卡其百合的不定芽誘導及植株再生

李浩 劉玉超 黃子軒

摘要：采用卡其百合（Lillium spp. var. Khaki）的種球為外植體，以MS為基本培養基，添加不同濃度配比的植物生長調節劑，對外植體進行不定芽的誘導、生根及植株再生。對 6-BA、NAA、GA3、IBA及活性炭等成分的添加濃度及配比對卡其百合不定芽誘導及生根的影響進行了正交試驗。結果表明，不定芽誘導的最佳培養基配方為MS培養基附加2.0 mg/L 6-BA、0.10 mg/L NAA和0.5 mg/L GA3，經驗證其不定芽誘導率可達83.3%，芽較為粗壯，色嫩綠，褐化現象很少;不定芽生根的最佳培養基配方為1/2 MS附加0.1 mg/L NAA和0.1 mg/L IBA，經驗證其生根率可達73.3%，每個不定芽生根數目較多，根較為粗壯，狀態良好。

關鍵詞：卡其百合;組織培養;植物生長調節劑;不定芽

中圖分類號：Q813.1+2;S644.1 ? ? ? ? 文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2020）01-0149-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.01.034 ? ? ? ? ? 開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Abstract： With the bulbs of Lillium spp. var. Khaki as explants， MS medium plus different concentrations of plant growth regulators were used to inducing adventitious shoots and roots for plant regeneration. In this process， orthogonal experimental methods were used to analysis the impact of the concentrations and proportions of 6-BA， NAA， GA， IBA and active carbon to shoots and roots inducement of Lillium spp. var. Khaki. The results showed that the optimal medium for shoots inducement was MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L GA3. After retesting， it was proved that the ratio of shoots inducement was 83.3% and the shoots were strong， fresh green and less browning. The optimal medium for rooting of adventitious shoots was 1/2MS+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L IBA and the ratio of rooting was 73.3%. The number of roots for each adventitious shoot was higher. The roots were strong and in good condition.

Key words： Lillium spp. var. Khaki; tissue culture; plant growth regulator; adventitious shoot

百合是百合科（Liliaceae）百合屬（Lilium spp.）多年生球根花卉，其花朵碩大、花色豐富、花香宜人，具有較高的觀賞價值，深受人們喜愛。目前記載百合種類全世界約115種，中國原產約55種[1，2]。自20世紀80年代，中國已開始研究觀賞百合，然而高品質、高觀賞價值的品種很少。國際上，以荷蘭和美國為中心，已育出上千種栽培品種，幾乎壟斷了國際百合種球市場[2]。因此，百合的種質創新已成為中國百合花卉市場發展的重中之重。而植物組織培養技術被應用于百合新品種選育、優質種苗生產、種植資源創新和保存等諸多方面。

卡其百合（Lillium spp. var. Khaki）是近年來國際上培育出的較新的栽培品種，具有花期長、抗病性強、成活率高等特點。試驗主要應用植物組織培養技術，建立卡其百合的快速繁殖體系，旨在為百合育種提供資料。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

供試材料為新鮮的卡其百合種球，武漢市花卉市場購買。

1.2 ?主要儀器設備

高壓蒸氣滅菌鍋、超凈工作臺、光照恒溫培養箱等。

1.3 ?方法

1.3.1 ?外植體的制備與接種 ?將百合種球用自來水沖洗30 min，去除種球外部鱗片，留中間莖尖部分，移至超凈工作臺內，75%乙醇消毒1 min，無菌水沖洗3遍，2%次氯酸鈉溶液處理15 min，無菌水沖洗3遍，切取0.5～1.0 mm厚的薄片，接種到培養基中。

1.3.2 ?培養基配方與培養條件

1）不定芽誘導培養基。以MS為基本培養基，添加不同濃度的6-BA、NAA和GA3，另加3%蔗糖、0.7%瓊脂粉，pH 5.8～6.0。

2）生根培養基。1/2 MS附加不同濃度的NAA、IBA和活性炭，3%蔗糖、0.7%瓊脂粉，pH 5.8～6.0。

3）培養條件。不定芽誘導期間，光照12 h/d，不定芽生根期間，光照16 h/d，其他條件均為25 ℃，光照度為1 000～2 000 lx。

1.3.3 ?煉苗與移栽 ?將根系發達、生長健壯的組培苗瓶子放置于自然光照和溫度下24 h，之后開蓋，室溫、弱光照條件下放置2 d后小心將其取出，用清水洗凈根系上的殘余培養基，放入潔凈小盤中自然陰干1～2 d，直到苗身稍微失水，再移栽于沙子﹕腐殖土為1∶1的混合基質中，澆適量水，約7 d 后長出新根再澆1次水，以后每 3 d澆水1次。注意煉苗期間防止陽光直射和基質過濕。

