肝豆靈對高銅負荷大鼠空間學習記憶能力及神經干細胞ROS水平的影響

匡春俊 董 婷 周 萍 李秀英 田麗偉 黃 鵬

1.安徽中醫藥大學，安徽 合肥 230038；2.安徽中醫藥大學第一附屬醫院腦病中心，安徽 合肥230031

Wilson病(Wilson’s disease,WD)，即肝豆狀核變性(hepatolenticular degeneration,HLD)，是ATP7B基因缺陷引起的銅代謝障礙疾病。患者因基因缺陷不能清除體內多余的銅，使銅離子沉積于腦部、肝臟、腎臟、皮膚、眼部等臟器系統，使各組織臟器銅中毒受損而出現多樣的臨床表現。銅作為強氧化劑，可激活自由基，促進ROS的產生[1]，誘發氧化應激反應，使神經細胞凋亡。銅沉積腦部，神經系統受損，出現進行性智力減退[2-3]、精神異常等癥狀。在祖國醫學研究中，將WD以認知能力下降為主要臨床表現的辨病為“癡呆病”，其中“痰瘀互結型”易出現認知障礙。安徽中醫藥大學第一附屬醫院腦病中心為WD患者研制的肝豆靈(Gan dou liang,GDL)具有化痰祛瘀作用，課題組前期研究發現肝豆靈能夠明顯改善WD患者認知障礙[4]，提高患者智力水平。課題組在WD病程研究過程中發現，NSC是高銅負荷的重要靶點，肝豆靈能抵抗高銅導致的NSC生長阻礙，從而發揮神經保護作用[5]。因此，本研究從動物、分子水平，利用課題組前期體外建立的高銅培養NSC模型[6]，予以藥物“肝豆靈”干預，觀察胎鼠海馬組織NSC中ROS水平的高低，為探討肝豆靈對高銅誘導的NSC損傷小鼠的神經保護作用及其分子機制提供研究基礎。

1 實驗材料

1.1 動物 體重200～220 g SD大鼠75只，SPF級，由安徽動物中心提供，許可證號為SCXK(皖)2014-002。大鼠于專用清潔實驗室飼養1周，溫度25℃，相對濕度50%～70%，模擬自然晝夜循環光照的非直射光線。孕14 d ICR小鼠3只，適應性喂養后取胚胎海馬組織，分離并培養NSC。……