膠質(zhì)瘤EGFR、EGFRvⅢ蛋白的表達(dá)及臨床意義

朱文標(biāo)　盧善明　李海南　肖煥欽　羅文娟　謝壽城　劉晉發(fā)

【摘要】 目的：探討EGFR、EGFRvⅢ蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與臨床病理的相關(guān)性，研究其與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的相關(guān)性，分析膠質(zhì)瘤患者的生存影響因素。方法：選取2013年8月-2018年10月在本院經(jīng)手術(shù)治療的膠質(zhì)瘤病例104例，其中低級(jí)別膠質(zhì)瘤（WHO Ⅱ級(jí)）27例，間變性膠質(zhì)瘤（WHO Ⅲ級(jí)）20例，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（WHO Ⅳ級(jí)）57例。存檔蠟塊免疫組化檢測(cè)EGFR、EGFRvⅢ蛋白表達(dá)，收集臨床病理參數(shù)、分子標(biāo)記物，并進(jìn)行隨訪(fǎng)。結(jié)果：EGFR蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為低級(jí)別膠質(zhì)瘤（WHO Ⅱ級(jí)）44.4%（12/27），間變性膠質(zhì)瘤（WHO Ⅲ級(jí)）50.0%（10/20），膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（WHO Ⅳ級(jí)） 68.4%（39/57），隨著組織學(xué)級(jí)別的增加，EGFR陽(yáng)性率增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。EGFRvⅢ蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為低級(jí)別膠質(zhì)瘤（WHO Ⅱ級(jí)）0，間變性膠質(zhì)瘤（WHOⅢ級(jí)）為10.00%（2/20），膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（WHOⅣ級(jí)）為10.53%（6/57），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。13.1%（8/61）EGFR陽(yáng)性膠質(zhì)瘤表達(dá)EGFRvⅢ，EGFR陰性膠質(zhì)瘤未發(fā)現(xiàn)有EGFRvⅢ的表達(dá)，兩者呈正相關(guān)（r=0.242， P<0.05）。EGFR表達(dá)與分子標(biāo)記物1p/19q雜合性缺失有關(guān)（P=0.029），與其他臨床病理參數(shù)及其他分子標(biāo)記物無(wú)關(guān)。EGFRvⅢ表達(dá)與臨床病理參數(shù)及分子標(biāo)記物無(wú)關(guān)。單因素分析顯示EGFRvⅢ、年齡、組織學(xué)級(jí)別、KPS評(píng)分、治療方案、IDH1基因突變、ATRX基因突變與膠質(zhì)瘤患者生存有關(guān)（P<0.05），Cox分析顯示年齡、組織學(xué)級(jí)別、治療方案及分子標(biāo)記物IDH1是膠質(zhì)瘤患者獨(dú)立的預(yù)后預(yù)測(cè)因素（P<0.05），EGFRvⅢ不是膠質(zhì)瘤患者獨(dú)立的預(yù)后因素（P>0.05）。結(jié)論：膠質(zhì)瘤EGFR、EGFRvⅢ蛋白的表達(dá)具有一定的臨床意義，但不能作為膠質(zhì)瘤的獨(dú)立預(yù)后因素。

【關(guān)鍵詞】 膠質(zhì)瘤 EGFR EGFRvⅢ

Expression and Clinical Significance of EGFR and EGFRvⅢ Protein in Gliomas/ZHU Wenbiao， LU Shanming， LI Hainan， XIAO Huanqin， LUO Wenjuan， XIE Shoucheng， LIU Jinfa. //Medical Innovation of China， 2020， 17（10）： 0-015