1.3.4 ?正交試驗 ?確定影響百合不定芽誘導和生根的因素各3個，分別設定3個水平（表1、表2），進行L9（34）正交試驗。

2 ?結果與分析

2.1 ?百合不定芽誘導正交試驗結果

將百合種球莖尖外植體按照表1所示的正交設計進行試驗，接種在不同激素濃度配比的不定芽誘導培養基中，每個試驗接種30塊外植體，培養5～7 d即可見外植體組織膨大，20 d左右開始有不定芽生成，40 d左右大量不定芽形成，此時，將誘導情況進行統計分析，結果如表3所示。從表3可以看出，6-BA對百合不定芽誘導的影響最大，極差（R）為24.33，隨著6-BA濃度的增加，誘導出不定芽的外植體量有所增加。但當6-BA濃度增加時，褐化現象也隨之增多，芽的數量雖多，卻極易產生硬結，色暗，很難再生，且易褐化。

NAA的添加也是必不可少的，其極差（R）為16.33，隨著濃度的增加，可有效促進不定芽的誘導，而與6-BA配合后，誘導效果更好，但隨著NAA添加量的增加，有少量愈傷組織產生，因此其添加濃度不宜過高。

GA3的添加對百合不定芽的誘導量并無明顯影響，其極差（R）最低，為7.67。然而，從芽的狀態上看，GA3可改善不定芽的伸長生長，且色澤嫩綠，隨著GA3濃度的提高，褐化現象也有所減少，因此，少量添加GA3對于不定芽的狀態調整有一定的幫助。

綜合不定芽誘導量及狀態是否良好等因素，最佳的激素組合為2.0 mg/L 6-BA、0.10 mg/L NAA和0.5 mg/L GA3。經驗證得到不定芽誘導率可達83.3%，芽較為粗壯，色嫩綠，褐化現象少（圖1）。

2.2 ?百合不定芽生根正交試驗結果

百合不定芽誘導50 d左右，選取狀態良好的不定芽，切取下來接種在不定芽生根培養基中進行生根，每個試驗接種30個不定芽，10 d左右即有根生成，20 d時統計數據進行分析，結果見表4。由表4可知，NAA的添加對百合不定芽生根的影響極差（R）為42.20，為3個因素中最大的，隨著NAA濃度的增加，生根效果越好，根的數量明顯增加，狀態良好，然而濃度較高時，雖然根的數量較多，但同時會產生少量的愈傷組織，從而影響根的生長。IBA在生根時的作用不太明顯，極差（R）為17.77，濃度的增加也沒有明顯促進生根，但其添加對根的狀態調整有一定的效果，添加時會產生大量的毛狀根，根細長，色白嫩，因此添加少量的IBA可改善百合生根的質量。活性炭的添加對生根沒有明顯影響，極差（R）為15.57，對其生長的狀態也沒有太大調整作用，因此，可以考慮不添加。

綜合以上分析，確定最佳的生根培養基為1/2 MS附加0.1 mg/L NAA和0.1 mg/L IBA，經驗證生根率可達73.3%，每個不定芽生根數目較多，根較為粗壯，狀態良好。挑選長勢良好、生根數目較多的不定芽進行煉苗移栽，均已成活。

3 ?討論

在對卡其百合進行愈傷組織誘導的過程中，發現植物生長調節劑的添加是必不可少的。其中，6-BA對百合不定芽誘導的影響最大，這與夏九成等[3]的研究結果一致，在適宜濃度范圍內，隨著6-BA濃度的增加，誘導出不定芽的外植體量有所增加，每塊外植體上誘導出的不定芽的數目也有所增加，但當6-BA濃度過高時，反而會抑制不定芽的誘導，且褐化現象也隨之增多，極易產生硬結，色暗，很難再生[4]。NAA的添加也是必不可少的，與6-BA配合后，可明顯提高不定芽的誘導量[5-8]，在本試驗中，NAA、6-BA和GA3合理配比后，不定芽誘導率可達83.3%，芽較粗壯，色嫩綠，褐化現象很少。GA3的添加，對百合不定芽的誘導量并無明顯影響，然而，從芽的狀態上看，GA3可改善不定芽的伸長生長，且色澤嫩綠，隨著GA3濃度的提高，褐化現象也有所減少。

不同外植體部位的誘導率也有很大不同，如馬怡迪等[9]、權永輝等[10]、李黛等[11]分別以百合種子、花絲、鱗片等作為外植體，研究其誘導率，發現不定芽誘導率鱗片>種子>花絲，鱗片在6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L激素培養基中，不定芽誘導率高達91%，且芽的大小、數量以及生長情況良好。吳永輝等[12]、鄭思鄉等[13]、徐品三等[14]研究添加物對不同百合品種與多倍體百合誘導不定芽的影響時，發現激素6-BA、NAA對不同品種以及多倍體百合均有很好的誘導作用，活性炭可以減少培養基的污染，且蔗糖濃度的增加有助于芽的增殖，其中不定芽誘導率最高為80.21%，而在本試驗中，由于GA3可以促進幼苗莖的伸長生長，促進鱗莖提前萌發，經過NAA、6-BA和GA3植物生長調節劑的合理配比后，不定芽誘導率最高可達93.3%，芽較為粗壯，色嫩綠，但是有褐化現象，后續通過添加活性炭等是否可以減少褐化現象，還有待研究。

參考文獻：

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