李文斌,尚興樸,陳彩霞,羅琳,閆濱濱,鄧庭偉,侯俊玲,4*,王文全,,4*
1.北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院,北京 102488;2.中國(guó)中藥有限公司,北京 100195;3.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所,北京 100193;4.中藥材規(guī)范化生產(chǎn)教育部工程研究中心,北京 102488;
種子種苗是中藥材生產(chǎn)的物質(zhì)基礎(chǔ),優(yōu)良品種及優(yōu)質(zhì)的種子種苗是實(shí)現(xiàn)中藥材規(guī)范化生產(chǎn)的基礎(chǔ)和首要條件[1]。目前,中藥材種子種苗生產(chǎn)與流通存在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)缺乏或不完善、經(jīng)營(yíng)不規(guī)范的問(wèn)題,與農(nóng)作物、煙草種、草種等的品種選育和種子種苗標(biāo)準(zhǔn)化的進(jìn)程相比還非常落后。而中藥材質(zhì)量的穩(wěn)定需要中藥材生產(chǎn)的規(guī)范化,中藥材生產(chǎn)的規(guī)范化需要中藥材種子種苗生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化。隨著中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,中藥材種子種苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的重要程度日益顯現(xiàn)。
甘草為豆科多年生植物,以根和根莖入藥,為我國(guó)常用大宗藥材。目前,栽培甘草已經(jīng)成為甘草藥材商品的主流,種植方式主要為種子直播與種苗移栽,而質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的缺乏與不完善也是導(dǎo)致甘草藥材質(zhì)量不穩(wěn)定的重要原因[2-3]。因此,對(duì)全國(guó)主產(chǎn)區(qū)所流通的甘草種子、種苗開展質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的研究,以期為甘草藥材的規(guī)范化生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)與指導(dǎo)。
甘草種子于2016年9月分別搜集于內(nèi)蒙古、甘肅、新疆等地,經(jīng)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所王文全教授鑒定為甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的種子。種子產(chǎn)地來(lái)源信息見表1。
2017年4—6月,對(duì)我國(guó)甘草主要分布區(qū)的生產(chǎn)用種苗進(jìn)行收集、調(diào)查,收集到8個(gè)批次的甘草種苗樣品,共4994株,收集數(shù)據(jù)1600組。經(jīng)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所王文全教授鑒定為甘草G.uralensisFisch.的種苗。種苗產(chǎn)地來(lái)源信息見表2。

