無室間質(zhì)評(píng)計(jì)劃?rùn)z驗(yàn)項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)

呂慧，林麗文，謝文坦，龍劍，覃文周

（貴港市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 貴港 537100）

室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（External Quality Assessment，EQA）也稱為能力驗(yàn)證（Proficiency Testing，PT），是臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的重要方面。若EQA原料中的分析成分能夠溯源到參考方法，那么依據(jù)EQA成績(jī)就可以評(píng)估實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確度[1]。然而，由于資金、技術(shù)等多種原因的限制，許多實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的覆蓋率較低。根據(jù)本科室的實(shí)際情況，參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）GP29-2A文件[2]，采用實(shí)驗(yàn)室間樣本分割法對(duì)我室沒有參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的檢測(cè)項(xiàng)目——5'-核苷酸酶（5-NT）、膽堿酯酶（CHE）和β2-微球蛋白（β2-MG）三個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行比對(duì)，分析其在不同實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的一致性。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 我室日立公司生產(chǎn)的自動(dòng)生化分析儀LABOSPECT 008 AS作為實(shí)驗(yàn)儀器，來賓市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科羅氏cobas8000全自動(dòng)生化分析儀作為比對(duì)儀器。我室采用的試劑生產(chǎn)廠家分別為：北京利德曼生化股份有限公司（5-NT）、浙江夸克生物科技有限公司（CHE）、西班牙Biosystems S.A.公司（β2-MG）；參比醫(yī)院使用的試劑廠家分別為：寧波美康生物科技有限公司（5-NT）、羅氏公司（CHE）、北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司（β2-MG）。室內(nèi)質(zhì)控品均為朗道質(zhì)控品。

1.2 樣本采集 隨機(jī)選取20份在線性范圍內(nèi)的高、中、低三個(gè)濃度無溶血、脂血的新鮮血清樣本，每份臨床樣本分裝成2份，每份1 mL。置-20oC冰箱保存，另一份標(biāo)本干冰保存運(yùn)送至來賓市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科。標(biāo)本測(cè)定前1 h取出復(fù)溶，混勻，按照1-20和20-1的編號(hào)順序各測(cè)定一次，每個(gè)標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果取兩次結(jié)果的平均值，若兩次檢測(cè)結(jié)果偏差超過5%，則本次結(jié)果作廢并重新測(cè)定。

1.3 質(zhì)量控制 各檢測(cè)項(xiàng)目按照各實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程進(jìn)行檢測(cè)，采用試劑配套校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)，室內(nèi)質(zhì)控隨機(jī)插入檢測(cè)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，各檢測(cè)項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控均在控。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用Microsoft Excel 2017軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。比對(duì)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)方法作為比對(duì)方法，檢測(cè)結(jié)果為X；我室的檢測(cè)方法作為實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)的結(jié)果為Y。依照GP29-A2文件要求，將數(shù)據(jù)代入下述公式計(jì)算出來允許差異值，其中X）2，CVx是指比對(duì)方法室內(nèi)質(zhì)控的變異系數(shù)（CV），CVy則為實(shí)驗(yàn)方法Y的室內(nèi)質(zhì)控CV值。σ12=（CVxy×X）2，CVxy表示兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)結(jié)果差值的CV，根據(jù)王薇等人的研究，我們?cè)O(shè)定實(shí)驗(yàn)室間的可變性CV%大約是為15%[3]，其將被作為臨床上可接受的一致性。nx和ny分別為每臺(tái)儀器重復(fù)檢測(cè)的頻數(shù)（本次研究為2）。α置信水平為0.95，Z1－α/2=1.96表示在1-α/2置信水平處正態(tài)分布的百分位數(shù)。取X±D作為上下限，若95%的標(biāo)本Y（即至少有19個(gè)樣本的測(cè)定結(jié)果）均落在X±D范圍之內(nèi)，則認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果與比對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的一致性可以接受。

