葛根素、姜黃素、沙棘黃酮復合物對乙醇致小鼠肝損傷的保護作用

潘 鈺，于 沖，夏海華，葉 陽

(黑龍江省科學院微生物研究所，哈爾濱 150010； 黑龍江省科學院高技術研究院，哈爾濱 150020)

酒精性肝病是酒精攝入過多導致的肝臟損傷性疾病，嚴重威脅人類身體健康，涉及氧化應激、脂質過氧化作用、免疫炎癥反應等多個方面[1-2]。葛根素、姜黃素、沙棘黃酮是衛生部公布的《既是食品又是藥品的物品名單》中葛根、姜黃、沙棘的有效成分，三者可能通過不同的機制起到減輕肝損傷的作用[3-5]。

本實驗通過建立急性小鼠酒精性肝損傷模型，將文獻報道過有護肝作用的“既是食品又是藥品”的葛根素、姜黃素、沙棘黃酮組成復方，探究復方對小鼠酒精性肝損傷的輔助保護作用，旨在為進一步開發對酒精性肝損傷具有綜合作用的保健食品提供一定的理論依據和參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

沙棘黃酮(陜西冠晨生物科技有限公司生產)；葛根素，姜黃素(西安瑞林科技有限公司生產)；AST(Aspartate Transaminase谷草轉氨酶)、ALT(Alanine Transaminase谷丙轉氨酶)、SOD(Superoxide Dismutase超氧化物歧化酶)、MDA(Maleic Dialdehyde丙二醛)、TG(Triglyceride甘油三酯)、GSH(Glutathione還原型谷胱甘肽)測定試劑盒(江蘇南京建成生物工程研究所生產)；Bradford蛋白濃度測定試劑盒(北京索萊寶科技有限公司生產)；無水乙醇(中國天津富裕華工有限公司生產)。

1.2 動物試驗

2 結果與分析

2.1 復方對乙醇致肝損傷小鼠肝指數的影響

肝臟指數是肝臟質量與體質量的比值。肝臟受損后，肝臟指數可明顯上升，能反映肝臟病變程度[6]。由圖1可以看出，與對照組比較，模型組肝臟指數顯著升高(P<0.01)，說明乙醇肝損傷小鼠模型造模成功。與模型組比較，各試驗組均能顯著降低肝臟指數(P<0.05)，表明對酒精性肝損傷有一定保護作用。

圖1 各組對急性酒精肝損傷小鼠肝臟指數的影響與Control 組比較，**P#PFig.1 Effect of groups on the levels of aspartate aminotransferase. **P#P

2.2 復方對乙醇致肝損傷小鼠血清指標AST、ALT活性的影響

如圖2所示，與空白對照組相比，乙醇模型組小鼠血清ALT、AST顯著升高(P<0.01)，表明小鼠急性酒精肝損傷模型造模成功。與模型組比較，試驗各組ALT、AST含量均降低，葛根素組、姜黃素組和復方組在降低AST含量上有統計學差異顯著性(P<0.05)，姜黃素組在降低ALT含量上有差異顯著性(P<0.05)，復方組作用更明顯(P<0.01)。

圖2 各組對急性酒精肝損傷小鼠血清AST(A)，ALT(B)活性的影響與Control組比較，**P#P##PFig.2 Effect of groups on the levels of aspartate aminotransferase(AST)(A) and alanine transaminate(ALT)(B).**P#P##P

2.3 復方對乙醇致肝損傷小鼠肝組織中MDA、TG含量的影響

酒精性肝損傷主要影響的是脂質水平，造成肝細胞脂肪主要是甘油三酯(TG)的積聚，形成脂肪肝。如圖3所示，模型組和對照組相比，肝臟TG值顯著升高(P<0.01)，表明酒精影響肝細胞脂肪代謝。與模型組相比，試驗組肝臟TG含量降低(P<0.05)，表明各試驗組減輕酒精所致脂肪代謝紊亂，減少肝細胞脂肪堆積。

肝臟MDA含量的高低直接反映了肝臟氧化應激的強烈程度，是ROS所致脂質過氧化損傷的標志產物[7]。與對照組比較，模型組MDA含量顯著升高(P<0.01)，與模型組比較，試驗組肝勻漿MDA值降低，但是差異無統計學意義；復方組顯著降低MDA含量(P<0.01)，表明其可減輕肝細胞的過氧化損傷。

圖3 各組對急性酒精肝損傷小鼠肝臟TG(A)，MDA(B)活性的影響與Control組比較，**P#P##PaPaaPFig.3 Effect of groups on the levels of triglyceride (TG)(A) and malondialdehyde (MDA)(B). **P*P#P##PaPaaP

圖4 各組對急性酒精肝損傷小鼠肝臟SOD(A)，GSH(B)活性的影響與Control組比較，**P#P##PFig.4 Effect of groups on the levels of superoxide (SOD)(A) and glutathione (GSH)(B). **P#P##>P

2.4 復方對乙醇致肝損傷小鼠肝組織中SOD、GSH含量的影響

乙醇肝損傷時，ROS產生增加，抗氧化酶SOD等活性降低，導致機體產生氧化應激，進一步加重肝損傷的發展[8]。由圖4所示，與空白對照組比較，模型組SOD顯著降低(P<0.01)，與模型組比較，姜黃素組和復方組顯著增加SOD活性，表明其能夠提高抗氧化酶活力，提高抗氧化能力，起到保護肝臟作用。

乙醛是乙醇代謝的中間產物，乙醛與GSH結合會影響肝臟發揮正常功能。乙醛與GSH結合，會使GSH的含量降低，質膜通透性和流動性發生改變，線粒體等細胞器的結構和功能受到損害[8]。與空白對照組比較，模型組GSH含量顯著降低(P<0.01)，表明短時間內大量攝入酒精，肝臟產生較強的氧化應激。與模型組相比，除沙棘黃酮組都能顯著地提高GSH含量(P<0.05或P<0.01)，與葛根素和姜黃素組比較，復方組減輕氧化應激產生的肝臟的GSH損耗作用更加明顯(P<0.01)。

2.5 乙醇致肝損傷小鼠肝組織病理學

如圖5所示，透射電鏡掃描圖顯示空白對照組小鼠肝細胞細胞核完整，有少量脂滴，線粒體正常；急性酒精肝損傷模型組小鼠肝細胞發生核固縮，脂滴增多，線粒體變性；單一材料處理組選取了護肝效果相對較好的姜黃素組(Cur)，透射電鏡圖顯示姜黃素組小鼠肝細胞有明顯的核固縮癥狀；復方組小鼠肝細胞脂滴增多，顯示肝細胞受到輕微損傷。

圖5 對照組、模型組、姜黃素組、復方組小鼠肝臟透射電鏡掃描圖Fig.5 Tem images of liver of control group, model group, curcumin group and compound group

3 結語

酒精性肝損傷是常見肝病之一， 嚴重危害人們健康。姜黃素對肝臟纖維化有較好的保護作用[9]；葛根素抑制甘油三酯合成作用效果較好，有解酒護肝等功效作用[10]；沙棘黃酮具有良好的自由基清除能力及抑制脂質過氧化作用[11]。比較三種材料的單獨護肝作用，姜黃素護肝作用相對較好，三種成分組成的復方護肝作用優于單獨作用，三種成分也許能起到一定的協同上調作用，加強了對脂質過氧化作用的抵抗，清除活性氧能力增強，阻止機體產生脂質過氧化反應，使得抗氧化酶很好地發揮抗氧化作用。