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of EGFR and EGFRvⅢ protein in gliomas. Method： A total of 104 cases of gliomas were treated in our hospital from August 2013 to October 2018， including 27 cases of low-grade gliomas （WHO grade Ⅱ）， 20 cases of anaplastic gliomas （WHO grade Ⅲ） and 57 cases of glioblastoma （WHO grade Ⅳ ）. EGFR and EGFRvⅢ protein expression were detected by immunohistochemistry. The clinical pathological parameters and molecular markers were collected and all the cases were followed up. Result： The positive rate of EGFR protein expression was 44.4% （12/27） in low-grade gliomas， 50.0% （10/20） in anaplastic gliomas and 68.4% （39/57） in glioblastomas. With the increase of WHO grade， the EGFR positive rate increased， but the difference was not significant （P>0.05）. The positive rate of EGFRvⅢ protein expression was 0 in low grade gliomas， 10.0% （2/20） in anaplastic gliomas and 10.53% （6/57） in glioblastomas. The difference was not significant （P>0.05）. 13.1% （8/61） EGFR-positive gliomas expressed EGFRvⅢ， and all EGFR-negative gliomas did not show EGFRvⅢ expression. The express of EGFR and EGFRvⅢ was positive correlation （r=0.242， P<0.05）. EGFR expression was associated with co-deletion of 1q/19p （P=0.029）， while was not associated with clinicopathological parameters and other molecular markers. EGFRvⅢ expression was not associated with clinicopathological parameters and molecular markers. Univariate analysis showed EGFRvⅢ， age， WHO grade， KPS score， treatment regimen， IDH1 mutation and ATRX gene mutation were associated with survival of glioma patients （P<0.05）， Cox analysis showed age， WHO grade， treatment regimen and IDH1 mutation were independent prognostic predictors of glioma patients （P<0.05）， and EGFRvⅢ was not independent prognostic factor for glioma patients （P>0.05）. Conclusion： The expression of EGFR and EGFRvⅢ protein has certain clinical significance， but it was not independent prognostic factor for gliomas.

[Key words] Glioma EGFR EGFRvⅢ

First-authors address： Meizhou Peoples Hospital， Meizhou 514031， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.10.003

膠質(zhì)瘤是最常見(jiàn)的原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤，研究發(fā)現(xiàn)，40%～50%的膠質(zhì)瘤存在表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）異常表達(dá)，并且常伴隨基因擴(kuò)增及突變，最常見(jiàn)的突變形式是表皮生長(zhǎng)因子受體突變體Ⅲ（epidermal growth factor receptor variant Ⅲ， EGFRvⅢ）[1]。EGFRvⅢ尚未在正常組織中檢出，故被視為惡性腫瘤特異性表達(dá)的突變體。隨著腫瘤分子生物學(xué)的發(fā)展，分子靶向藥物治療膠質(zhì)瘤是將來(lái)達(dá)到臨床治愈目標(biāo)可行方案之一[1-2]。本文探討EGFR、EGFRvⅢ在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與臨床病理的相關(guān)性，研究其與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的相關(guān)性，分析膠質(zhì)瘤患者的生存影響因素，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年8月-2018年10在本院經(jīng)手術(shù)治療的膠質(zhì)瘤病例104例，其中男55例，女49例;年齡≥65歲者17例，<65歲者87例;腫瘤最大直徑<5.0 cm者46例，≥5.0 cm者58例;腫瘤位于額葉或顳葉者84例，位于其他位置者

20例。依據(jù)2016年世界衛(wèi)生組織（WHO）的中樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)瘤分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織學(xué)分級(jí)，低級(jí)別膠質(zhì)瘤（WHO Ⅱ級(jí)）27例，間變性膠質(zhì)瘤（WHO Ⅲ級(jí)）20例，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（WHO Ⅳ級(jí)）57例。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均有腦腫瘤手術(shù)切除史，術(shù)后病理證實(shí)為Ⅱ～Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤;②手術(shù)切除后均行總劑量為50～65 Gy的放射治療;③隔3～6個(gè)月進(jìn)行的MR隨訪(fǎng)復(fù)查中，出現(xiàn)異常強(qiáng)化病灶。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者<50歲或>80歲;②患者合并有肝、腎、肺等其他全身性疾病。該研究已經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，且患者知情同意。

1.2 EGFR、EGFRvⅢ蛋白表達(dá)檢測(cè) 通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)EGFR、EGFRvⅢ蛋白檢測(cè)，免疫組化采用S-P法，操作步驟嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)。

