基于抗凝血活性的不同基原水蛭酶解工藝對比研究

張學濤 莊瀅潭 李震 吳家勁 鄒婧 高鵬 代龍

摘 ?????要：以抗凝血活性作為評價指標，優選出抗凝活性最佳的水蛭品種和最佳的酶解工藝。采用了單因素試驗法確定三種基原水蛭的酶解工藝，篩選出具有最佳抗凝血活性的品種，對活性最強的日本醫蛭進行響應面優化設計，確定蛋白酶用量、酶解溫度、酶解pH值三個影響因素的最優水平。結果三種水蛭抗凝血活性由高到低順序為：水蛭>柳葉螞蟥>螞蟥;酶解因素影響的順序為：酶用量>酶解溫度>酶解pH值;優選的最佳酶解工藝為：最佳蛋白酶是胰蛋白酶，蛋白酶最佳用量為7657.28 u/g，最適宜溫度為53.20 ℃，最佳酶解pH值為8.30，以此最優條件對日本醫蛭進行酶解，得到的產物抗凝血活性達到558u/g。模型可靠性較高，通過對比試驗優選了抗凝血活性最強的水蛭品種和最佳的酶解工藝，可以提高水蛭的抗凝血活性。

關 ?鍵 ?詞：水蛭;酶解;抗凝血活性;響應面分析;工藝優選

中圖分類號：R285???????文獻標識碼：?A ??????文章編號： 1671-0460（2020）03-0549-06

Comparative Study on?Enzymatic Hydrolysis Processes

of Different Radicals Based on Anticoagulant Activity

ZHANGXue-tao¹， ZHUANG?Ying-tan¹， LI Zhen，WU?Jia-jin¹，ZOU Jing¹，GAO Peng^1*，DAI Long^2*

（1.?College of Pharmacy， Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Shandong Jinan 250355，?China;

2. College of Pharmacy， Binzhou Medical University， Shandong Yantai 264003，?China）

Abstract： Using anticoagulant activity as an evaluation index， optimum leeches with the best anticoagulant activity and the best enzymatic hydrolysis process?were screened out. Single factor test?was used?to determine the enzymatic hydrolysis process?and?screen?out?the varieties with the best anticoagulant activity， optimized design of response surface for the most active Japanese medicine?was carried out， the optimal protease dosage， temperature and pH were?determined. The order of anticoagulant activity of the three leeches was?as follows： Hirudonipponica Whitman>Whitmaniaacranulata Whitman>Whitmaniapigra?Whitman，the order of influence of enzymatic hydrolysis factors was as follows： enzyme dosage> enzymatic hydrolysis temperature> enzymatic hydrolysis pH; The optimal enzymatic process was as follows： using trypsin digestion， enzyme dosage 7 757.28 u/g， enzymatic hydrolysis temperature 53.20 ℃， enzymatic pH 8.30.The anticoagulant activity of the Japanese medical entrapment product obtained under this optimal condition reached 558 u/g.The model established in this study has high reliability， through comparison experiments， the species of leech with the best anticoagulant activity and the best enzymatic hydrolysis technology were selected. The research method is scientific， the results are accurate.

出^[10]。

結合當前研究進展^[11]來看，僅采用抗凝血試驗一項指標并不能完全代表水蛭的藥效，后期可以增加抗血小板凝集試驗等進一步評價不同品種水蛭的活性。

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