探討絨毛細胞長期培養(yǎng)法在產(chǎn)前診斷及早孕和早中孕期自然流產(chǎn)病因檢測中的應(yīng)用價值

唐干平，朱素優(yōu)，曾育英

（惠州市第二婦幼保健院，廣東 惠州 516001）

染色體畸形病變是遺傳疾病中占比較大的一種，此類情況會導(dǎo)致嬰幼兒智力降低、生長發(fā)育速度緩慢、胎兒畸形以及器官異常等，部分胎兒還會出現(xiàn)流產(chǎn)或者不孕不育等，嚴重威脅著產(chǎn)婦以及胎兒的生命健康，可通過絨毛染色體分析對患者的基本情況進行檢測和判斷[1]。基于此，共計抽取1058例患者參與本次研究，其中使用B超引導(dǎo)進行產(chǎn)前診斷的患者236例，早孕和早中孕期自然流產(chǎn)患者822例，患者均于2015年12月-2019年11月入我院進行檢查治療，探究產(chǎn)前診斷及早孕和早中孕期自然流產(chǎn)病因檢測中絨毛細胞長期培養(yǎng)法的應(yīng)用效果，分析產(chǎn)前診斷及早孕和早中孕期自然流產(chǎn)時期絨毛細胞長期培養(yǎng)法的檢測結(jié)果差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料 共計抽取1058例患者參與本次研究，患者均于2015年12月-2019年11月入我院進行檢查治療，其中使用B超引導(dǎo)進行產(chǎn)前診斷的患者236例，孕周10-14周，平均孕周（12.1±1.2）周；早孕和早中孕期自然流產(chǎn)患者822例，孕周5-17周，平均孕周（9.5±1.5）周；患者均無其他系統(tǒng)功能異常情況；患者均無藥物或者食物過敏情況；所有研究參與人員以及家屬對于本次研究以及參與要求均完全知曉且自愿配合。

1.2 方法 所有患者均進行絨毛染色體檢測，兩個患者患者絨毛標本才使用相同的方式進行細胞培養(yǎng)和染色體制備，①培養(yǎng)方法：使用無菌生理鹽水對無菌絨毛進行洗滌，通過顯微鏡對絨毛組織進行挑選，選出高質(zhì)量的絨毛組織，通過手術(shù)刀將其切碎，接種在5 mL AmnioMax-II培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，該培養(yǎng)基需要放置在5%二氧化碳培養(yǎng)箱中，靜置6-7 d之后取出，使用顯微鏡對其進行詳細觀察，觀察到梭形細胞克隆之后方可給予置換液，繼續(xù)2-3 d的培養(yǎng)，如出現(xiàn)多圓形細胞即可收獲。②G顯帶染色體的制作方式：將0.5 ng/mL的秋水仙素加入培養(yǎng)瓶之中，混合均勻后放在37oC的培養(yǎng)箱中進行孵育，連續(xù)孵育2 h之后取出，使用胰蛋白酶對標本進行消化，時間控制在2 min，離心處理后取出上層清液，按照1:1的比例加入0.075 M KC1和1%的檸檬酸鈉混合液，低滲3-5 min之后加入2 mL 3:1 的甲醇和冰乙酸，固定液預(yù)固定30 min后進行離心處理，去除上層清液之后制作標本片，每管制片1-2張。

1.3 觀察指標 詳細統(tǒng)計患者絨毛細胞長期培養(yǎng)法的檢查結(jié)果，分析產(chǎn)前診斷及早孕和早中孕期自然流產(chǎn)時期絨毛細胞長期培養(yǎng)法的檢測結(jié)果差異。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 以SPSS 20.0軟件對數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料采用均數(shù)±標準差（Mean±SD）表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

使用B超引導(dǎo)進行產(chǎn)前診斷的236例患者中培養(yǎng)成功例數(shù)為225例，培養(yǎng)失敗為11例，培養(yǎng)成功率為95.34%，11例培養(yǎng)失敗的患者中5例是由于污染影響，另外6例為細胞不貼壁生長；早孕和早中孕期自然流產(chǎn)822例患者培養(yǎng)成功例數(shù)為738例，培養(yǎng)失敗為84例，培養(yǎng)成功率為89.78%，84例培養(yǎng)失敗的患者中30例是由于污染影響，另外54例為細胞不貼壁生長；絨毛細胞長期培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中絨毛培養(yǎng)的成功率高于早孕和早中孕期自然流產(chǎn)中的成功率，經(jīng)計算χ2=6.930，P=0.008；有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。使用B超引導(dǎo)進行產(chǎn)前診斷的236例患者中絨毛染色體異常例數(shù)為24例，異常率為10.17%；早孕和早中孕期自然流產(chǎn)822例患者中絨毛染色體異常例數(shù)為477例，異常率為58.03%；早孕和早中孕期自然流產(chǎn)絨毛染色體異常率與產(chǎn)前檢查相比明顯較高，經(jīng)計算χ2=168.468，P=0.000；差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。產(chǎn)前診斷患者的絨毛培養(yǎng)天數(shù)為10-13 d，平均天數(shù)（11.5±1.2）d；早孕和早中孕期自然流產(chǎn)患者的絨毛培養(yǎng)天數(shù)為1-12 d，平均天數(shù)（11.4±1.4）d；經(jīng)計算t=0.997，P=0.2319；兩組患者絨毛細胞長期培養(yǎng)法的培養(yǎng)時間分組對比無明顯差異，無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

絨毛染色體制備法首次提出于1983年，該制備方法為直接法，在實際檢測中主要通過低滲透、消化以及秋水仙素干擾的方式促進細胞的分裂，該檢測方式在實際實施過程中的操作方式比較簡單，耗費時間比較短，臨床應(yīng)用價值較高[2-4]。本次研究中，絨毛細胞長期培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中絨毛培養(yǎng)的成功率高于早孕和早中孕期自然流產(chǎn)中的成功率，孕和早中孕期自然流產(chǎn)絨毛染色體異常率與產(chǎn)前檢查相比明顯較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。兩組患者絨毛細胞長期培養(yǎng)法的培養(yǎng)時間分組對比無明顯差異，無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。可見，絨毛細胞長期培養(yǎng)的應(yīng)用能夠為產(chǎn)前診斷及早孕和早中孕期自然流產(chǎn)病因檢測提供相關(guān)參照指標，提升臨床診斷準確性，同時能夠根據(jù)檢測結(jié)果了解患者的實際情況[5-6]。

綜上可知，絨毛細胞長期培養(yǎng)在臨床中的應(yīng)用可以作為產(chǎn)前診斷以及流產(chǎn)診斷的標志，臨床診斷中需要確保檢驗標本的新鮮度以及無菌性，嚴格按照要求進行絨毛細胞培養(yǎng)，為臨床診斷及治療提供基礎(chǔ)。