子宮內膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達變化及其臨床意義

張宇靖，騰紅，周炫妤

中國人民解放軍92493部隊醫(yī)院，遼寧葫蘆島125001

子宮內膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，占女性惡性腫瘤總數(shù)的4%～7%[1]。與歐美發(fā)達國家相比，我國子宮內膜癌的發(fā)病率總體處于較低水平，但近年來持續(xù)上升并呈年輕化趨勢[1,2]。浸潤和轉移是影響惡性腫瘤治療效果和患者預后的重要因素[3]。因此，探索敏感性高、特異性強的腫瘤標志物對惡性腫瘤早期診斷、預測病情和預后具有重要意義。隨著腫瘤發(fā)病分子機制研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)了多種與腫瘤發(fā)生、發(fā)展相關的因子[4]。E-鈣黏蛋白(E-cadherin)是一種主要在上皮細胞膜表達的跨膜糖蛋白，能夠介導上皮細胞間的黏附連接，對維持正常上皮細胞形態(tài)和結構完整具有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，在非小細胞肺癌、肝癌、結直腸癌等惡性腫瘤組織中E-cadherin異常表達，并與腫瘤進展和患者預后密切相關[5～7]。跨膜絲氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)屬于Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白家族成員之一。研究發(fā)現(xiàn)，TMPRSS4表達上調能夠介導腫瘤細胞的惡性增殖、侵襲和遷移，從而參與前列腺癌、乳腺癌、胃癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[8～10]。但目前E-cadherin、TMPRSS4表達變化與子宮內膜癌發(fā)生、發(fā)展的關系尚不清楚。為此，本研究觀察了子宮內膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達變化，并探討其表達變化與腫瘤進展和患者預后的關系。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2014年5月～2016年5月中國人民解放軍92493部隊醫(yī)院收治的子宮內膜癌患者93例(觀察組)。所有患者經(jīng)術后組織病理檢查明確診斷。納入標準：①符合子宮內膜癌診斷；②初診；③接受子宮切除手術，包括廣泛子宮切除手術聯(lián)合雙側附件切除手術或盆腔淋巴結清掃術以及筋膜外全子宮切除術；④術前未接受任何抗腫瘤治療；⑤預計生存時間>6個月；⑥臨床病理資料和隨訪資料完整。排除標準：①合并心、肝、腎等重要臟器嚴重功能障礙或凝血功能障礙者；②合并急慢性炎癥性疾病、自身免疫性疾病或其他部位惡性腫瘤者；③術前接受任何抗腫瘤治療者；④妊娠期或哺乳期女性；⑤合并其他惡性腫瘤者。患者年齡29～73(60.87±10.24)歲，其中<60歲41例、≥60歲52例；絕經(jīng)狀態(tài)：絕經(jīng)前34例，絕經(jīng)后59例；組織學類型：腺癌72例，鱗癌21例；FIGO分期[11]：Ⅰ、Ⅱ期58例，Ⅲ、Ⅳ期35例；組織分化程度：低未分化37例，高中分化56例；浸潤深度：未浸潤31例，淺肌層38例，深肌層24例；有淋巴結轉移30例，無淋巴結轉移63例。同期隨機選擇中國人民解放軍92493部隊醫(yī)院收治的，因陰道流血行診斷性刮宮并經(jīng)組織病理檢查證實為正常子宮內膜患者45例(對照組)，年齡30～76(58.92±11.35)歲。兩組年齡具有可比性。本研究經(jīng)中國人民解放軍92493部隊醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，所有研究對象或其家屬知情同意。

1.2 E-cadherin、TMPRSS4表達檢測 采用免疫組化SP法。取手術切除的子宮內膜癌組織和診斷性刮宮獲取的正常子宮內膜組織，4%多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。然后將切片置于65 ℃烤箱烘片30 min，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，3%過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶活性，檸檬酸抗原修復液(pH 6.0)加熱修復抗原，自然冷卻至室溫。山羊血清封閉液封閉后，分別加入兔抗人E-cadherin、TMPRSS4一抗，4 ℃過夜。次日加入HRP標記的二抗室溫孵育20 min后，加入鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶復合物37 ℃孵育30 min，DAB染色，蘇木精復染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知E-cadherin、TMPRSS4陽性切片作為陽性對照。