1.3 EGFR、EGFRvⅢ免疫組化結(jié)果判讀 EGFR、EGFRvⅢ免疫組化染色主要定位于細(xì)胞膜和/或細(xì)胞質(zhì)。染色結(jié)果判定：以細(xì)胞膜和/或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)突出于背景的呈棕黃色或棕黑色染色的細(xì)胞判讀為陽(yáng)性染色細(xì)胞。EGFR陽(yáng)性判讀標(biāo)準(zhǔn)為陽(yáng)性染色細(xì)胞>50%腫瘤細(xì)胞;EGFRvⅢ陽(yáng)性判讀標(biāo)準(zhǔn)為陽(yáng)性染色細(xì)胞>10%腫瘤細(xì)胞;即判讀為膠質(zhì)瘤EGFRvⅢ表達(dá)陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，各組間比較采用，字2檢驗(yàn)，生存分析采用Kaplan-Meier法，Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型應(yīng)用于多因素生存分析，組間差異采用Log-rank檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EGFR、EGFRvⅢ蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá) EGFR在膠質(zhì)瘤的陽(yáng)性表達(dá)率為58.7%（61/104），EGFR蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為低級(jí)別膠質(zhì)瘤（WHO Ⅱ級(jí)）44.4%（12/27），間變性膠質(zhì)瘤（WHO Ⅲ級(jí)）50.0%（10/20），膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（WHO Ⅳ級(jí)）68.4%（39/57），隨著組織學(xué)級(jí)別的增加，EGFR陽(yáng)性率增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.078）。EGFRvⅢ蛋白未發(fā)現(xiàn)其在低級(jí)別膠質(zhì)瘤中有表達(dá)，EGFRvⅢ蛋白表達(dá)陽(yáng)性率低級(jí)別膠質(zhì)瘤（WHO Ⅱ級(jí)）為0，間變性膠質(zhì)瘤（WHO Ⅲ級(jí)）為10.00%（2/20），膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（WHO Ⅳ級(jí)）為10.53%（6/57），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。EGFR陽(yáng)性表達(dá)與分子標(biāo)記物1p/19q雜合性缺失有關(guān)（P=0.029），與其他臨床病理參數(shù)及其他分子標(biāo)記物無(wú)關(guān)。本實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)EGFRvⅢ表達(dá)與臨床病理參數(shù)及分子標(biāo)記物有關(guān)。見(jiàn)表1。

2.2 EGFR蛋白表達(dá)與EGFRvⅢ蛋白表達(dá)的關(guān)系 13.1%（8/61）EGFR蛋白陽(yáng)性表達(dá)膠質(zhì)瘤病例表達(dá)EGFRvⅢ蛋白，EGFR蛋白陰性膠質(zhì)瘤病例未發(fā)現(xiàn)有EGFRvⅢ蛋白的陽(yáng)性表達(dá)，兩者呈正相關(guān)（r=0.242，P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 EGFR、EGFRvⅢ蛋白表達(dá)與膠質(zhì)瘤的預(yù)后分析 用電話(huà)及智慧電子病歷系統(tǒng)進(jìn)行隨訪(fǎng)，失訪(fǎng)7率，隨訪(fǎng)率93.3%;至隨訪(fǎng)截止日期（隨訪(fǎng)截止日期為2019年10月1日），本組病例死亡60例，占57.7%（60/104）。本組病例總生存期均值為（35.96±3.07）個(gè)月;中位生存期為（27.50±5.72）個(gè)月。Kaplan-Meier生存分析顯示EGFR蛋白表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者生存無(wú)關(guān)（P>0.05），EGFRvⅢ蛋白表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者生存有關(guān)（P<0.05）。年齡、組織學(xué)級(jí)別、KPS評(píng)分、治療方案、IDH1基因突變、ATRX基因突變與膠質(zhì)瘤患者生存有關(guān)（P<0.05），其他與膠質(zhì)瘤生存無(wú)關(guān)（P>0.05）。見(jiàn)表3。Cox多因素分析顯示年齡、組織學(xué)級(jí)別、治療方案及IDH1突變是膠質(zhì)瘤患者獨(dú)立的預(yù)后因素（P<0.05），EGFRvⅢ不是膠質(zhì)瘤患者獨(dú)立的預(yù)后因素（P>0.05）。見(jiàn)表4。

3 討論

EGFR是一種相對(duì)分子質(zhì)量為170KD的跨膜蛋白受體，由三個(gè)功能區(qū)組成：胞外配體連接區(qū)、單鏈跨膜區(qū)和胞內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)。其配體有表皮生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、雙向調(diào)節(jié)因子及神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白等，一旦胞外區(qū)與配體連接，就會(huì)發(fā)生同源或異源二聚化，導(dǎo)致胞內(nèi)區(qū)中酪氨酸殘基自體磷酸化，激活下游的信號(hào)通路，調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化和凋亡，并參與腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移和血管發(fā)生等。EGFRvⅢ是EGFR的胞外區(qū)框內(nèi)缺失性突變，其胞外部分的2-7號(hào)外顯子缺失，導(dǎo)致801個(gè)堿基對(duì)缺失，使外顯子1和外顯子8相連接并融合產(chǎn)生一個(gè)新的氨基酸--甘氨酸，即為EGFRvⅢ突變。EGFRvⅢ突變體喪失了連接配體的功能，但可以在不依賴(lài)配體的情況下組成型激活酪氨酸激酶，產(chǎn)生自體磷酸化、誘發(fā)下游信號(hào)傳導(dǎo)通路、引起級(jí)聯(lián)反應(yīng)，參與腫瘤的進(jìn)程[1，3]。

