唾液腺淋巴上皮性病變中免疫組織化學雙染技術的應用

朱姝美

【摘 ?要】目的：分析免疫組織化學雙染技術應用于唾液腺淋巴上皮性病變的診斷效果，根據不同的抗體陽性表達形式及染色效果，判定最佳的病變診斷染色途徑。方法：選取本單位檢測組織樣本包括良性淋巴上皮病、淋巴上皮癌、淋巴組織結外邊緣區 B 細胞淋巴瘤，分別應用抗體免疫組織化學單染色法及組合雙染色法，對照不同染色方法的染色效果。結果：單染結果顯示Ki-67定位區域為細胞核、AE1/AE3定位區域為上皮細胞細胞質位置，CD20cy定位區域為B淋巴細胞的細胞膜位置，不同抗體的陽性檢測率及染色對比度優良。雙染色順序為 Ki-67 （DAB 顯色）隨后AE1/AE3、CD20cy （AEC 顯色），應用EnvisionTM二步法完成DAB 顯色，抗體的定位相對更為準確，有鮮明的顏色對比，相較于單染，其陽性比率及陽性染色強度無顯著差異（P>0.05）。結論：通過免疫組織雙染技術能夠提供輔助診斷的有效途徑，在細胞群蛋白表達中提供更具價值的信息。

【關鍵詞】唾液腺;淋巴上皮性病變;免疫組織;化學雙染技術

【中圖分類號】R46??????【文獻標識碼】A??????【文章編號】1672-3783（2020）03-0270-01

唾液腺腫瘤是唾液腺組織中的常見疾病的一種，當前發病率有逐年增多的趨勢^[1]，多數唾液腺腫瘤為上皮性腫瘤類型，其病理類型較為復雜，不同的腫瘤在影像學顯示、臨床表征等方面存在差異，常規的檢測方法為免疫組化檢測方法，免疫組化雙染技術相較于單染技術具有顯著的應用優勢，能夠在單張切片上同時完成對兩種抗體的標識，且以不同的顏色呈現出來，雙染技術能夠對特定的細胞群中的蛋白表達進行觀察，在較為復雜的細胞類型檢驗中有廣泛的應用^[2]。此次研究中，應用免疫組織化學雙染法分別對單位組織樣本進行檢驗，現就研究結果作如下內容報道。

1 資料與方法

1.1一般資料

此次研究中，選取我單位檢驗樣本包括良性淋巴上皮病（benign lymphoepithelial lesions，BLEL）、淋巴上皮癌（lymphoepithelial carcinoma，LEC）、淋巴組織結外邊緣區 B 細胞淋巴瘤（extranodal marginal zone lymphomaof mucosa-associated lymphoid tissue，MALT 淋巴瘤）各10例。

1.2方法

此次研究中，所有的樣本材料應用甲醛液體進行固定，在完成脫水及石蠟包埋處理后進行常規H-E染色，同時由有豐富經驗的醫師進行閱片診斷。（1）免疫組織化學染色單染應用的抗體為Ki-67、AE1/AE3、CD20cy，0.3h，應用免疫組織化學單染法進行檢測，進行常規脫蠟入水處理，進行抗原修復后經PBS緩沖液清洗，清洗5min×3次。滴加一抗于37℃狀態下孵育時間為60min，經PBS緩沖液清洗5min×3次，DAB顯色共5min，后經流水清洗處理。應用蘇木精染色共60min，后完成常規脫水后進行封片。（2）應用免疫組織化學雙染法對BLEL及淋巴上皮惡性病變檢測，LEC病例雙染所應用的抗體為Ki-67和 AE1/AE3，應用Ki-67 和 CD20cy進行MALT淋巴瘤病例雙染，以抗體陽性顯示的具體位置信息，選用對應的滴加順序，完成顯色劑的顯色作用，首先為 Ki-67 （DAB 顯色）隨后AE1/AE3、CD20cy （AEC 顯色），應用EnvisionTM二步法完成DAB 顯色，應用PBS 緩沖液進行清洗，在完成一抗滴加后在37℃狀態下孵育時間為60min，經PBS緩沖液清洗5min×3次，隨后滴加HPR復合物二抗，在37℃狀態下孵育時間為60min，經PBS緩沖液清洗后完成AEC顯色反應，隨后應用蘇木精染色共60min，后完成常規脫水后進行封片。

1.3統計學方法

此次研究中，所應用的統計學分析軟件為SPSS18.0，其中計量資料以標準差形式表示，通過t進行組間驗證，計數資料以n（%）形式表示，通過卡方進行組間驗證，若存在顯著的統計學差異，則顯示為P<0.05。

2 結果

2.1 免疫組織化學單染技術化學檢測結果

單染結果顯示，Ki-67定位區域為細胞核、AE1/AE3定位區域為上皮細胞細胞質位置，CD20cy定位區域為B淋巴細胞的細胞膜位置，不同抗體的陽性檢測率及染色對比度優良。

2.2 免疫組織化學雙染技術化學檢測結果

雙染結果顯示Ki-67 （DAB 顯色）隨后AE1/AE3、CD20cy （AEC 顯色），應用EnvisionTM二步法完成DAB 顯色，抗體的定位相對更為準確，有鮮明的顏色對比，相較于單染，其陽性比率及陽性染色強度無顯著差異（P>0.05）。

3 討論

應用免疫組織化學雙染技術能夠實現在相同組織切片中2種蛋白質的標記，在對較為復雜的病變細胞進行檢測時，可以確定淋巴瘤的類型，從而對細胞群中特定的蛋白質表達狀況進行分析，上皮細胞具有較強的增值活性，根據單純形態學分析以及單染色途徑無法完成準確判斷^[3]，而免疫組織化學雙染色方法通過一抗滴加順序的改變，分別滴加細胞核抗體、細胞質抗體、細胞膜抗體，蛋白表達更準確，此次研究中單染結果顯示Ki-67定位區域為細胞核、AE1/AE3定位區域為上皮細胞細胞質位置，CD20cy定位區域為B淋巴細胞的細胞膜位置，不同抗體的陽性檢測率及染色對比度優良。雙染色順序為 Ki-67 （DAB 顯色）隨后AE1/AE3、CD20cy （AEC 顯色），應用EnvisionTM二步法完成DAB 顯色，抗體的定位相對更為準確，有鮮明的顏色對比，相較于單染，其陽性比率及陽性染色強度無顯著差異（P>0.05）。綜上所述，通過免疫組織雙染技術能夠提供輔助診斷的有效途徑，在細胞群蛋白表達中提供更具價值的信息。

參考文獻

[1] 顧挺，胡宇華，夏榮輝， 等.免疫組織化學雙染技術在唾液腺淋巴上皮性病變中的應用評價[J].中國口腔頜面外科雜志，2019，17（3）：216-220.

[2] 劉奕，周昊，費偉.CD20在口腔潛在惡性病變中的表達及其臨床意義[J].國際口腔醫學雜志，2018，45（2）：135-139.

[3] 江悅，宋國新，張煒明， 等.兩種免疫組織化學平臺和抗體檢測PD？L1表達的一致性分析[J].中華病理學雜志，2019，48（11）：867-872.