表1 甘草種子的來(lái)源信息
注:A.中藥材專業(yè)市場(chǎng)收集;B.地方商戶收集;C.藥材產(chǎn)地收集;D.從植株直接采集。

表2 甘草種苗的產(chǎn)地信息
甘草種子的發(fā)芽率、凈度、千粒質(zhì)量、含水量的測(cè)定方法參照GB/T 3543.1—3543.7《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程》與于福來(lái)等[4]的研究結(jié)果。使用卷尺與游標(biāo)卡尺分別測(cè)量種苗的根長(zhǎng)與蘆頭直徑(蘆頭下1 cm處直徑),鉤秤測(cè)定百株質(zhì)量。參考金燕清等[5]的測(cè)定方法測(cè)定甘草酸、甘草苷的相對(duì)含量。
甘草種子質(zhì)量分級(jí)方法采用K-均值聚類法對(duì)30份甘草種子的發(fā)芽率、凈度2個(gè)質(zhì)量指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行K-均值聚類分析。含水量采用標(biāo)準(zhǔn)差法。
甘草種苗質(zhì)量分級(jí)方法,根長(zhǎng)和蘆頭直徑采用標(biāo)準(zhǔn)差法,平均值加1倍的標(biāo)準(zhǔn)差作為一、二等的分界點(diǎn),平均值作為二、三等的分界點(diǎn),平均值減1倍標(biāo)準(zhǔn)差為三等的下限點(diǎn)。百株質(zhì)量采用平均值法,各級(jí)種苗的百株質(zhì)量平均值作為各級(jí)種苗的上限,對(duì)所調(diào)查種苗樣本進(jìn)行初步分級(jí)。所得數(shù)據(jù)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)室分級(jí)結(jié)果,分別選擇一、二、三級(jí)以及混合等級(jí)種子進(jìn)行田間比較試驗(yàn)。試驗(yàn)地點(diǎn)設(shè)于北京中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所試驗(yàn)田,砂質(zhì)壤土。小區(qū)面積2 m2,3次重復(fù)。采用條播方式,行距15 cm,用種量約700粒/小區(qū)。小區(qū)間設(shè)置20 cm為保護(hù)行(隔離區(qū))。2017年10月上旬對(duì)影響甘草藥材產(chǎn)量的根系參數(shù)進(jìn)行調(diào)查。每個(gè)小區(qū)取15株用于根參數(shù)調(diào)查,并對(duì)單株質(zhì)量及單位面積的藥材產(chǎn)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
根據(jù)種苗初步分級(jí)結(jié)果,分別選擇一、二、三級(jí)以及等外等級(jí)種苗進(jìn)行田間比較試驗(yàn)。試驗(yàn)地點(diǎn)設(shè)在甘肅民勤農(nóng)田地,砂質(zhì)壤土。小區(qū)面積2 m2,3次重復(fù)。各等級(jí)種苗采用平栽方式,行距15 cm,每個(gè)小區(qū)100株。小區(qū)間設(shè)置20 cm為保護(hù)行(隔離區(qū))。為了降低由于出苗率導(dǎo)致的株行距改變帶來(lái)的影響,于2017年7月下旬利用儲(chǔ)備的同一批材料進(jìn)行補(bǔ)栽。2017年7月下旬對(duì)出苗率進(jìn)行調(diào)查。分別于2017年10月上旬、2018年10月上旬進(jìn)行取樣,每小區(qū)取10株用于根參數(shù)調(diào)查,并對(duì)單株質(zhì)量及單位面積的藥材產(chǎn)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
3.1.1種子質(zhì)量分級(jí)指標(biāo)的確定 發(fā)芽率、含水量、凈度、千粒質(zhì)量、純度、生活力等指標(biāo)常在甘草種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定中被使用(見表3)[6]。其中,發(fā)芽率是甘草發(fā)芽能力的重要指標(biāo),是種子內(nèi)在質(zhì)量的反映,為種子等級(jí)劃分的決定性指標(biāo)。凈度是反映甘草商品性狀的重要指標(biāo),在甘草種子的流通中,經(jīng)常混有大量的雜質(zhì),給生產(chǎn)帶來(lái)嚴(yán)重影響,因此適當(dāng)提高凈度標(biāo)準(zhǔn)有利于甘草種子商品質(zhì)量的整體提高。甘草千粒質(zhì)量受種質(zhì)影響大,不同種質(zhì)千粒質(zhì)量差異顯著[7]。含水量受氣候影響大,主要影響種子貯藏。因此,選擇發(fā)芽率、含水量作為甘草種子質(zhì)量分級(jí)的主要指標(biāo),千粒質(zhì)量和含水量作為重要的定性指標(biāo)。

表3 甘草種子的部分質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
3.1.2種子質(zhì)量分級(jí) 通過(guò)測(cè)定30份甘草種子的發(fā)芽率、凈度、千粒質(zhì)量和含水量(見表4),并采用K-均值聚類法對(duì)30份甘草種子的發(fā)芽率、凈度2個(gè)指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類分析,共分成3類,即3個(gè)等級(jí)(見表5),方差分析表明,不同種子間發(fā)芽率、凈度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而不同野生甘草種群種子的千粒質(zhì)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,含水量與種子貯藏有關(guān),因此只作為這2項(xiàng)指標(biāo)作為定性指標(biāo):千粒質(zhì)量的平均值為(10.95±1.33) g,最小值為8.5 g,千粒質(zhì)量一般為8~14 g,因此將8 g作為甘草種子的下限;含水量的平均值為(8.82±1.30)%,因此采用標(biāo)準(zhǔn)差法取其上限10.12%。依據(jù)以上結(jié)果形成草案,以此開展驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)。結(jié)合驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果、甘草種子流通與生產(chǎn)實(shí)際,對(duì)種子質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)草案進(jìn)行調(diào)整。同時(shí)為解決不同等級(jí)的等距問(wèn)題,以使標(biāo)準(zhǔn)更具操作性。將各指標(biāo)尾數(shù)采用05或5-10且逢2.5進(jìn)位取整法進(jìn)行修約,并將等外級(jí)別舍掉,結(jié)果見表6。

