甲型流感病毒的感染與白細胞VCS參數的相關性分析

孫海瓊 章曉燕 楊苗芬

流行性感冒是一種由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，也簡稱為流感，其感染癥狀主要表現為咽痛、發(fā)熱、流涕、頭痛等［1］。流感病毒為正粘病毒科，根據病毒核蛋白抗原不同可分為甲（A）、乙（B）、丙（C）3 型，其中甲型流感病毒最容易發(fā)生變異，是人類流感的主要病原體，具有流行性廣、傳染性強的特點，成為近年來影響公共健康的重大危險因素之一［2-4］。甲型流感的治療主要以抗病毒治療為主，感染初期為治療的最佳時期。因此早期診斷對于甲型流感患者的治療具有重要作用［5-6］。VCS 技術是美國貝克曼庫爾特公司的一項專利技術，其通過利用低頻電流分析細胞體積（volume）、高頻電磁探針檢測細胞核及核質比特性（conductivity）和激光掃描細胞顆粒信息（scatter）。其獨特的三維技術廣泛應用于白細胞分類和提供多項白細胞VCS 相關參數。該參數在多種疾病的輔助診斷具有重要價值［7］。本文探討白細胞VCS 參數在甲型流感病毒感染中的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019 年2 月至3 月本院經甲型/乙型流感病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法，杭州創(chuàng)新生物檢控技術有限公司）檢測結果為陽性的患者101例為甲流組，其中男45 例，女56 例；年齡18～66 歲，平均年齡（28.52±10.20）歲。同期完全隨機選取本院無癥狀健康體檢者101 例為對照組，其中男55 例，女46 例；年齡18～65 歲，平均年齡（29.75±9.61）歲。兩組年齡、性別差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 儀器與試劑 Beckman Coulter DxH800 型血液分析儀及其配套試劑、校準物。按儀器說明書進行校準、質量控制、保養(yǎng)及維護。每日進行室內質量控制評價，確保檢測時儀器狀態(tài)穩(wěn)定。

1.3 方法 （1）標本采集：首次就診未治療的成人患者及成人健康體檢者的靜脈血2.0ml 于EDTA-K2 紫色抗凝管中，充分混勻，2h 內上機完成檢測分析。利用電阻抗原理對白細胞進行計數，用高、低頻電流和激光技術對白細胞進行分類，并進行白細胞VCS 參數分析。（2）檢測指標：收集中性粒細胞（NE）、淋巴細胞（LY）和單核細胞（MO）的體積（V）、電導率（C）和5 個角度散射（S）參數的平均值（MN），共21 個參數。其中光散射參數為：中位角光散射（MALS）、高中位角光散射（UMALS）、低中位角光散射（LMALS）、低角度光散射（LALS）和軸向光吸收（AL2）。其中體積反映細胞大小，電導率反映核質比，光散射參數反映細胞的復雜性、顆粒度和細胞核結構，但AL2 細胞的大小是根據吸收光來確定的［8］。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學軟件。采用受試者工作特征曲線（ROC）分析VCS 參數在甲型流感病毒感染輔助診斷中的價值，以曲線下面積（AUC）分析檢測指標的診斷價值，以Youden 指數最高的結果為截斷點，對樣本進行預測，并與實際診斷結果進行對比，計算陽性預測值及陰性預測值。正態(tài)分布計量資料以（±s）表示；非正態(tài)分布資料以［M（Q1，Q3）］表示。兩組間比較采用Mann-Whitney U 檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料、血常規(guī)分類計數比較 見表1。

表1 兩組一般資料、血常規(guī)分類計數比較［M（Q1，Q3）］

2.2 VCS 參數比較 見表2～4。

2.3 ROC 曲線分析結果 （1）中性粒細胞ROC 曲線分析結果：從對照組中識別甲流感染的ROC 曲線表明，MN-V-NE（AUC 0.90，在截斷點150.5 處的靈敏度84.16%，特異性80.2%，陽性預測值80.95%，陰性預測值83.51%）和MN-UMALS-NE（AUC 0.96，在截斷點132.5 處靈敏度93.07%，特異性89.11%，陽性預測值89.52%，陰性預測值92.78%）具有高的診斷價值及良好的敏感性和特異性，見表5 和圖1。（2）淋巴細胞ROC 曲線分析結果：從對照組中識別甲流感染的ROC 曲線表明，MN-MALS-LY（AUC 0.99，在截斷點54.5 處的靈敏度95.05%，特異性99.01%，陽性預測值98.97%，陰性預測值95.24%）、MN-UMALSLY（AUC 0.99，在截斷點48.5 處的靈敏度96.04%，特異性95.05%，陽性預測值95.10%，陰性預測值96.00%）和MN-LMALS-LY（AUC 0.99，在截斷點49.5 處的靈敏度97.03%，特異性93.07%，陽性預測值93.33%，陰性預測值96.91%）具有很高的診斷價值及優(yōu)秀的敏感性和特異性，見表6 和圖2。（3）單核細胞ROC 曲線分析結果：從對照組中識別甲流感染的ROC 曲線表明，MN-V-MO（AUC 0.98，在截斷點173.5 處的靈敏度95.05%，特異性93.07%，陽性預測值93.20%，陰性預測值94.95%）、MN-MALS-MO（AUC 1，在截斷點73.5 處的靈敏度100.00%，特異性99.01%，陽性預測值99.02%，陰性預測值100.00%）、MN-UMALS-MO（AUC 1，在截斷點83.5 處的靈敏度99.01%，特異性98.02%，陽性預測值98.02%，陰性預測值99.00%）和MN-LMALS-MO（AUC 1，在截斷點60.5 處的靈敏度99.01%，特異性98.02%，陽性預測值98.04%，陰性預測值99.00%）具有優(yōu)秀的診斷價值及優(yōu)秀的敏感性和特異性，見表7 和圖3。