采用雙盲法由兩位病理科醫(yī)師獨立閱片。E-cadherin、TMPRSS4陽性染色主要定位于胞質中，呈棕褐色或深褐色顆粒。每張切片隨機選取5個400倍視野，評估染色強度，并計算陽性細胞比例。染色強度：未著色為0分，淺棕色為1分，棕色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞比例：無陽性細胞為0分，≤25%為1分，>25%～<50%為2分，≥50%為3分。以染色強度和陽性細胞比例綜合評估陽性表達[12]，二者評分乘積≥1即為陽性表達。

1.3 隨訪 子宮內膜癌患者術后采用門診、電話等形式定期隨訪，術后2年內每3個月隨訪1次、術后第3年開始每6個月隨訪1次，共隨訪時間為3年。終點事件為患者死亡。統(tǒng)計患者生存時間，計算3年生存率。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS24.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗或秩和檢驗。相關性分析采用Spearman秩相關分析。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組E-cadherin、TMPRSS4表達比較 觀察組與對照組E-cadherin陽性表達率分別為38.71%(36/93)、73.33%(33/45)，TMPRSS4陽性表達率分別為78.49%(73/93)、31.11%(14/45)。觀察組E-cadherin陽性表達率低于對照組，TMPRSS4陽性表達率高于對照組(χ2分別為14.542、29.224，P均<0.05)。

2.2 子宮內膜癌組織E-cadherin表達與TMPRSS4表達的關系 Spearman秩相關分析顯示，子宮內膜癌組織E-cadherin表達與TMPRSS4表達呈負相關關系(rs=-0.672，P<0.05)。

2.3 子宮內膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達與患者臨床病理特征的關系 子宮內膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達均與FIGO分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結轉移有關(P均<0.05)，而與年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、組織學類型無關(P均>0.05)。見表1。

2.4 子宮內膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達與患者預后的關系 截至隨訪日期，共隨訪17～36個月，中位隨訪時間為25個月，死亡37例，無失訪病例。

子宮內膜癌組織E-cadherin陽性表達者生存時間22～35個月、中位生存時間29個月，3年生存率為80.56%(29/36)；E-cadherin陰性表達者生存時間16～31個月、中位生存時間24個月，3年生存率為47.37%(27/57)。子宮內膜癌組織E-cadherin陽性表達者中位生存時間、3年生存率均高于E-cadherin陰性表達者(χ2分別為9.053、7.231，P均<0.05)。

子宮內膜癌組織TMPRSS4陽性表達者生存時間15～29個月、中位生存時間22個月，3年生存率為53.42%(39/73)；TMPRSS4陰性表達者生存時間27～36個月、中位生存時間32個月，3年生存率為85.00%(17/20)。子宮內膜癌組織TMPRSS4陽性表達者中位生存時間、3年生存率均低于TMPRSS4陰性表達者(χ2分別為12.521、16.085，P均<0.05)。

表1 子宮內膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達與患者臨床病理特征的關系

3 討論

子宮內膜癌是發(fā)生于子宮內膜的一組上皮性惡性腫瘤，是女性生殖系統(tǒng)三大常見惡性腫瘤之一，多發(fā)生于圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后婦女。近年來隨著我國經(jīng)濟快速發(fā)展和居民生活方式轉變，子宮內膜癌的發(fā)病率逐年升高并呈年輕化趨勢，已成為威脅女性健康和生活質量的主要疾病之一。子宮內膜癌早期以手術治療為主，治療效果較好，中晚期多采取手術聯(lián)合放化療治療，患者預后較差，5年生存率較低。目前認為，浸潤和轉移是導致子宮內膜癌患者預后較差的重要因素[13,14]。因此，早期診斷子宮內膜癌，對臨床制定針對性干預措施具有重要意義。但目前缺少有效的早期子宮內膜癌篩查手段。