表4 不同來(lái)源甘草種子發(fā)芽率、凈度、千粒質(zhì)量及含水量

表5 甘草種子分級(jí)指標(biāo)K-均值聚類結(jié)果 %

表6 甘草種子分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)
3.1.3不同等級(jí)種子間產(chǎn)量相關(guān)指標(biāo)的比較 由表7可看出,3個(gè)等級(jí)間的根系參數(shù)有一定的不同,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,各等級(jí)單位面積保苗數(shù)與單位面積產(chǎn)量之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且一級(jí)>二級(jí)>三級(jí)。
單位面積產(chǎn)量(g)=單位面積保苗數(shù)(株)× 單株質(zhì)量(g)
(1)
當(dāng)各等級(jí)間的單根質(zhì)量相似時(shí),單位面積產(chǎn)量之間的差異來(lái)源于單位面積保苗數(shù)的差異。
單位面積保苗數(shù)(株)=[單位面積播種量(g)× 凈度(%)×發(fā)芽率(%)×出苗率(%)]/ 千粒質(zhì)量(g)
(2)
可見發(fā)芽率、凈度與單位面積保苗數(shù)呈正相關(guān)。因此發(fā)芽率和凈度不同的不同等級(jí)甘草種子,通過(guò)影響單位面積保苗數(shù),最終影響單位面積產(chǎn)量。
3.2.1種苗質(zhì)量分級(jí)指標(biāo)的確定 根長(zhǎng)、蘆頭下1 cm處直徑、蘆頭下20 cm處直徑、單株質(zhì)量為與藥材產(chǎn)量相關(guān)的重要指標(biāo)[8-9],根長(zhǎng)、蘆頭下1 cm直徑、蘆頭下20 cm直徑用于描述種苗和藥材的形態(tài),單株質(zhì)量則直接與產(chǎn)量相關(guān)。但蘆頭下20 cm直徑與單株質(zhì)量的測(cè)量在實(shí)際生產(chǎn)中不易操作,在種苗采購(gòu)中百株質(zhì)量為1項(xiàng)重要指標(biāo),常用來(lái)計(jì)算1批種苗的平均單株質(zhì)量。因此采用根長(zhǎng)、蘆頭下1 cm直徑、百株質(zhì)量這3個(gè)指標(biāo)用于甘草種苗的質(zhì)量分級(jí)。
3.2.2種苗質(zhì)量分級(jí) 測(cè)定1600株甘草種苗根長(zhǎng)和蘆頭直徑,結(jié)果顯示:平均蘆頭直徑為(0.59±0.24) cm,平均根長(zhǎng)為(35.84±9.59) cm,可見,甘草種苗在不分級(jí)的情況下,不同個(gè)體在蘆頭直徑和根長(zhǎng)指標(biāo)方面相差很大。按照2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行分級(jí),甘草種苗各等級(jí)的實(shí)際頻數(shù)分布顯示(見表8),一級(jí)苗為9.22%,二級(jí)苗為30.69%,三級(jí)苗為35.79%,等外苗為24.30%,合格率為75.70%,種苗各等級(jí)所占比例、合格率與種源、密度、田間管理有關(guān),其中,內(nèi)蒙種源種苗合格率高于較新疆種源種苗、一級(jí)種苗率。根長(zhǎng)和蘆頭直徑采用標(biāo)準(zhǔn)差

表7 不同等級(jí)種子間產(chǎn)量相關(guān)指標(biāo)
注:處理間多重比較采用LSD法。同列字母表示P<0.05。下同。

表8 甘草種苗各樣本的指標(biāo)分布情況
法,百株質(zhì)量采用平均值法,各級(jí)種苗的百株質(zhì)量平均值作為各級(jí)種苗的上限,為了限定三級(jí)苗百株質(zhì)量的下限,設(shè)置8批種苗中的三級(jí)苗的最小值0.20 kg作為三級(jí)苗的下限。依據(jù)種苗根長(zhǎng)、蘆頭直徑以及百株質(zhì)量的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行初步分級(jí),依據(jù)以上結(jié)果形成草案,以此開展驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)。結(jié)合驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果甘草種苗流通和生產(chǎn)實(shí)際,對(duì)種苗等級(jí)初步聚類結(jié)果進(jìn)行調(diào)整,結(jié)果見表9。

