外周血T 淋巴細(xì)胞亞群水平檢測(cè)對(duì)評(píng)價(jià)腫瘤患者免疫功能的價(jià)值分析

呂小婷 陳玲 孫蕾清 鄭璐 陳復(fù)興 周忠海(通訊作者)

（中國(guó)人民解放軍陸軍第七十一集團(tuán)軍醫(yī)院實(shí)驗(yàn)科 江蘇 徐州 221004）

前言

人體內(nèi)的T 淋巴細(xì)胞分為輔助性T 淋巴細(xì)胞C D4+和抑制性T 淋巴細(xì)胞C D8+兩群，淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)對(duì)腫瘤患者的免疫狀態(tài)及預(yù)后判斷上有很重要的作用。本次采用流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)晚期腫瘤患者及健康人的T 淋巴細(xì)胞亞群的百分率及絕對(duì)值計(jì)數(shù)，分析在評(píng)價(jià)腫瘤患者免疫功能方面的應(yīng)用價(jià)值。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年10 月—2020 年8 月我院收治的32 例已確診的晚期腫瘤患者作為腫瘤組。其中男19例，女13例，平均年齡64歲；選取健康體檢的30 例健康人為健康組，平均年齡61 歲，健康組各項(xiàng)檢查指標(biāo)正常。兩組均知情并同意。

1.2 試劑及器材

流式細(xì)胞儀、淋巴細(xì)胞亞群試劑盒（含CD3CD4CD8 抗體、紅細(xì)胞裂解液）均自美國(guó)BD 公司；絕對(duì)計(jì)數(shù)微球試劑盒（含絕對(duì)計(jì)數(shù)微球管） 北京同生時(shí)代生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 流式細(xì)胞儀檢測(cè) 靜脈穿刺血樣用EDTA-K2 抗凝后室溫存放，避免震蕩，24h 內(nèi)使用。吸取50UL 抗凝血分別置于兩只絕對(duì)計(jì)數(shù)微球管底。在管底加入淋巴細(xì)胞亞群抗體，蓋上管帽，旋渦混勻3s，室溫避光反應(yīng)25min 后加入紅細(xì)胞裂解液，混勻，避光10min 后，上機(jī)檢測(cè)。

1.3.2 檢驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算及判定 淋巴細(xì)胞亞群百分率直接生成報(bào)告；淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值計(jì)數(shù)采用方程式人工計(jì)數(shù)：淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)數(shù)（cells/μl）=區(qū)域內(nèi)淋巴亞群細(xì)胞數(shù)/區(qū)域內(nèi)絕對(duì)計(jì)數(shù)微球數(shù)×絕對(duì)計(jì)數(shù)微球濃度（個(gè)/μl）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析處理，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，行t 檢驗(yàn)，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 外周血淋巴細(xì)胞亞群百分率結(jié)果

腫瘤組的淋巴細(xì)胞亞群中，總CD3+百分率與健康組差異不顯著（P ＞0.05）；CD3+CD4+的百分率與健康組相比低于健康組（P ＜0.01）；CD3+CD8+百分率高于健康組（P ＜0.01），見表1。

表1 兩組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群百分率比較（±s，%）

表1 兩組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群百分率比較（±s，%）

組別 例數(shù) 總CD3+ CD3+CD4+ CD3+CD8+健康組 30 69.36±3.38 34.16±2.16 29.56±2.73腫瘤組 32 68.15±3.32 22.38±3.17 42.39±2.08 t 1.421 17.191 20.714 P＞0.05 ＜0.01 ＜0.01

2.2 外周血淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值計(jì)數(shù)結(jié)果

與健康組比較，腫瘤組T 淋巴細(xì)胞總CD3+的絕對(duì)值計(jì)數(shù)顯著降低（P ＜0.01）；CD3+CD4+的絕對(duì)值計(jì)數(shù)顯著降低（P ＜0.01）；CD3+CD8+的絕對(duì)值計(jì)數(shù)顯著降低（P ＜0.01），見表2。

表2 兩組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值計(jì)數(shù)（±s，個(gè)/ul）

表2 兩組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值計(jì)數(shù)（±s，個(gè)/ul）

組別 例數(shù) 總CD3+ CD3+CD4+ CD3+CD8+健康組 30 2034±328 1205±69 687±123腫瘤組 32 945±170 379±34 346±140 t 16.253 59.178 10.204 P＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

3.討論

人體的免疫系統(tǒng)正常情況下處于平衡狀態(tài)，一旦免疫系統(tǒng)失去平衡，機(jī)體就會(huì)出現(xiàn)各種病理變化[1]。T 淋巴細(xì)胞是衡量機(jī)體免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)，CD3+CD4+主要功能是介導(dǎo)細(xì)胞免疫，CD3+CD8+主要功能是特異性殺傷靶細(xì)胞，兩者比例正常時(shí)機(jī)體才能發(fā)揮抗腫瘤的功能[2]。近年來(lái)很多研究表明，多數(shù)腫瘤患者在晚期階段常伴有T 淋巴細(xì)胞各亞群百分率的改變和功能的損害[3-5]。

本結(jié)果顯示，與健康組比較，腫瘤組的T 淋巴細(xì)胞亞群總CD3+百分率降低不顯著，但絕對(duì)值計(jì)數(shù)降低較顯著（P ＜0.05）；CD3+CD4+的百分率及絕對(duì)值計(jì)數(shù)顯著降低（P ＜0.01）；CD3+CD8+的百分率升高顯著（P ＜0.01），但是絕對(duì)值計(jì)數(shù)顯著降低。晚期腫瘤患者，當(dāng)腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移時(shí)，CD3+CD4+的百分率降低，總CD3+百分率降低不顯著，因此CD3+CD8+的百分率升高，但是CD3+CD8+絕對(duì)值數(shù)目減少，此結(jié)果提示患者的免疫功能更低，預(yù)后更差。

綜上，T 淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值計(jì)數(shù)更能反映晚期腫瘤患者的免疫狀態(tài)。有文獻(xiàn)報(bào)道[6-10]，T 淋巴細(xì)胞的絕對(duì)值計(jì)數(shù)在很多疾病中更能客觀、靈敏地反映患者的免疫狀態(tài)。因此我們應(yīng)該重視淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值計(jì)數(shù)的檢測(cè)及應(yīng)用，提倡檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞亞群采用絕對(duì)值計(jì)數(shù)的方法，從而更加精準(zhǔn)的分析患者的免疫功能，使其更有效的應(yīng)用到腫瘤患者的病程監(jiān)測(cè)、預(yù)后判斷及臨床治療中。