E-cadherin是一種存在于上皮細胞膜表面的細胞黏附分子，能夠介導上皮細胞間的黏附連接，同時還具有細胞骨架，對維持正常上皮細胞形態(tài)和結構完整具有重要作用。研究證實，在多種惡性腫瘤組織中E-cadherin異常表達，并與腫瘤進展和患者預后密切相關展[15]。Lopez-Verdin等[16]研究發(fā)現(xiàn)，E-cadherin表達下調能夠使細胞間的黏附作用降低，進而促進惡性腫瘤的侵襲和轉移。武鴻彪等[17]研究發(fā)現(xiàn)，E-cadherin能夠參與直腸癌的發(fā)生、發(fā)展，并可作為評估患者預后的分子標志物。Jang等[18]研究發(fā)現(xiàn)，E-cadherin在胃癌組織中表達下調，并與患者臨床病理特征密切相關，可作為胃癌輔助診斷和預后評估的重要分子標志物。TMPRSS4屬于Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白家族成員之一，具有水解蛋白酶體、介導細胞內外的多種傳導信號途徑等作用。有研究發(fā)現(xiàn)，TMPRSS4能夠通過激活uPA/uPAR受體系統(tǒng)和解整合素-金屬蛋白酶受體系統(tǒng)，引起Src、FAK、ERK、Rac1、JNK等信號傳導異常活化，繼而導致惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[19]。Mahati等[20]研究發(fā)現(xiàn)，TMPRSS4表達上調與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關，具有作為腫瘤診斷、病情評估和預后判斷腫瘤標志物的潛能。有研究還發(fā)現(xiàn)，TMPRSS4表達上調能夠促進腫瘤細胞的惡性增殖、侵襲和遷移，從而促進甲狀腺癌[21]、結腸癌[22]等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。但目前E-cadherin、TMPRSS4表達變化與子宮內膜癌發(fā)生、發(fā)展的關系尚不清楚。

本研究結果發(fā)現(xiàn)，觀察組E-cadherin陽性表達率低于對照組，TMPRSS4陽性表達率高于對照組，提示在子宮內膜癌組織存在E-cadherin、TMPRSS4異常表達現(xiàn)象，其異常表達能夠參與子宮內膜癌形成。E-cadherin正常表達對維持上皮細胞形態(tài)和結構完整具有重要作用，當其表達下調或表達缺失時，可引起腫瘤細胞惡性增殖，從而促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。TMPRSS4與相應細胞因子作用可使蛋白酶激活，進而啟動腫瘤相關基因表達，促進腫瘤細胞增殖并抑制其凋亡。本研究結果發(fā)現(xiàn)，子宮內膜癌組織E-cadherin、TMPRSS4表達均與FIGO分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結轉移有關，而與年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、組織學類型無關。提示E-cadherin、TMPRSS4表達變化與子宮內膜癌侵襲和轉移密切相關，可作為評估子宮內膜癌病情程度的分子標志物。本研究結果發(fā)現(xiàn)，子宮內膜癌組織E-cadherin表達與TMPRSS4表達呈負相關關系，提示E-cadherin、TMPRSS4可能通過相互作用共同介導子宮內膜癌的侵襲和轉移。在子宮內膜癌中E-cadherin表達與TMPRSS4表達具體的作用機制尚不完全清楚，可能是E-cadherin表達下調能夠減弱腫瘤細胞間的黏附作用，使腫瘤細胞從原始部位脫離或穿過基底膜侵犯周圍組織；TMPRSS4表達上調能夠促進腫瘤新生血管生成，促進惡性腫瘤的浸潤和轉移；TMPRSS4通過介導整合素α5表達及其信號傳導途徑，抑制E-cadherin表達，誘導腫瘤細胞侵襲和遷移。本研究結果還發(fā)現(xiàn)，子宮內膜癌組織E-cadherin陽性表達者中位生存時間、3年生存率均高于E-cadherin陰性表達者；子宮內膜癌組織TMPRSS4陽性表達者中位生存時間、3年生存率均低于TMPRSS4陰性表達者。提示E-cadherin、TMPRSS4異常表達與子宮內膜癌患者預后密切相關，有可能作為子宮內膜癌預后評估的分子標志物。

綜上所述，子宮內膜癌組織E-cadherin表達下調、TMPRSS4表達上調，二者表達變化與子宮內膜癌的發(fā)生、發(fā)展和患者預后密切相關。E-cadherin、TMPRSS4有可能成為子宮內膜癌早期診斷、病情評估和預后判斷的生物標志物。