表9 甘草種苗質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)
3.2.3不同等級(jí)種苗間產(chǎn)量相關(guān)指標(biāo)的比較 由表10可知,不同等級(jí)的種苗的出苗率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=199.42),隨著等級(jí)的下降,出苗率逐漸下降。不同等級(jí)的種苗在移栽1年后的藥材在根長(zhǎng)、蘆頭直徑、單株質(zhì)量3個(gè)指標(biāo)方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義:一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種苗的根長(zhǎng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但均與等外等級(jí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=10.64);前三級(jí)與等外的蘆頭直徑差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=43.53);各級(jí)的單株質(zhì)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=64.41),且一級(jí)>二級(jí)>三級(jí)>等外。各級(jí)在單位面積的產(chǎn)量間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=464.99),二級(jí)和三級(jí)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,原因是二級(jí)種苗的株數(shù)為41株,三級(jí)種苗為48株,屬于取樣帶來(lái)的誤差,但二級(jí)種苗單位面積產(chǎn)量的平均值要大于三級(jí)。

表10 移栽1年后不同等級(jí)種苗間產(chǎn)量相關(guān)指標(biāo)

表11 移栽2年后不同等級(jí)種苗間產(chǎn)量相關(guān)指標(biāo)
由表11可知,不同等級(jí)的種苗在移栽2年后的藥材在根長(zhǎng)、蘆頭直徑、單株質(zhì)量3個(gè)指標(biāo)方面存在差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義:一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)種苗的根長(zhǎng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但均與等外等級(jí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.26,P<0.028 0);前三級(jí)與等外的蘆頭直徑差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=28.53),且一級(jí)>二級(jí)>三級(jí)>等外;在單株質(zhì)量方面,各等級(jí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=44.38),一級(jí)與二級(jí)顯著大于三級(jí)與等外。各等級(jí)在單位面積的產(chǎn)量間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=30.82),隨著等級(jí)逐級(jí)下降。
3.2.4不同等級(jí)種苗間質(zhì)量相關(guān)指標(biāo)的比較 據(jù)表12結(jié)果顯示:移栽1年后,不同等級(jí)的種苗在甘草酸、甘草苷含量方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義:一級(jí)和二級(jí)種苗對(duì)應(yīng)藥材中的甘草酸含量顯著(F=6.15,P<0.017 9)高于等外種苗對(duì)應(yīng)的藥材,前3級(jí)甘草酸含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但均值依次下降。前3級(jí)甘草苷含量(F=16.54,P<0.000 9)高于等外;移栽2年后,不同等級(jí)在甘草酸、甘草苷含量方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義:前3級(jí)種苗對(duì)應(yīng)藥材中的甘草酸含量顯著(F=35.61)高于等外種苗對(duì)應(yīng)的藥材,一級(jí)和二級(jí)的甘草酸含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與三級(jí)、等外相比均值依次下降;不同等級(jí)中甘草苷含量差異規(guī)律與甘草酸差異規(guī)律相似(F=69.44,P<0.000 1)。可見,不同等級(jí)種苗移栽1年和2年后,前3級(jí)種苗所對(duì)應(yīng)的藥材質(zhì)量均優(yōu)于等外等級(jí)。

