HS-SPME-GC-MS分析青皮揮發性成分

韓蔓 江漢美 馬銀宇

摘要：采用頂空固相微萃取法（HS-SPME）和氣質聯用法（GC-MS）對青皮的揮發性成分進行分析。結果表明，從青皮中分離出68個峰，鑒定出56種成分，占總揮發性成分的87.98%，分別有右旋萜二烯（15.06%）、芳樟醇（10.88%）、順式香芹醇（7.88%）、反式香芹醇（6.49%）、（E，Z）-α-法尼烯（6.26%）、α-松油醇（3.59%）等。首次采用HS-SPME-GC-MS聯用技術分析青皮揮發性成分，旨在為其進一步開發利用提供科學依據。

關鍵詞：青皮;頂空固相微萃取;氣質聯用技術;揮發性成分

中圖分類號：S666.2;O657.63 ? ? ? ? 文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2020）01-0142-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.01.032 ? ? ? ? ? 開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Abstract： Using HS-SPME and GC-MS to extract and analyze the volatile constituents in Citri reticulatae pericarpium viride. The results showed that 68 peaks were detected from Mori folium， 56 components were identified， accounting for 87.98% of volatile components， including （+）-p-Mentha-1，8-diene（15.06%）， Linalool（10.88%）， cis-Carveol（7.88%）， trans-Carveol（6.49%）， α-Farnesene（6.26%）， α-Terpineol（3.59%）. HS-SPME-GC-MS combined technique was used to analyze the volatile components of Citri reticulatae pericarpium viride for the first time， providing reference for its further development and utilization.

Key words： Citri reticulatae pericarpium viride; HS-SPME; GC-MS; volatile component

青皮為蕓香科植物橘（Citrus reticulata Blanco）及其栽培變種的干燥幼果或未成熟果實的果皮，包括個青皮、四花青皮。青皮之名始載于《珍珠囊》，且《本草品匯精要》將其以“青橘皮”之名列于果部上品。2015版《中華人民共和國藥典》中收載有青皮，性味苦辛，微溫，歸肝、膽、胃經，有疏肝破氣，消積化滯之功效，主要用于胸脅脹痛、疝氣疼痛、乳癖、乳癰、食積氣滯、脘腹脹痛[1]。青皮主要含有揮發油、黃酮類化合物、氨基酸類等化學成分，并對心血管、消化和呼吸系統有廣泛的藥理作用[2]，為臨床常用理氣藥。其中，揮發油是青皮主要活性成分之一，多采用傳統水蒸氣蒸餾法提取，相較而言頂空固相微萃取更為快速、高效和簡便。故本試驗首次采用HS-SPME-GC-MS對青皮的揮發性成分進行提取和比較分析，旨在為青皮資源的進一步開發利用提供參考依據。

1 ?材料與方法

1.1 ?儀器

手動固相微萃取裝置（德國IKA公司）;氣相-質譜-計算機聯用儀（美國Hewlett-Packard公司，6890/5973型）;65 μm聚二甲基硅氧烷-二乙烯基苯（PDMS/DVB）萃取纖維頭（美國Supelco公司）;頂空瓶（15 mL）;JY1002型電子天平（上海浦春計量儀器有限公司）。

1.2 ?試劑

青皮藥材購于湖北強康中藥飲片有限公司，產地為廣州新會，經湖北中醫藥大學生藥教研室張秀橋教授鑒定為蕓香科植物橘的干燥幼果。將青皮藥材打成粉末，并過16目篩得青皮粉末。

1.3 ?方法

1.3.1 ?頂空固相微萃取條件 ?經過綜合考察得出最佳固相微萃取條件：取青皮粉末0.5 g，置于15 mL頂空瓶中，插入裝有65 μm PDMS/DVB萃取纖維頭的手動進樣器，110 ℃下預平衡15 min，再伸出萃取頭頂空萃取25 min，取出立即插入色譜儀進樣口（溫度230 ℃）中，解吸6 min。

