EDTA依賴性假性血小板減少癥的臨床相關因素分析

鐘小婷，馬祥波，胡志愿，肖仁威，羅秋鳳

（英德市人民醫(yī)院，廣東 英德 513000）

依賴性假性血小板減少癥是乙二胺四乙酸（EDTA）鹽作為抗凝劑的抗凝血在全自動血細胞計數(shù)儀上檢測時，發(fā)生血小板聚集而引起的假性血小板減少的現(xiàn)象。乙二胺四乙酸作為被國際學標準化委員會推薦使用對血細胞影響較小的抗凝劑，廣泛應用于血常規(guī)檢測中[1]。據(jù)相關報道[2]：使用乙二胺四乙酸能導致血小板聚集、粘附，能夠引起EDTA依賴性假性血小板減少癥，這項發(fā)現(xiàn)引起人們的重視。我院在EDTA抗凝管血常規(guī)工作中，凡發(fā)現(xiàn)血小板明顯減少但沒有臨床癥狀的患者進行涂片染色鏡檢。本文以確診的37例EDTA依賴性假性血小板減少癥患者作為對象開展研究，探討EDTA依賴性假性血小板減少癥的臨床相關因素分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2018年1月-2019年6月在我院住院及門診檢測到EDTA依賴性假性血小板減少癥病例37例。男25例，女12例，年齡17-85歲，平均（48±3.50）歲；另選到醫(yī)院檢查體檢健康者37例，男26例，女11例，年齡18-84歲，平均（46±2.90）歲。

1.2 納入標準 納入標準：（1）符合EDTA依賴性假性血小板減少癥病診斷標準[3]。（2）所有患者未出現(xiàn)皮膚瘀點、瘀斑、鼻出血以及腸胃道和泌尿系統(tǒng)出血等臨床癥狀。

1.3 方法 （1）儀器與試劑：血細胞分析儀為希森美康XS-500i全自動血液分析儀，試劑采用儀器配套試劑（溶血劑、稀釋液和清洗液）EDTA-K2抗凝劑和枸櫞酸鈉抗凝劑。儀器采用專用校準品進行校準,由希森美康公司進行。EDTA-K2和枸櫞酸鈉真空采血管為山東威高公司提供，真空采血管分別為1.8 mg/mL及109 mmol/L。瑞氏染液由貝索公司提供。（2）方法：采取合格樣本采用希森美康XS-500i全自動血液分析儀進行分析，參照標準根據(jù)國際血液學復檢專家推薦的“41條復檢規(guī)則”和儀器提示有血小板聚集的標本，首先將涂片用瑞氏一姬姆薩染色，然后使用光學顯微鏡在油鏡下觀察血小板的分布情況，發(fā)現(xiàn)血小板簇狀分布則懷疑為EDTA依賴性假性血小板減少癥。對可疑為EDTA依賴性假性血小板減少癥的病例重新采取2份靜脈血標本，其中一份使用EDTA-K2抗凝劑，另一份使用枸櫞酸鈉抗凝劑。取血后迅速搖動，15 min內(nèi)上機進行檢測。如EDTA抗凝血結(jié)果與首次檢測相符，枸櫞酸抗凝血結(jié)果明顯提高者確定為EDTA依賴性假性血小板減少癥，否則排除。

1.4 觀察指標 （1）血常規(guī)檢測結(jié)果：使用不同抗凝劑的血標本進行檢測，分別記錄PLT、WBC、RBC、HBG的數(shù)據(jù)，然后分別進行涂片、染色，鏡檢，用光學顯微鏡觀察血小板分布情況。（2）EDTA組與健康組血沉以及免疫球蛋白的結(jié)果比較。

1.5 統(tǒng)計分析 采用SPSS 18.0軟件處理，計數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料采用均數(shù)±標準差（Mean±SD）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為有統(tǒng)計學差異。

表1 希森美康XS-500i全自動血液分析儀檢測結(jié)果比較（Mean±SD）

表2 兩組血沉以及免疫球蛋白比較（Mean±SD）

2 結(jié)果

2.1 希森美康XS-500i檢測結(jié)果 EDTA-K2抗凝劑和枸櫞酸鈉抗凝劑血分別采用希森美康XS-500i全自動血液分析儀進行3次檢測，結(jié)果取平均值，血小板計數(shù)（PLT）數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而WBC、RBC、HBG無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