表12 不同等級(jí)種苗間質(zhì)量相關(guān)指標(biāo) %
3.2.5不同等級(jí)種苗的綜合評(píng)價(jià) 利用主成分分析法分別對(duì)不同等級(jí)種苗移栽1年與移栽2年后藥材的產(chǎn)量與質(zhì)量進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。對(duì)不同等級(jí)種苗移栽1年藥材的4個(gè)產(chǎn)量相關(guān)指標(biāo)、2個(gè)質(zhì)量相關(guān)指標(biāo)以及出苗率指標(biāo)進(jìn)行主成分分析,提取特征值大于1的主成分,將7個(gè)指標(biāo)簡(jiǎn)化為2個(gè)因子,累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)97.67%,包含了7個(gè)指標(biāo)的絕大部分信息。計(jì)算各等級(jí)種苗的主成分得分,依次為2.26、0.82、-0.54、-2.54,即在出苗率、產(chǎn)量、質(zhì)量3個(gè)方面的綜合評(píng)價(jià)中一級(jí)種苗最高,二級(jí)和三級(jí)種苗依次次之,且均高于等外種苗。
利用相同方法對(duì)不同等級(jí)種苗移栽2年后藥材的4個(gè)產(chǎn)量相關(guān)指標(biāo)、2個(gè)質(zhì)量相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行主成分分析,提取特征值大于1的主成分,將6個(gè)指標(biāo)簡(jiǎn)化為1個(gè)因子,累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)93.20%,包含了6個(gè)指標(biāo)的絕大部分信息。計(jì)算各等級(jí)種苗的主成分得分,依次為2.66、0.94、-0.72、-2.88,即在產(chǎn)量、質(zhì)量2個(gè)方面的綜合評(píng)價(jià)中一級(jí)種苗最高,二級(jí)和三級(jí)種苗依次次之,且均高于等外種苗。
甘草種子質(zhì)量等級(jí)劃分為3個(gè)等級(jí),各級(jí)甘草種子的千粒質(zhì)量不低于8 g,含水量不低于10%,一級(jí)種子:發(fā)芽率≥90%,凈度≥90%;二級(jí)種子:90%>發(fā)芽率≥85%,90%>凈度≥85%;三級(jí)種子:85%>發(fā)芽率≥80%,85%>凈度≥80%,經(jīng)驗(yàn)證,甘草種子質(zhì)量等級(jí)劃分合理,以上3個(gè)等級(jí)的種子規(guī)定為合格種子,在實(shí)際生產(chǎn)中定級(jí)時(shí),任一指標(biāo)不滿足最低等級(jí)時(shí),定為不合格種子,指標(biāo)不能同時(shí)滿足同一等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)要求時(shí),按照最低指標(biāo)滿足的等級(jí)進(jìn)行定級(jí),例如:千粒質(zhì)量和含水量滿足要求,發(fā)芽率為95%,凈度為82%時(shí),則定為三級(jí)種子。與孫群等[6]、張國(guó)榮等[10]的研究結(jié)果相比,只將發(fā)芽率與凈度作為等級(jí)劃分的指標(biāo),簡(jiǎn)化了檢測(cè)步驟,更便于在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用。甘草種子等級(jí)主要影響單位面積保苗數(shù),后期的生長(zhǎng)將受到株行距改變的影響,單株質(zhì)量會(huì)產(chǎn)生一定的差異,但在規(guī)范的田間管理下,種植3年后的產(chǎn)量依然是受保苗數(shù)的影響較大。
甘草種苗質(zhì)量等級(jí)劃分為3個(gè)等級(jí),一級(jí)種苗:根長(zhǎng)≥45 cm,蘆頭直徑≥0.8 cm,1.3 kg≤百株質(zhì)量<0.8 kg;二級(jí)種苗:45 cm>根長(zhǎng)≥35 cm,0.8 cm>蘆頭直徑≥0.6 cm,0.8 kg≤百株質(zhì)量<0.4 kg;三級(jí)種苗:35 cm>根長(zhǎng)≥25 cm,0.6 cm>蘆頭直徑≥0.4 cm,0.4 kg≤百株質(zhì)量≤0.2 kg,經(jīng)驗(yàn)證,甘草種苗質(zhì)量等級(jí)劃分合理,以上3個(gè)等級(jí)的種苗規(guī)定為合格種苗,在實(shí)際生產(chǎn)中定級(jí)時(shí),種苗的根長(zhǎng)和蘆頭直徑作為分級(jí)操作的參照指標(biāo),而百株質(zhì)量作為分級(jí)操作后檢測(cè)復(fù)查的參照指標(biāo),當(dāng)任一指標(biāo)超出質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)范圍時(shí),定為不合格種苗,指標(biāo)不能同時(shí)滿足同一等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)要求時(shí),按照最低指標(biāo)滿足的等級(jí)進(jìn)行定級(jí)。同時(shí),通過(guò)移栽后1年和移栽后2年的數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比,發(fā)現(xiàn)其研究結(jié)果一致,說(shuō)明已經(jīng)分級(jí)的種苗在合理的采收年限內(nèi),不存在越級(jí)的情況。在田間對(duì)比試驗(yàn)中并未使用肥料,移栽2年后的藥材,一級(jí)和二級(jí)的甘草酸和甘草苷含量均符合《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn),等外的甘草酸和甘草苷含量則未達(dá)《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn),三級(jí)雖未達(dá)標(biāo),但其含量均接近《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)。金燕清等[5]和張豆豆等[11]的研究結(jié)果顯示,通過(guò)合理配施氮磷鉀肥料可以有效提高甘草酸和甘草苷的含量與藥材產(chǎn)量。可見,在規(guī)范的田間管理下合格種苗在移栽2年后均可以符合《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)。