血漿RUNX3基因啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)對(duì)宮頸癌早期診斷的價(jià)值研究

陳海倫 孫穎 唐莉菲

[摘要]目的探究血漿人類Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3（RUNX3）基因啟動(dòng)子甲基化對(duì)早期宮頸癌的診斷價(jià)值。方法選取80例宮頸癌患者作為A組，選取同期80例宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）患者作為B組，另選取80例正常宮頸組織切除者作為C組。對(duì)三組研究對(duì)象的宮頸癌組織、CIN組織、正常宮頸組織及血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)（MCP）進(jìn)行檢測(cè)。比較三組組織、血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率，分析宮頸癌病理特征與RUNX3啟動(dòng)子甲基化表達(dá)及RUNX3蛋白表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果A組組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為86.25%，血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為73.75%;B組組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為33.75%，血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為26.25%;C組組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為3.75%，血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為0;A組組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率和血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率均高于B組和C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。血漿、組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常與臨床分期、腫瘤分化程度、病理類型、淋巴轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性（P<0.05）。宮頸癌患者RUNX3蛋白異常表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、臨床分期存在相關(guān)性（P<0.05）。結(jié)論血漿RUNX3基因啟動(dòng)子甲基化異常可提示宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，為早期診斷宮頸癌提供新方法。

[關(guān)鍵詞]宮頸癌;血漿人類Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3;宮頸上皮內(nèi)瘤變;甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.05.004

相關(guān)學(xué)者與專家認(rèn)為人乳頭瘤病毒（human?papillomavirus，HPV）是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的主要病因，宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展是多基因、多因素相互作用與影響形成的。血漿人類Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3（runt-related?transcription?factor gene 3，RUNX3）基因是臨床新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，作為轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）定位于染色體1p36.1，屬于Runt基因家族成員之一，其信號(hào)作用的靶點(diǎn)可明顯抑制多種癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。本研究對(duì)80例宮頸癌患者、80例宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical?intraepithelial?neoplasia，CIN）患者及80例正常宮頸組織切除者相對(duì)應(yīng)的組織、血漿采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)（methylation?specifie?PRC，MCP）方法檢驗(yàn)RUNX3啟動(dòng)子甲基化情況，探究其在宮頸癌早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值，報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取本科2014年3月～2018年12月收治的80例宮頸癌患者作為A組，另選取同期80例CIN患者作為B組，選取80例正常宮頸組織切除者作為C組。所有人選對(duì)象符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。三組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。見(jiàn)表1。本研究經(jīng)倫理委員會(huì)同意。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn)納人標(biāo)準(zhǔn)：①入選者均符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);②年齡40～70歲;③所有研究對(duì)象均自愿參與，并簽署知情書(shū);④術(shù)前未接受免疫、化療、輔助放療治療。排除不符合標(biāo)準(zhǔn)的研究對(duì)象。

1.3方法檢測(cè)儀器：采用Zymo Taq?PreMi（Zymo Research，美國(guó)）、EZDNA甲基化試劑盒，上海生物工程技術(shù)服務(wù)公司提供NIQ-10柱式動(dòng)物基因組DNA抽提試劑盒與MSP引物。見(jiàn)表2。檢驗(yàn)方法：提取RUNX3基因組DNA，分別對(duì)三組研究對(duì)象的血漿、宮頸組織、CIN病變組織、正常宮頸組織中按DNA抽取試劑盒，抽取基因組DNA，嚴(yán)格依照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作;基因組DNA濃度以紫外分光光度儀測(cè)定，根據(jù)260nm，與280nm紫外線吸收值比值[D（260nm）/D（280nm）]估計(jì)，經(jīng)濃度0.8%瓊脂糖凝膠電泳鑒定DNA濃度，凝膠成像系統(tǒng)成像，用GAPDH與RUNX3光密度比值衡量表達(dá)。采用二喹啉甲酸法（BCA）蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度[2，3]。

1.4觀察指標(biāo).對(duì)A、B、C三組血清、相關(guān)組織中RUNX3基因啟動(dòng)子甲基化相關(guān)性進(jìn)行評(píng)估并比較。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x+s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用x”檢驗(yàn);相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組血漿與組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常情況比較A組組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為86.25%，血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為73.75%;B組組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為33.75%，血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為26.25%;C組組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為3.75%，血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為0;A組組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率和血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率均高于B組和C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

2.2宮頸癌病理特征與RUNX3啟動(dòng)子甲基化表達(dá)及RUNX3蛋白表達(dá)的關(guān)系分析血漿、組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常與臨床分期、腫瘤分化程度、病理類型、淋巴轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性（P<0.05）。宮頸癌患者RUNX3蛋白異常表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、臨床分期存在相關(guān)性（P<0.05）。見(jiàn)表4。

3討論

宮頸癌是我國(guó)臨床常見(jiàn)惡性腫瘤之一，是威脅女性生命健康的主要因素;其發(fā)病率較高。RUNX3是RUNx轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，主要在細(xì)胞的分化、增值、凋亡過(guò)程中發(fā)揮重要作用[4-6]。一般而言，腫瘤疾病發(fā)生、發(fā)展中通常伴隨RUNX3的表達(dá)下調(diào)或沉默，且表達(dá)水平與癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、細(xì)胞分化程度、臨床分期存在相關(guān)性[7-11]。

本次研究結(jié)果顯示，A組組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為86.25%，血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為73.75%;B組組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為33.75%，血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為26.25%;C組組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為3.75%，血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率為0;A組組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率和血漿RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常率均高于B組和C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。由此說(shuō)明隨著宮頸癌病情發(fā)展，宮頸組織RUNX3表達(dá)逐漸下降，而血漿、組織中RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常升高。同時(shí)，進(jìn)一步研究，對(duì)RUNX3蛋白異常表達(dá)、RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常與宮頸病理特征進(jìn)行單因素分析，研究結(jié)果顯示，宮頸癌患者RUNX3蛋白異常表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、臨床分期存在相關(guān)性（P<0.05）;提示腫瘤疾病惡性程度與RUNX3蛋白異常表達(dá)存在密切相關(guān)性。患者血漿、組織RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常與臨床分期、腫瘤分化程度、病理類型、淋巴轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性（P<0.05）;說(shuō)明在宮頸癌組織、血漿中RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常與腫瘤發(fā)展趨勢(shì)、惡性程度存在關(guān)聯(lián)。

綜上所述，早期宮頸癌可通過(guò)測(cè)定血漿RUNX3基因表達(dá)進(jìn)行判定、鑒別，有望成為預(yù)測(cè)宮頸癌的重要生物學(xué)指標(biāo)。

同時(shí)研究指出，RUNX3蛋白表達(dá)缺失主要因RUNX3啟動(dòng)子甲基化異常引起，且RUNX3甲基化異常在宮頸癌發(fā)展、發(fā)生中發(fā)生重要作用，有助于早期判斷、鑒別宮頸癌。

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[收稿日期：2019-12-19]