD的活性（P＞0.01），但未達到顯著水平；28日齡各組間腎臟中SOD的活性差異均未達到顯著水平（P＞0.05）；56日齡攻毒組腎臟中SOD的活性與對照組腎臟中SOD的含量差異不顯著（P＞0.05），攻毒硒組腎臟中SOD的活性高于攻毒硒組腎臟中S O D 的活性，但未達到顯著水平（P＞0.05）。試驗結果表明，日糧中添加硒元素在7日齡相比攻毒組可以極顯著地增強SOD的活性（P＜0.01）；28日齡和56日齡雛雞腎臟中SOD的活性與對照組和攻毒組相比有增強的趨勢，但均未達到顯著水平（P＞0.05）。

三、討論

1.硒對雛雞感染MDV后腎臟中MDA含量的影響。MDA是機體內氧自由基代謝中產生的脂質過氧化產物，它可以反映該體系中脂質過氧化自由基的存在及細胞膜過氧化的程度。氧自由基不但通過生物膜中多不飽和脂肪酸的過氧化引起細胞損傷，而且還能通過脂氫過氧化物的分解產物引起細胞損傷。因而測定MDA的含量常?？煞磻獧C體內脂質過氧化物的程度，間接地反映出細胞損傷的程度。由表3和圖1知，攻毒組MDA的含量始終都高于對照組，說明MDV能

表3雛雞感染MDV后腎臟中MDA含量的變化（Mean±SE，n=5，納摩爾/毫升）

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表4雛雞感染MDV后腎臟中SOD活性的動態變化（Mean±SE，n＝5，U/毫升）夠作用于機體產生更多的MDA，增加其對機體的損害程度。尤其在雛雞早期這種損害效果更明顯，隨著雞群日齡的增加，MDV對提高雞群體內的MDA的含量越來越不明顯。而攻毒硒組的MDA含量總體小于攻毒組和對照組，說明在日糧中添加硒可以減少MDV對雞體的損害，尤其在28日齡之前。本實驗結果表明：日糧中添加硒元素使體內硒含量增多，能增加過氧化物酶的活性，提高抗氧化能力，清除體內自由基，使MDA含量下降，從而減少有害物質對機體的損害，提高抵抗MDV的能力。

2.硒對感染MDV的雛雞腎臟中SOD活性的影響。在生物的進化系統中，細胞內形成了防御活性氧毒害的保護機制，其中起重要作用的是SOD，其主要功能是清除氧氣而產生過氧化氫和氧氣，但過氧化氫可以和氧氣相互作用產生更多的自由基，凡是能提高機體內抗氧化酶活性的物質同時也具有了抑制及清除自由基的作用，自由基清除劑能清除自由基對機體的毒害作用。由表4和圖2知，7日齡、28日齡、56日齡攻毒加硒組腎臟中SOD活性高于攻毒組的活性，說明在日糧中添加硒能夠提高感染MDV雛雞腎臟中SOD的活性。本實驗研究結果表明：日糧中添加硒元素，會使體內硒含量增加并能增加過氧化物酶的活性，提高抗氧化能力，從而增強雛雞的免疫力，提高雛雞抗MDV感染的能力。