雙牌虎爪姜快速繁殖的培養基篩選

莫志軍，胡繼銀，莫凱迪，莫現梅

（1.永州職業技術學院，湖南 永州 425000；2.永州市農業科學研究所，湖南 永州 425000）

生姜是姜科姜屬多年生宿根草本植物，是藥食兩用經濟作物，也是集調味、食品加工和藥用為一體的多用蔬菜[1-2]。雙牌虎爪姜是湖南省永州市雙牌縣的一個地方品種，種植在海拔500 m 的山坡上，姜辣素含量高，同時具備耐旱、耐貧瘠、耐儲藏、耐運輸等特點，目前正在申請地理標志產品。由于生姜主要以地下塊莖進行無性繁殖，連年留種導致病毒、病菌累積嚴重，因此產量逐年降低，每年因病害導致的減產可達30%～50%[3]。而且，利用地下塊莖無性繁殖所需種姜量大，高達200～300 kg/667m2，用種成本高，繁殖系數低[4-5]。為此，筆者于2015 年開始對地方生姜品種雙牌虎爪姜進行脫毒和組織培養快繁研究，首先進行了培養基的篩選。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試材料雙牌虎爪姜來源于原產地雙牌縣上梧江鄉。以大量元素為依據，供試培養基分為MS 培養基、1/2MS 培養基、N6 培養基，培養基微量元素為硫酸22.3 mg/L、硫酸鋅8.6 mg/L、碘化鉀0.83 mg/L、硼酸6.2 mg/L、鉬酸鈉0.25 mg/L、硫酸銅0.025 mg/L、氯化鈷0.025 mg/L、硫酸亞鐵27.8 mg/L，培養基有機物為肌醇100 mg/L、甘氨酸2.0 mg/L、煙酸0.5 mg/L、鹽酸吡哆醇0.5 mg/L、鹽酸硫胺素0.1 mg/L、乙二胺四乙酸鈉37.3 mg/L，培養基激素為6-BA 2.5 mg/L、NAA 0.1 mg/L 等[6-10]。供試消毒劑有0.2%新潔爾滅、70%乙醇和0.1%氯化汞。

1.2 試驗方法

1.2.1催 芽取生姜洗凈瀝干，在光照培養箱內避光培養，保持空氣濕度為75%，溫度為25℃，直至出芽1～2 cm 時取出。

1.2.2接 種取長1～2 cm 的虎爪姜芽在自來水下沖洗2～3 h，用0.2%新潔爾滅浸泡10 mim，無菌水沖洗2～3 次；在無菌條件下用70%酒精處理30 s，無菌水沖洗2～3 次；再用0.1%氯化汞浸泡8 min，無菌水沖洗5 次；剝去生姜芽外葉，留取0.5～1.0 cm 芽尖，接入培養瓶中，每瓶接種3 個芽尖。接種后，將培養瓶置于25±2℃環境中培養，光周期12 h/d，光照強度為2 500 lx。

1.2.3試驗設計培養基的微量元素、有機物和激素濃度相同，只以大量元素為依據，設計MS、1/2MS、N6 這3 種培養基進行雙牌虎爪姜快繁研究，每種培養基接種8 瓶，共24 瓶。

1.2.4觀察指標及方法接種后14、28 和42 d 分3次統計發芽數，不足0.5 cm 的不計數，0.5 cm 以上的計為芽數。分化率（%）=所有分化的點數/接種點數×100。各處理分階段統計分化芽數。增值倍數=（某階段總芽數-前階段的芽數）/接種基數。增殖率（%）=某階段增加的芽數/接種基數×100。

2 結果與分析

2.1 不同培養基對雙牌虎爪姜分化的影響

從表1 中可以看出，1/2MS 培養基的分化率稍低于MS 和N6 培養，而MS 和N6 培養基上的分化率相同；培養14、28、42d 時，1/2MS 培養基上的分化率分別比MS、N6 培養基上的低32.8、16.4、13.4 個百分點。這可能是由于1/2MS 培養基的大量元素減半，不能滿足雙牌虎爪姜分化的營養供應所致。觀察發現，各培養基上培養10 d 就有根發生，培養28 d 后，可生出較多根。這表明MS 和N6 培養基對雙牌虎爪姜分化效果較好。

