高通量測序在自然流產遺傳學診斷中的應用探討

曹霞

（江蘇省鹽城市射陽縣合德鎮衛生院圍產期保健門診，江蘇 鹽城 224300）

自然流產主要指的是妊娠不滿28周且胎兒體重不足2斤自行終止妊娠患者，早期流產主要指的是妊娠12周內終止妊娠。調查研究顯示，自然流產率為14%-38%，其中有90%左右自然流產率發生在妊娠12周內[1]。通過檢測絨毛細胞染色體能夠有效檢測出胚胎染色體異常，而胚胎染色體異常是導致自然流產發生的主要影響因素，50%以上自然流產是由染色體異常所致。現階段來看，檢測染色體異常的重要手段是：核型分析自然流產絨毛、細胞培養自然流產絨毛。絨毛細胞的培養要求樣本無菌且新鮮，不同實驗室的細胞成功培養率為55%-88%，因此難以得到理想效果[2]。高通量測序具有分辨率高和準確率高等特點，可有效分析出基因圖譜，從而得到準確的基因變化信息，因此利用高通量測序技術檢測染色體具有重要意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院（在2016年5月-2019年3月）搜集的114例孕婦一般資料，平均年齡為（28.8±6.3）歲，平均孕周為（14.2±5.8）周。

1.2 方法

1.2.1 培養絨毛細胞、分析染色體核型 孕婦實施刮宮術后，在無菌條件下采集胚胎戎馬標本，常規培養4-9 d，常規消化處理細胞，分析3-5個核型。

1.2.2 提取基因組DNA 取冷凍后的流產絨毛組織（10-12 mg），提取基因組DNA，采用分光光度計檢測DNA濃度。

1.2.3 構建基因組DNA小片段 將提取的基因組DNA打斷成小片段核酸，將打斷后的基因組DNA作為起始模板，構建文庫。采用瓊脂糖凝膠切膠回收方法，選擇合適的片段加以回收。采用磁珠純化方法純化DNA文庫，去除二聚體干擾，得到DNA文庫。

1.2.4 高通量測序 使用高通量測序儀器（型號：HiSeq 2500；生產公司：美國Illumina公司）按照染色體異常分析DNA文庫數據量。

1.2.5 信息分析 將高通量測序結果經過信息分析后，將測序數據匹配到相應染色體上，再通過Z值判斷染色體異常情況。

1.3 觀察指標 分析114例孕婦的自然流產遺傳學診斷結果。

1.4 統計學方法 資料分析采用SPSS 21.0統計軟件進行統計分析。計數資料用率或構成比表示，組間比較采用χ2檢驗或精確概率法。

2 結果

高通量測序自然流產遺傳學診斷結果為：54例正常，所占比54（47.4）；60例異常［45，X；標本降解；14q32.13q32.33缺失片段大小為11.34 Mb；47，XN；47，XN，5p15.33p13.3缺失片段大小為33.56 Mb；5p13.3p13.2重復片段大小為2.38 Mb；dup(X)；del］（P＜0.05），所占比60（52.6），χ2=6.1252，P=0.0018。

3 討論

自然流產臨床多表現為：其一，胎兒發育停止；其二，陰道流血日益增多；其三，妊娠物部分或者全部排出。稽留流產主要指的是：部分胎兒死亡但是卻滯留在宮腔內無法排出。

自然流產的發病因素比較多，主要有：（1）解剖因素；（2）內分泌因素；（3）感染因素；（4）免疫因素；（5）母體出現全身性疾病；（6）環境因素等[3]。自然流產細胞遺傳學相關研究主要體現在：其一，胚胎染色體異常（染色體數量異常、染色體結構異常）；其二，夫婦染色體出現異常。胚胎染色體數目異常表現為三倍體、三體等，染色體結構異常主要包括染色體斷裂、染色體倒置、染色體缺失等。相關研究資料顯示，胎兒染色體異常在單次流產中起到重大作用，隨著流產次數的日益增加，胎兒染色體畸變幾率將顯著降低[4]。

隨著分子生物技術的日益提高，高通量測序技術和多種芯片技術應用到自然流產遺傳學診斷中，CMA（染色體微陣列芯片分析技術）在發育遲緩和先天畸形疾病診斷中具有顯著效果。將染色體微陣列芯片分析技術應用自然流產絨毛的染色體檢測過程中，相比起傳統染色體核型分析方法可發現更多的染色體片段的重復與缺失。高通量測序技術相比起CMA技術擁有更高通量與低成本，方法也更為靈活。實際應用過程中，高通量測序技術通過采集母體血壓結果，繼而排除染色體微陣列芯片分析技術所帶來的影響。

綜上所述，高通量測序在自然流產遺傳學診斷中的應用效果顯著。