畜禽肉組織中恩諾沙星殘留酶聯免疫檢測方法探討

陳 浩，王道偉

吉林省公主嶺市葦子溝畜牧站，吉林公主嶺 136100

恩諾沙星是喹諾酮類抗菌藥，因其能抑制細菌DNA 螺旋酶，抗菌譜廣、高效、低毒、組織穿透力強，已成為獸醫臨診和水產養殖中最重要的抗感染藥物之一，被大量用于治療、預防和促進生長。由于其耐藥性和潛在的致癌性，歐盟、日本及我國均制定了在組織中的最高殘留限量。本方法參照農業部1025 號公告—25—2008 和試劑盒相關材料，通過規范各檢驗步驟，達到了較好的分析結果。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

酶標儀(ThermoFisher)、高速冷凍離心機(ThermoFisher)、氮吹儀、渦旋儀(1NA)、振蕩器(1NA)。

1.2 藥品試劑

試劑盒提供。

2 樣品處理

2.1 稱取均質后的組織樣本于50 mL 離心管中，加入氫氧化鈉溶液，充分振蕩混勻10 min，5 000 轉離心10 min。

2.2 取4 mL 上清液至新的50 mL 離心管中，分別加入4 mLO.2M 磷酸鹽緩沖液和8 mL 二氯甲烷，振蕩10 min，5 000 轉離心10 min。

2.3 除去上層，取6 mL 下層有機相至l0 mL 干凈玻璃管中，55 ℃水浴氮氣吹干。

2.4 加入l mL 復溶工作液，渦旋2 min 溶解干燥的殘留物，加入l mL 正己烷，渦旋2 min，5 000 轉離l0 min。

2.5 除去上層正己烷及中間層雜質，取下層50 μL用于分析。

3 試劑盒操作

3.1 加入標準晶及樣品到對應的微孔中，加入酶標二抗50 μL，再加入抗體工作液50 μL，輕輕振蕩混勻，用蓋板模蓋板后于25 ℃避光放應60 min。

3.2 洗板：小心揭開蓋板模，將孔內液體甩干，加入洗滌工作液250 μL/孔，充分洗滌5 次，每次間隔10 s，甩掉孔內液體，用吸水紙拍干。

3.3 顯色：加入底物液A 液50 μL/孔，再加入底物液B 液50 μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板模蓋板后于25 ℃避光放應30 min。

3.4 測定：加入終止液50 μL/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于430/630 血處檢測，在添加回收結果5 min 內讀取數據。……