1.3.2 ?氣相色譜-質譜條件

1）色譜條件。色譜柱HP-5MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm）;載氣He（99.999%）;流速0.8 mL/min;進樣口溫度230 ℃;采用程序升溫，初始溫度為50 ℃，以10 ℃/min升溫至230 ℃。

2）質譜條件。離子源為EI源;離子源溫度230 ℃;四級桿溫度150 ℃;電子能量70 eV;倍增管電壓1.2 kV;接口溫度230 ℃;質荷比（m/z）35～550。

2 ?結果與分析

通過數據處理系統和面積歸一化法對各總離子流中的各組分相對百分含量進行計算，然后通過NIST 08質譜數據庫對各峰的質譜圖進行檢索，并結合其相對保留時間，確定各個組分。從青皮中分離出68個峰，鑒定出56種成分，占總揮發性成分的87.98%。其中，青皮中揮發性成分含量最高的為右旋萜二烯，占總揮發性成分的15.06%，其次為芳樟醇，占總揮發性成分的10.88%，順式香芹醇（7.88%）、反式香芹醇（6.49%）、（E，Z）-α-法尼烯（6.26%）、α-松油醇（3.59%）、（E）-β-金合歡烯（2.94%）等含量也較高。具體結果見圖1和表1。

3 ?討論

青皮中的揮發性成分主要包括脂肪烴類、烯類、醇類、單萜類、倍半萜等。其中，含量最高的右旋萜二烯可以抑制膽固醇的合成并有抗癌作用[3]。諸多體內外試驗表明，芳樟醇具有鎮痛、鎮靜催眠、抗焦慮、抗腫瘤、抗炎等藥理活性[4];香芹醇（葛縷醇）可抑制大鼠被動皮膚過敏反應和5-羥色胺引起的皮膚血管滲透性增強[5];松油醇具有平喘、抑菌作用[6];金合歡烯、大根香葉烯D、蓽澄茄烯等多種倍半萜均有抑菌解熱作用[7];（-）-4-萜品醇有鎮咳平喘和抗過敏作用[8];β-欖香烯具有較高的抗腫瘤活性，應用前景廣闊[9];百里香酚具有較強的止痛、抗炎和抑菌作用[10]等，這些具有藥理作用的揮發性成分為青皮在臨床上用于胸脅脹痛、疝氣疼痛提供物質基礎。同時，首次采用頂空固相微萃取-氣相-質譜聯用技術對青皮的揮發性化學成分進行分析，也為青皮資源的進一步開發利用提供了參考依據。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015.197.

[2] 陳 ?紅，劉傳玉，李承晏.青皮的化學及藥理作用研究進展[J]. 中草藥，2001（11）：93-95.

[3] JAYAPRAKASHA G K，MURTHY K N，DEMARAIS R，et al. Inhibition of prostate cancer（LNCaP） cell proliferation by volatile components from Nagami Kumquats.[J].Planta Med，2012，78（10）：974-980.

[4] 姜冬梅，朱 ?源，余江南，等.芳樟醇藥理作用及制劑研究進展[J].中國中藥雜志，2015，40（18）：3530-3533.

[5] 王新芳，董 ?巖，孔春燕.艾蒿的化學成分及藥理作用研究進展[J].時珍國醫國藥，2006（2）：174-175.

[6] 蔣玲燕，李 ?清，陳曉輝，等.GC法同時測定魚腥草注射液中4種成分的含量[J].藥物分析雜志，2011，31（4）：664-667.

[7] 周 ?剛，王 ?停，何燕萍.中藥新藥研發中藥材研究需關注的問題[J].中國中藥雜志，2014，39（16）：3192-3195.

[8] 蔡進章，林崇良，周子曄，等.山橿根、莖、葉揮發油化學成分的研究[J].中華中醫藥學刊，2011，29（8）：1893-1895.

[9] 麻 ?杰，陳 ?娟，趙冰潔，等.抗癌藥物β-欖香烯及其衍生物的研究進展[J].中草藥，2018，49（5）：1184-1191.

[10] 胡薏冰，柳克鈴，李若存.GC法測定云威靈軟膠囊中百里香酚和異丁酸百里香酯的含量研究[J].中醫藥導報，2007（7）：98-99，115.