表1 3 種培養基上雙牌虎爪姜芽的分化情況

2.2 不同培養基對雙牌虎爪姜增值倍數的影響

由表2 可知，不同培養基對雙牌虎爪姜繁殖增速度有一定影響。1/2MS 培養基中雙牌虎爪姜芽增殖速度最慢，增殖倍數最低。培養14 d 時，MS 培養基的增殖倍數最大，達3.25，比1/2MS 培養基高1.70，比N6 培養基高0.25。培養14～28 d，N6 培養基中雙牌虎爪姜的芽分化速度加快，增殖倍數高達5.75，比MS 培養基高1.75，比1/2MS 培養基高3.87。培養42 d 時，N6 培養基中雙牌虎爪姜的芽增殖倍數為6.75，比MS 培養基高1.50，比1/2MS 培養基高4.42。這可能與N6 培養基中硝酸鉀和磷酸二氫鉀成分含量高 有關。

2.3 不同培養基對雙牌虎爪姜芽增殖率的影響

從表2 中可以看出，1/2MS 培養基中的雙牌虎爪姜幼芽增殖較慢，每個階段的增殖率均未超過60%；MS 培養基第一個14 d 繁殖速度最快，增殖率為225.37%，第二個14 d 增速放慢，增殖率只有74.63%，第三個14 d 增速有所提高，增殖率達125.37%；N6 培養基第一個14 d 繁殖速度也較快，增殖率達200%，第二個14 d 繁殖速度更快，增殖率高達274.6%，比MS 快了200 個百分點，到第三個14 d增速放慢，增殖率為100%，比前2 個14 d 增速降低了一半以上，比MS 培養基的增速也減慢了25.37 個百分點，可能是由于28 d 后培養基的營養成分含量下降所致。

表2 3 種培養基上雙牌虎爪姜芽的增殖情況

觀察發現，在激素種類及含量相同的情況下，MS 培養基和N6 培養基在培養14 d 時，雙牌虎爪姜芽的增殖速度都比較快，但MS 培養基增殖略多一點，差異不大；但培養14～28 d 時，N6 培養基明顯優于MS 培養基。而雙牌虎爪姜幼苗培養28 d 后即可煉苗移栽。

2.4 同一時段不同培養基對雙牌虎爪姜出芽的影響

由表2 可知，接種0～14 d，MS 培養基上的姜芽數比1/2MS 培養基多114 個，增幅為109.6%；MS 培養基上的姜芽數比N6 培養基多17 個，增幅為8.46%；N6 培養基上的姜芽數比1/2MS 培養基多97 個，增幅為93.3%。接種14～28 d，1/2MS 培養基上姜芽總數126 個，平均每個芽分化1.88 個；而MS 培養基上姜芽總數268 個，平均每個芽分化4 個，比1/2MS培養基多142 個，平均每個芽多分化2.12 個，增幅為112.8%；N6 培養基上姜芽數達385 個，平均每個芽分化5.75 個，比MS 培養基多1.75 個，比1/2MS培養基上姜芽數更多，增幅為205.6%；N6 培養基上的姜芽數反比MS 培養基多117 個，增幅為43.7%。接種28～42 d，1/2MS 培養基總姜芽數156 個，平均每個姜芽分化2.33 個；而MS 培養基上的姜芽數比1/2MS 培養基多196 個，增長率125.6%；N6 培養基上的姜芽數比1/2MS 培養基多296 個，增幅為189.7%；N6 培養基的姜芽數比MS 培養基多100 個，增幅為28.4%。上述結果表明，N6 培養基上的增殖速度比MS 培養基快，培養時間以28 d 左右為佳，培養時間延長，姜芽數會增加，但增長速度放緩。

3 小 結

試驗結果表明，雙牌虎爪姜的快繁最佳培養基為N6+6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L，培養時間以28 d 左右為佳，增殖倍數高達5.75。當增殖倍數足夠時，雙牌虎爪姜芽可轉入無激素N6 培養基中以控制增殖，便于后期分株移栽。N6 培養基中大量元素硝酸鉀和磷酸二氫鉀的使用量比MS 培養基的大，特別是鉀元素的量大，這可能是N6 培養基更適合雙牌虎爪姜組織培養快速繁殖的原因。