2 結(jié)果

2.1 本科室與來賓市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科5-NT、CHE和β2-MG三個(gè)項(xiàng)目的室內(nèi)質(zhì)控情況 見表1。

2.2 以來賓市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)的結(jié)果為X，以本科室檢測(cè)的結(jié)果為Y，以X+D為上限，以X-D為下限做出散點(diǎn)圖，5-NT、CHE、β2-MG三個(gè)項(xiàng)目的散點(diǎn)圖如圖1所示。CHE和5-NT所有的點(diǎn)均在X±D范圍，除有一點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果在之X±D范圍之外，其余點(diǎn)均在X±D范圍內(nèi)，即95%結(jié)果在區(qū)間內(nèi)。CHE和5-NT這兩個(gè)項(xiàng)目符合GP29-2A文件規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，因此這兩個(gè)測(cè)定項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室間的一致性是可以接受的。而β2-MG散點(diǎn)圖顯示有9個(gè)點(diǎn)在X±D范圍之外，即僅有55%結(jié)果在區(qū)間內(nèi)，未滿足GP29-2A文件的要求，我們判定β2-MG的測(cè)定結(jié)果在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室間的一致性不被接受。

3 討論

實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)材料通常包括患者樣本、相關(guān)質(zhì)控品或者標(biāo)準(zhǔn)品。質(zhì)控品在使用中往往存在一定的局限性，比如價(jià)格昂貴、有一定使用期限、性質(zhì)不穩(wěn)定、易變質(zhì)等等，而且某些質(zhì)控品與臨床實(shí)際檢測(cè)的樣本存在一定的區(qū)別，因而不能完全反映標(biāo)本的質(zhì)量特征。使用患者樣本則具有如下優(yōu)點(diǎn)：它不依賴于常規(guī)的質(zhì)量控制體系，而且能夠較好地評(píng)估臨床患者檢測(cè)的分析前步驟，如樣本采集、運(yùn)輸和處理等。另外，還可減少檢測(cè)過程中的基質(zhì)效應(yīng)。對(duì)于比對(duì)的患者樣本在保存及實(shí)驗(yàn)室間運(yùn)輸過程中，應(yīng)注意保持其具有良好的穩(wěn)定性，盡可能減少其額外變異。

本次實(shí)驗(yàn)比對(duì)結(jié)果顯示，5-NT和CHE這兩個(gè)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果在來賓市人民醫(yī)院和本院實(shí)驗(yàn)室間的一致性可接受。而β2-MG只有55%檢測(cè)結(jié)果結(jié)果在可信區(qū)間內(nèi)，其檢測(cè)結(jié)果在兩實(shí)驗(yàn)室間的一致性不被接受，可能的原因：（1）兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室所用檢測(cè)系統(tǒng)不同；（2）雖然檢測(cè)的方法一樣，但是檢測(cè)試劑并不出于同一廠家；（3）標(biāo)本的運(yùn)輸復(fù)溶等步驟的影響。若比對(duì)檢測(cè)方法與實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果的一致性超出文件規(guī)定的可接受的范圍，下一步我們應(yīng)從以下幾方面考慮：①更換操作人員對(duì)樣本進(jìn)行重新測(cè)定；②考慮將樣本上送至參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)；③參考笫三方實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果[4]。

表1 5-NT、CHE和β2-MG當(dāng)月的室內(nèi)質(zhì)控情況

實(shí)驗(yàn)室間樣本分割法方法是送樣本的分割部分到其他實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。然而分割樣本只能評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室間的一致性及檢測(cè)誤差，但不能評(píng)價(jià)其正確度（如與參考測(cè)量程序進(jìn)行比較后得到的偏倚），除非外部實(shí)驗(yàn)室使用校準(zhǔn)的方法或參考方法或參考物質(zhì)[5]。因此，要真正做好無室間質(zhì)量評(píng)價(jià)計(jì)劃?rùn)z驗(yàn)項(xiàng)目的比對(duì)任重而道遠(yuǎn)。