表2 兩組中性粒細胞的VCS 參數情況

表3 兩組淋巴細胞的VCS參數情況

表4 兩組單核細胞的VCS參數情況

圖1 中性粒細胞VCS參數的ROC曲線

圖2 淋巴細胞VCS參數的ROC曲線

圖3 單核細胞VCS參數的ROC曲線

表5 中性粒細胞VCS參數診斷甲型流感病毒染的ROC曲線分析（%）

表6 淋巴細胞VCS參數診斷甲型流感病毒染的ROC曲線分析（%）

表7 單核細胞VCS參數診斷甲型流感病毒染的ROC曲線分析（%）

3 討論

甲型流感初起的臨床癥狀通常為咽痛、發(fā)熱、流涕、頭痛等，與普通呼吸道感染癥狀相似，易導致診療的延誤。臨床醫(yī)師會通過血常規(guī)來初步辨別細菌感染和病毒感染。現有研究發(fā)現甲型流感病毒感染初期患者的血常規(guī)呈現一種不典型變化，即表現為WBC和NE%呈正常或升高，而LY%呈正常或降低［9］。造成這種不典型變化的原因，有學者認為是甲型流感病毒抑制機體細胞免疫功能，誘導淋巴細胞凋亡，導致LY%降低；而甲型流感早期易合并細菌感染，導致WBC 和NE%呈正常或升高［10］。本資料中甲型流感病毒感染初期患者的血常規(guī)表現為WBC 計數以正常（占91.09%的甲型流感患者）為主，NE%和MO%以正常及升高（分別占55.44%、44.55%；66.34%的甲型流感患者）為主，LY%則以降低（占80.20%的甲型流感患者）為主。由此可見，該種不典型血常規(guī)結果對甲型流感診斷具有一定參考價值。但因甲型流感病毒感染患者的血常規(guī)結果多變，血常規(guī)報告指標如WBC計數、NE%、LY%和MO%等用于甲型流感病毒的診斷敏感度還不夠，且具有一定局限性。VCS 技術的檢測原理即通過低頻電流分析體積，通過高頻傳導分析胞核和核質比等，通過激光散射分析胞質內顆粒結構特征，從而進行綜合評價分析準確對白細胞進行分類［11-13］。Beckman Coulter DxH800 全自動分析儀檢測結果表明，甲流組與對照組間除MN-LMALS-NE（P＞0.05）外，其余參數差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其中淋巴細胞和單核細胞的參數變化最大。甲流組淋巴細胞中除MN-C-LY 略微降低外，其余參數均升高，其中MN-MALS-LY、MN-UMALS-LY、MN-LMALS-LY 三個角度的光散射升高顯著。即表明甲型流感患者淋巴細胞的核質比略微變小，染色質致密度升高和（或）細胞質內顆粒變粗、變多，且研究中甲流組淋巴細胞的體積雖然變大但其仍然處于正常范圍。故研究中淋巴細胞VCS 參數的變化，符合甲型流感病毒誘導淋巴細胞凋亡的觀點。而與對照組比較，甲流組單核細胞除MN-LALS-MO 參數降低外，其余參數均顯著升高。表明單核細胞體積變大，核質比變大，胞漿內結構變復雜。推測淋巴細胞的凋亡激活單核巨噬系統(tǒng)對凋亡的細胞進行吞噬清除，MO%的升高也與此相符。至于中性粒細胞，與對照組相比，甲流組MN-V-NE 升高，而MN-C-NE 降低，表明中性粒細胞的體積變大、而核質比減少，推測這種變化可能是由于部分甲型流感患者在感染初期合并了細菌性感染而導致中性粒細胞激活，但甲流組的中性粒細胞還是以成熟中性粒細胞為主。

本資料結果表明，白細胞VCS 參數在甲型流感的診斷中具有較高的靈敏度和特異性，其中淋巴細胞和單核細胞的MN-MALS、MN-UMALS 和MN-LMALS三個參數的AUC 高＞0.99，具有較高的診斷價值，且計算所得的靈敏度和特異性均＞90%。可見白細胞VCS 參數對于輔助診斷甲型流感中具有很大的潛在價值，可幫助臨床醫(yī)師對感染患者及時進行治療。