EDTA-K2抗凝血標本和枸櫞酸鈉抗凝血標本各進行涂片、染色進行鏡檢，鏡檢結(jié)果為：EDTA-K2抗凝血標本出現(xiàn)血小板互相聚集、堆積；而枸櫞酸鈉抗凝血標本未發(fā)現(xiàn)血小板聚集、堆積的現(xiàn)象。

2.2 EDTA組與健康組血沉以及免疫球蛋白比較 EDTA組觀血沉、IgG、IgM檢測結(jié)果明顯高于健康者（P＜0.05），而IgA檢測結(jié)果與健康者無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05） 見表2。

3 討論

假性血小板減少癥是由于EDTA的作用使血小板膜表面抗原改變，或是隱蔽的抗原暴露所引起的抗原抗體反應，使血小板聚集，進而導致了血細胞分析儀血小板計數(shù)結(jié)果的假性減少，目前該病的發(fā)生機制尚不明確，同樣也沒有發(fā)現(xiàn)與特定的病因或誘因相關[4]。假性低血小板計數(shù)可能會導致臨床上增加一些不必要的輔助檢查，甚至可能會引起臨床誤診、誤治現(xiàn)象發(fā)生。因此，臨床檢驗人員對EDTA依賴性假性血小板減少癥的鑒定與檢查顯得十分重要。

近年來，針對EDTA依賴性假性血小板減少癥的現(xiàn)象國內(nèi)外已經(jīng)產(chǎn)生廣泛的關注。本研究中，通過觀察用EDTA-K2抗凝劑血儀器法檢測結(jié)果，以及EDTA-K2抗凝血標本涂片使用瑞氏一姬姆薩染色進行鏡檢結(jié)果，說明使用EDTA作為抗凝劑，免疫介質(zhì)導致冷抗血小板自身抗體產(chǎn)生，可能導致隱藏的抗原暴露，進而使假性血小板減少。本研究中，EDTA組觀血沉、IgG、IgM檢測結(jié)果明顯高于健康者（P＜0.05），說明EDTA依賴性假性血小板減少癥可能與某種隱匿性抗原有關，EDTA可以誘導血小板表面糖蛋白GPIIb/IIIa的表達，改變了血小板的形態(tài)，也改變了血小板的膜表面的某種隱匿性抗原的構(gòu)象，進而激活了細胞膜上的磷酸酯酶A2和磷酸酶C，促使血小板膜磷酸水解，釋放出花生四烯酸（AA）、ADP、膠原、凝血酶原、內(nèi)源性鈣離子等活性物質(zhì)，釋放出的這些活性物質(zhì)將血小板纖維蛋白受體（FIB-R）活化，導致血小板與纖維蛋白原聚集成團。另有研究發(fā)現(xiàn)[5]：多數(shù)患者存在血小板抗體的同時，也存在抗磷脂抗體，血小板表面帶有負電荷的磷脂抗體與EDTA修飾的抗原相互結(jié)合，這也可能是導致假性血小板減少的起因。血常規(guī)是一項常規(guī)的檢查項目，應用已經(jīng)相當普遍，雖然EDTA依賴性假性血小板減少癥發(fā)生的概率非常低，但依然能夠?qū)颊咴斐烧`診，為患者以及醫(yī)院診治工作者帶來較大的困擾[6]。現(xiàn)實中患者抽血在15 min以內(nèi)完成血常規(guī)檢查相當困難，然而EDTA-K2抗凝劑超過30 min的時間在去做血常規(guī)檢查，血小板的計數(shù)減少，但白細胞的數(shù)量相對會上升。臨床研究表明[7]：血小板主要是用于止血以及防止血栓形成的作用，因而血小板檢測的準確性十分重要。對于血小板減少的患者應予以重視，若不對其給予高度關注可能會導致患者發(fā)生意外，造成不可挽回的傷害和損失。遇到血小板較低的患者，應該從多方面進行考慮，首先考慮到的是EDTA依賴性假性血小板減少癥，然后對患者進行詳細詢問，仔細檢查。

綜上所述，EDTA致使血小板減少的病理機制到目前為止不是很清晰，因而臨床檢驗人員對EDTA依賴性假性血小板減少癥的鑒定顯得尤為重要，避免出現(xiàn)誤診、誤治現(xiàn)象的發(fā)生。