本文的數(shù)據(jù)顯示EGFR蛋白過(guò)表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后無(wú)關(guān)，而EGFRvⅢ表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者的不良預(yù)后相關(guān)，提示EGFR/EGFRvⅢ基因擴(kuò)增/突變可能僅僅是評(píng)估預(yù)后的一項(xiàng)因素，本文數(shù)據(jù)不支持EGFRvⅢ為獨(dú)立的顯著的不良預(yù)后的預(yù)測(cè)因素。

EGFR/EGFRvⅢ基因擴(kuò)增/突變參與膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展已取得了廣泛共識(shí)[1-3]。但其在膠質(zhì)瘤患者中的預(yù)后意義一直存在爭(zhēng)議，許多研究報(bào)告了關(guān)于EGFR/EGFRvⅢ作為預(yù)后標(biāo)志的相互矛盾的證據(jù)[4-9]，例如Shinojima等[4]研究表明EGFR擴(kuò)增是一個(gè)獨(dú)立的、顯著的、負(fù)性生存預(yù)測(cè)因子，尤其對(duì)于<60歲的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者;EGFR擴(kuò)增的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，EGFRvIII的過(guò)度表達(dá)是不良生存預(yù)后的獨(dú)立的顯著的預(yù)測(cè)指標(biāo)。Lv等[5]認(rèn)為EGFR擴(kuò)增與無(wú)進(jìn)展生存期相關(guān)，而不能預(yù)測(cè)總生存期。Hobbs等[6]的資料則認(rèn)為EGFR的預(yù)后價(jià)值與基因擴(kuò)增強(qiáng)度相關(guān)，EGFR基因高度擴(kuò)增組總生存期明顯優(yōu)于低度擴(kuò)增組及無(wú)擴(kuò)增組。Bieńkowski等[7]研究認(rèn)為EGFR的預(yù)后價(jià)值需與其他分子標(biāo)記物聯(lián)合評(píng)估，例如EGFR擴(kuò)增合并CDKN2A缺失預(yù)后較好;而EGFR擴(kuò)增合并7號(hào)染色體多體則預(yù)后差;Heimberger等[8]認(rèn)為EGFR/EGFRvⅢ基因擴(kuò)增/突變均不能獨(dú)立預(yù)測(cè)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的總生存期;但對(duì)于生存期大于等于1年的患者，EGFRvⅢ蛋白表達(dá)是一個(gè)顯著的獨(dú)立的負(fù)性預(yù)后指標(biāo)。van den Bent等[9]的隨機(jī)臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)EGFRvⅢ蛋白表達(dá)與較長(zhǎng)的無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間相關(guān);部分研究則提示EGFRvⅢ蛋白擴(kuò)增與預(yù)后無(wú)關(guān)[4，8]。研究結(jié)果的不一致可能與不同的EGFR/EGFRvⅢ檢測(cè)技術(shù)及評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)、不完全的臨床資料、研究人員的主觀(guān)性、腫瘤異質(zhì)性等有關(guān)。本研究中的樣本數(shù)量較少，研究對(duì)象為可手術(shù)治療的膠質(zhì)瘤患者，而忽略了那些不能接受手術(shù)治療的患者，可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。目前報(bào)道的多為單中心小樣本的研究，因此，需闡明EGFR/EGFRvⅢ基因擴(kuò)增/突變對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值，多中心大樣本的研究必不可少。

EGFR/EGFRvⅢ蛋白表達(dá)和基因異常是膠質(zhì)瘤靶向治療中的重要靶點(diǎn)，尤其是EGFRvⅢ只在惡性腫瘤中表達(dá)，利用EGFRvⅢ單抗可特異識(shí)別膠質(zhì)瘤細(xì)胞，同時(shí)可以發(fā)揮靶向治療的作用。然而在膠質(zhì)瘤患者的臨床試驗(yàn)中，EGFR/EGFRvⅢ靶向治療的效果尚不滿(mǎn)意[1-3，5，9-10]，寄予重望的EGFRvⅢ重排疫苗制劑Rindopepimut在Ⅲ期臨床試驗(yàn)中不得不在試驗(yàn)中期分析后終止[11]。EGFR/EGFRvⅢ靶向治療的臨床應(yīng)用尚需更深入的基礎(chǔ)與臨床研究。

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（收稿日期：2019-11-27） （本文編輯：周亞杰）