P21活化激酶1在腎癌組織中的表達及其臨床意義分析

徐珀

【摘要】 目的 分析P21活化激酶1（PAK1）在腎癌組織中的表達及其臨床意義。方法 選取75例腎癌患者的芯片（HKidE150CS03）， 采用免疫組織化學染色方法進行PAK1檢測。比較腎癌不同組織（癌旁組織和癌組織）中PAK1陽性檢出率及不同分期、不同病理分化程度PAK1陽性檢出率。結果 癌組織中PAK1陽性檢出率為84%， 高于癌旁組織中的12%， 差異有統計學意義（P<0.05）。Ⅰ～Ⅱ期患者PAK1陽性檢出率為77.36%， Ⅲ～Ⅳ期患者PAK1陽性檢出率為100.00%;Ⅲ～Ⅳ期患者PAK1陽性檢出率高于Ⅰ～Ⅱ期患者， 差異有統計學意義（χ2=5.930， P<0.05）。病理高分化患者PAK1陽性檢出率為92.59%， 中低分化患者PAK1陽性檢出率為89.58%， 比較差異無統計學意義（χ2=0.185， P>0.05）。結論 PAK1蛋白在腎癌的發生發展和浸潤轉移中有促進作用， PAK1高表達可能成為腎癌診斷、侵襲性和預后判斷的重要生物學參考指標， 因此臨床檢測中， 可將PAK1蛋白表達水平作為腎癌發展程度的預測因子。

【關鍵詞】 腎癌;P21活化激酶1;癌旁組織;腎癌組織

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.09.019

腎小管上皮出現惡性腫瘤稱為腎癌， 其發病率在腎臟類腫瘤中高達90%。近年來隨著我國人口老齡化的上升， 腎癌發病率呈現逐年上升趨勢， 其中男性腎癌發病率為6.09/10萬， 女性腎癌發病率為3.84/10萬[1]。腎癌發生初期并無明顯癥狀， 隨病情發展患者有血尿或鏡下血尿情況， 患者確診時多為癌癥晚期， 已錯過最佳治療時機[2]。鑒于此近年來研究人員致力于腎癌分子標記物診斷的研究， 將癌旁組織、腎癌組織中小分子物質水平進行比較， 發現PAK1在腎癌組織中呈現出高水平表達， PAK1對肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）、腫瘤抑制因子有磷酸化作用， 達到促進癌細胞繁殖的目的[3， 4]。因此本研究驗證PAK1在腎癌組織中的表達情況， 并進一步分析PAK1的表達與臨床意義， 詳細報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取上海芯超生物科技有限公司75例腎癌患者的芯片（HKidE150CS03）作為研究對象， 其中男51例， 女24例;年齡34～82歲， 平均年齡（56.5±11.1）歲;腫瘤直徑：<7 cm 45例， 7～10 cm23例， >10 cm 7例;臨床分期：Ⅰ期35例， Ⅱ期18例， Ⅲ～Ⅳ期22例;病理分化程度：高分化27例、中低分化48例;腫瘤部位：左腎36例， 右腎38例， 腎上1例。

1. 2 方法

1. 2. 1 儀器、試劑準備 兔抗人PAK1多克隆抗體， 由上海信裕生物技術有限公司提供;熒光定量PCR試劑盒， 由北京眾智領先科技有限公司提供， 該公司同時提供定量PCR檢測儀。此外需準備辣根過氧化物酶標記鼠抗人β-肌動蛋白單克隆抗體、ImageQuant LAS 4000化學發光圖像成像系統等設備。準備完成檢測設備、試劑完好程度， 并進行試檢測。

1. 2. 2 免疫組化法 即對細胞組織切片、染色， 標記PAK1蛋白， 觀察其表達情況。具體檢測步驟如下：蠟封組織直接切片， 進行脫蠟操作， 水化同時進行高壓抗原修復， 恢復細胞組織狀態。加山羊血清、過氧化氫（3%）實施封閉操作， 將細胞組織置于4℃環境下， 放置一夜， 孵育二抗1 h， 用對二甲胺基偶氮苯（DAB）染色后顯色， 再用蘇木精重復染色操作， 脫水處理同時封片。染色后若PAK1蛋白表達水平高且檢測結果為陽性， 染色呈棕褐色、黃色。將染色細胞置于顯微鏡5倍視野下觀測， 記錄陽性細胞數量。染色強度評分：無色0分;淺黃色1分;黃色、棕色2分;棕褐色3分;>2分即為PAK1陽性。

1. 2. 3 PAK1水平表達檢測 采用Western印跡檢測法， 步驟如下：對細胞組織作特殊處理， 將其蛋白質完全提取出來， 用蛋白質定量法（BCA）檢測蛋白濃度。試樣作離心處理， 取上清液35 μg， 進行電泳、轉膜與封閉操作， 在4℃室溫下完成一抗孵育。試樣中加入二抗完全混合均勻， 用ECL發光液進行顯影操作， 放置于全自動系統中得到相應蛋白質檢測條帶。

