超高效液相色譜法檢測白酒中乳酸含量的方法及方法確認

白麗真，劉洪銀，劉 偉，張 帆，朱婷婷，魏金旺

（北京順鑫農業股份有限公司牛欄山酒廠，北京 101301）

乳酸是白酒發酵過程中的發酵產物，在白酒發酵中，它與酒精同時產生，是白酒中重要的呈香呈味物質，適量的乳酸可起到調和酒體的作用，使酒體更加協調、柔順，但是乳酸含量偏高，會使酒體產生澀感。因此準確定量白酒中乳酸含量可以判斷白酒發酵是否正常，也對白酒開發和勾調工作有重要的指導意義[1-5]。

白酒中風味成分的檢測普遍采用氣相色譜法，然而由于乳酸的熱不穩定性，因此，不能用氣相色譜法將其準確定量。據文獻報道，白酒中乳酸的檢測方法有液相色譜法、芐酯化法、離子色譜法、近紅外光譜法等[6-12]。這些方法各有其優點，但也存在著前處理復雜，操作繁瑣，不能準確定量等問題，尋找一種既簡單又快速準確的檢測白酒中乳酸的方法對白酒基酒生產以及白酒品質的提升有著非常重要的指導意義。

本實驗中采用簡單的前處理方法——將白酒直接去酒精定容，過膜進樣，去除了白酒中其他揮發性成分的干擾。用超高效液相色譜法檢測，進樣時間為3 min。結果準確，靈敏度高，檢出限低，經濟有效，該方法可用于白酒中乳酸含量的測定。

1 材料和方法

1.1 儀器、試劑和樣品

超高效液相色譜儀(ACQUITY UPLC?,美國Waters 公司)，配二極管陣列檢測器；Milli-Q Reference超純水發生器(美國Millipore公司)；電熱板（廣州格丹納儀器有限公司）；pH 儀（PHS-3C，上海儀電科學儀器股份有限公司）；萬分之一分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；移液槍（Transferpette?S，普蘭德（上海）貿易有限公司）；0.22 μm 有機濾膜（天津市津騰實驗設備有限公司）。

甲醇（LC/MS 級，Fisher）；實驗用水為Milli-Q超純水；乳酸（色譜純，天津市光復精細化工研究所）；磷酸（分析純，北京化工廠）；磷酸二氫銨（優級純，天津市光復精細化工研究所）。

樣品為3種市售白酒樣品。

1.2 實驗方法

1+1磷酸溶液的制備：量取25 mL磷酸，緩慢加入到裝有25 mL水的試劑瓶中，搖勻。

0.0025 M 磷酸二氫銨溶液的制備：稱取0.2874 g 磷酸二氫銨，用超純水溶解，然后用1+1 磷酸溶液調節pH為2.5，用水定容至1000 mL。

樣品前處理：準確量取10 mL 酒樣于50 mL 玻璃燒杯，置于電熱板上，100 ℃蒸發去酒精處理至大約1 mL，將剩余的樣品用超純水定容至10 mL，過0.22 μm水系濾膜，待上機分析。

標準曲線溶液的配制：準確稱取0.1 g 乳酸至100 mL 容量瓶，用超純水溶解并定容到100 mL，為1000 mg/L 乳酸儲備液，將其分別稀釋至不同的濃度。

1.3 色譜條件

色譜柱，ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)；柱溫35 ℃；樣品室溫度20 ℃；進樣體積3 μL；流動相為A=磷酸二氫銨，B=甲醇；流速0.3 mL/min；檢測波長210 nm；流動相比例為A∶B=95∶5；進樣時間為3 min。

2 結果與分析

2.1 標準曲線和線性關系

配制乳酸濃度為20 mg/L、40 mg/L、60 mg/L、80 mg/L、100 mg/L 的標準溶液。進樣，各濃度標準溶液的色譜圖見圖1，乳酸保留時間為1.16 min。以濃度為橫坐標X，峰面積為縱坐標Y，線性回歸做標準曲線，得到乳酸線性方程為Y=8.48×102X-42.3，相關系數R2=0.9997。見圖2。

2.2 精密度

取濃度為40 mg/L 溶液進樣，共6 次。結果見表1，乳酸的RSD為0.23%。

表1 乳酸精密度數據

2.3 加標回收率（表2）

白酒中的乳酸含量較高，且每種酒的含量都不同，因此在考察加標回收率時，選用了3 種不同的白酒分別添加一定量的乳酸，做加標回收。選取20 mg/L、40 m/L 和80 mg/L 3 個樣（標準曲線的濃度范圍是20～100 mg/L）。具體步驟如下：

①空白酒樣：準確量取10 mL 酒樣于50 mL 燒杯中，前處理進樣。

②加標20 mg/L、40 m/L、80 mg/L 乳酸：用酒樣稀釋乳酸原標液至相應濃度，定容至10 mL。去酒精前處理后進樣。

③3個酒樣重復上述處理進樣。

3個酒樣加標回收率在90%～110%之間（表2）。

表2 乳酸加標回收率數據表

2.4 檢出限

以信噪比（S/N）為3 確定檢出限（LOD），最終確定乳酸檢出限為1 mg/L。

3 結論

本文建立用超高效液相色譜快速檢測白酒中乳酸含量的分析方法。白酒樣品經電熱板加熱去酒精后，定容過濾，直接進樣，等度洗脫分析，進樣時間只有3 min。在線性范圍內，乳酸有較好的線性關系，R2為0.9997，加標回收率為90%～110%，RSD 為0.23%，檢出限為1 mg/L。經方法驗證，該方法滿足要求，可用于白酒中乳酸含量的檢測。與其他方法相比，該方法操作簡單、方法準確、經濟快速，可為白酒行業的發展提供一定的技術支持。