血漿CRABP2與非小細胞肺癌細胞的增殖、遷移和侵襲的相關性研究

蒙建鳳

【摘 ?要】目的：探究血漿CRABP2與非小細胞肺癌細胞的增殖、遷移和侵襲的相關性研究。方法：本研究首先將siRNA以及CRABP2質粒進行構建以及轉染，隨機將培養皿分組，共計180個，分為三組，每組各60個。分析血漿CRABP2在非小細胞肺癌細胞中的表達。結果：血漿CRABP2高水平表達可加速癌細胞的生長，血漿CRABP2與癌細胞的增殖、遷移和侵襲相關性強。結論：血漿CRABP2水平很可能是非小細胞肺癌細胞侵襲性的指標，可作為非小細胞肺癌新的診斷和預后標志物。

【關鍵詞】細胞視黃酸結合蛋白2;非小細胞肺癌;增殖;遷移;侵襲

【中圖分類號】R45??????【文獻標識碼】A??????【文章編號】1672-3783（2020）03-0092-01

肺癌是全世界與癌癥相關的死亡最常見的原因。只有18%的肺癌患者在確診后存活5年或更長時間。早期診斷對降低肺癌死亡率具有重要意義。近年來，低劑量計算機斷層掃描（LDCT）被引入肺癌的早期診斷。然而，除了LDCT外，我們還可以使用各種方法檢測肺癌，而使用血樣是最簡便的方法之一。有研究報道顯示，肺癌組織中一種新的遺傳標記物細胞維甲酸結合蛋白2（CRABP2）的鑒定可有效診斷非小細胞肺癌。本研究探究血漿CRABP2與非小細胞肺癌細胞的增殖、遷移和侵襲的相關性研究，具體如下：

1 一般資料和方法

1.1 一般資料

研究所需的非小細胞肺癌細胞株A549細胞購買于上海研域生物科技有限公司，并將該細胞株作解凍、擴增，觀測其生長狀況，隨后再進行細胞株培養、凍存、復蘇。

1.2 方法

（1）本研究首先將siRNA以及CRABP2質粒進行構建以及轉染，隨機將培養皿分組，共計180個，分為三組，每組各60個。分別命名為A、B、C三組，A組是CRABP2質粒組;B組是-CRABP2 siRNA轉染組，剩余的C組是空質粒轉染組。

（2）準備DMEM培養基，將非小細胞肺癌細胞株放置于培養基內培養。

（3）隨后，需檢測細胞增殖能力，采取的方法是MTT法;檢測CRABP2基因表達情況，采取的方法是RT-PCR法;檢測CRABP2/MMP9蛋白表達情況采取Western blot法。

（4）分別采用Transwell細胞侵襲實驗法、細胞劃痕法分析CRABP2轉染前后對非小細胞肺癌細胞A549侵襲、遷移的影響。

1.3 統計學方法

采用統計學標準軟件SPSS 22.0系統對本研究數據作統計學分析。計量資料（均數±方差）采取T值檢驗（獨立樣本）;計數資料（%）應用卡方檢驗。P<0.05，表示數據存有統計學意義。

2 結果

分析顯示在非小細胞肺癌中CRABP2的表達顯著上調，且高表達CRABP2 的 95-D 細胞存在更強的增殖抑制反應。表明CRABP2基因在非小細胞肺癌中的表達增加;而在siRNA 干擾 95-D 細胞中，CRABP2 在ATRA中的表達明顯降低。

3 討論

CRABP2是一種與維甲酸相關的細胞內脂質結合蛋白，被認為可以調節細胞內的維甲酸信號。已鑒定出兩個亞型（CRABP1和CRABP2），它們都對配體全反式維甲酸具有高親和力。這些亞型在人類中顯示出74%的序列同源性，在物種中高度保守。CRABP1在成人中廣泛表達，而CRABP2只在皮膚、子宮、卵巢和脈絡叢中表達。CRABP蛋白的生物學功能還不完全清楚。在小鼠基因敲除研究中，CRABP亞型的破壞與肢體發育的輕度缺陷有關。CRAPP1被發現作為一種被動載體，根據濃度梯度結合并釋放其配體，而CRAPP2已知將維甲酸傳遞給維甲酸受體（RAR），并且維甲酸在CRAPP2和RAR之間的通道導致了全RAR形成和RAR轉錄的顯著上調。CRABP2在MCF-7乳腺癌細胞中的高表達與維甲酸誘導的生長抑制的敏感性顯著增強有關。相反，乳腺癌細胞株CRABP2表達的缺失與對維甲酸誘導的生長停滯的抵抗有關。因此，CRABP2的表達似乎在視網膜酸致敏細胞中起作用。CRABP2蛋白的抗癌作用在其他腫瘤，包括星形細胞瘤和頭頸部腫瘤等等^[1～2]。

有關研究發現，癌組織中的細胞視黃酸結合蛋白2（CRABP2）信使RNA（mRNA）水平明顯高于癌旁正常肺組織，癌細胞中CRABP2的表達可被免疫組化檢測到，而正常肺細胞中無表達。CRABP2已被證明有助于維甲酸與其同源受體復合物的結合，但其在癌變中的作用尚不清楚。迄今為止，對非小細胞肺癌中CRABP2的研究很少。本研究結果顯示，血漿CRABP2高水平表達可加速癌細胞的生長，血漿CRABP2與癌細胞的增殖、遷移和侵襲相關性強，與最新的一份報告^[3]結果相似：48例肺癌標本中56%的CRABP2 mRNA水平與鄰近正常組織相比升高，56%的腫瘤標本中也檢測到CRABP2蛋白表達。此外，NSCLC癌組織中RNA-Seq的表達較正常肺組織增加了4.9倍，72.1%的NSCLC組織中CRABP2的表達。

綜上所述，血漿CRABP2水平很可能是非小細胞肺癌細胞侵襲性的指標，可作為非小細胞肺癌新的診斷和預后標志物。

參考文獻

[1] Lin Jia-Zhou，Ma Song-Kun，Wu Sheng-Xi，et al. A network meta-analysis of nonsmall-cell lung cancer patients with an activating EGFR mutation： Should osimertinib be the first-line treatment？[J] Medicine，2018，97（30）：211-225.

[2] A network meta-analysis of nonsmall-cell lung cancer patients with an activating EGFR mutation： Should osimertinib be the first-line treatment？： Erratum[J]. Medicine，2019，98（32）：357-362.

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