1. 3 觀察指標 ①統計比較腎癌患者PAK1在腎癌不同組織（癌旁組織和癌組織）中的陽性檢出率。②比較不同分期及不同病理分化程度腎癌患者PAK1陽性檢出率。

1. 4 統計學方法 采用SPSS22.0統計學軟件進行數據統計分析。計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 PAK1在腎癌不同組織中陽性檢出率比較 癌組織中PAK1陽性檢出率為84%， 高于癌旁組織的12%， 差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 不同分期及不同病理分化程度腎癌患者PAK1陽性檢出率比較 Ⅰ～Ⅱ期患者PAK1陽性檢出率為77.36%， Ⅲ～Ⅳ期患者PAK1陽性檢出率為100.00%;Ⅲ～Ⅳ期患者PAK1陽性檢出率高于Ⅰ～Ⅱ期患者， 差異有統計學意義（χ2=5.930， P<0.05）。見表2。病理高分化患者PAK1陽性檢出率為92.59%， 中低分化患者PAK1陽性檢出率為89.58%， 比較差異無統計學意義（χ2=0.185， P>0.05）。見表3。

3 討論

近年來人類飲食結構、生活方式等變化較大， 腎癌發病率呈現上升趨勢， 最新統計數據顯示， 我國腎癌發病率位居泌尿系統腫瘤第二位。在全球范圍內腎癌發病率在成年人惡性腫瘤中占比3%， 且發病率呈現明顯的地域差異[5]。為控制腎癌發生率， 國內外學者不斷深入探究其病因， 目前腎癌已知病因分析如下。①遺傳因素。研究顯示腎癌多由常染色體顯性遺傳為主， 父親或母親患有腎癌， 其后代中出現腎癌幾率明顯高于正常人， 據統計遺傳性腎癌在所有患者中占比不高， 僅4%左右[6]。②誘發因素。肥胖是業界公認的誘發腎癌的危險因素之一， 隨著體重指數的增加， 腎癌發生率就越高;吸煙也是導致腎癌的危險因素之一， 大量臨床實踐研究證實， 有吸煙史人群患上腎癌的相對危險度為1.3。③高血壓、獲得性囊性腎臟疾病也是腎癌發生的高危因素[7， 8]。目前臨床治療水平不斷提升， 腎癌診斷從晚期逐漸向早期過度， 通過對Ⅰ類蛋白酶、Ⅱ類蛋白酶等的研究， 發現PAK1蛋白與癌細胞組織發展程度有關。

腎癌患者臨床表現極其復雜， 癌細胞激素分泌水平與病灶的不斷轉移使患者呈現出多種表現。腎癌具有較長潛伏期， 其特點是增殖快， 具有侵襲性與進展性。PAK1蛋白在不同臨床分期的表達水平有一定差異性， 于俊杰等[9]在研究中指出， P21活化激酶4（PAK4）在腎細胞癌中呈現高表達狀態， PAK1蛋白與PAK4蛋白表達具有一定相似性， 采用免疫組織化學兩步法進行檢測， 結果顯示PAK4蛋白在臨床分期T1、T2、T3～4期癌組織中的陽性表達率分別為59.3%、90.5%、100.0%， 可見隨著分期的增加PAK蛋白呈現出遞增趨勢。這與本次研究結果一致， 本次研究結果顯示， Ⅰ～Ⅱ期患者PAK1陽性檢出率為77.36%， Ⅲ～Ⅳ期患者PAK1陽性檢出率為100.00%;Ⅲ～Ⅳ期患者PAK1陽性檢出率高于Ⅰ～Ⅱ期患者， 差異有統計學意義（χ2=5.930， P<0.05）。病理高分化患者PAK1陽性檢出率為92.59%， 中低分化患者PAK1陽性檢出率為89.58%， 比較差異無統計學意義（χ2=0.185， P>0.05）。本次研究采用腎癌組織、癌旁組織作為研究對象， 利用免疫組化方法對PAK1在腎癌細胞組織中的表達水平進行檢測。檢測顯示， 癌組織中PAK1陽性檢出率為84%， 高于癌旁組織中的12%， 差異有統計學意義（P<0.05）。劉耀雷、孔垂澤、黃耿等[10-12]對Polo樣激酶1、蛋白激酶Cα在腎癌組織中的表達情況進行分析， 檢測腎癌組織、癌旁組織中酶蛋白的表達， 發現癌旁組織中陽性檢出率明顯低于腎癌組織， 這與本研究結果一致。經研究發現Polo樣激酶1、蛋白激酶Cα的表達與PAK1蛋白在腎癌組織中的表達呈現出協同性， 因此將其與本研究作對比， 相似度較高[13， 14]。

綜上所述， PAK1蛋白在腎癌的發生發展和浸潤轉移中有促進作用， PAK1高表達可能成為腎癌診斷、侵襲性和預后判斷的重要生物學參考指標， 因此臨床檢測中， 可將PAK1蛋白表達水平作為腎癌發展程度的預測因子。

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[收稿日期：2020-01-09]