實時熒光定量PCR檢測人巨細胞病毒感染的 臨床意義分析

譚天照 李學仿 黃廣榮

【摘要】 目的 分析實時熒光定量聚合酶鏈反應（PCR）檢測在人巨細胞病毒（HCMV）感染中的應用價值。方法 選取363例疑似HCMV感染患兒及50例健康兒童， 均采集血樣進行實時熒光定量PCR檢測。分析熒光定量PCR檢測結果， 并比較不同性別、不同年齡HCMV感染的陽性檢出情況。結果 實時熒光定量PCR檢測顯示， HCMV感染患兒中32例為陽性， 陽性率為8.82%;健康兒童中1例為陽性， 陽性率為2%。陽性患兒的HCMV載量在5.0×102～1.0×104 copies/ml。HCMV感染患兒陽性率高于健康兒童， 差異具有統計學意義（P<0.05）。188例男性CMV感染患兒的陽性率為9.04%（17/188）， 175例女性CMV感染患兒的陽性率為8.57%（15/175）， 不同性別HCMV感染患兒陽性率比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。152例年齡<1歲CMV感染患兒的陽性率最高， 為14.5%;其次為1～3歲患兒， 陽性率為6.9%;109例>3歲患兒的陽性率最低， 為2.8%;不同年齡段CMV感染患兒的陽性率比較差異具有統計學意義（P<0.05）。結論 <1歲兒童由于機體的免疫力和抵抗力較弱， 容易出現HCMV感染的情況， 因此需要借助實時熒光定量PCR技術進行篩查， 從而盡早診斷和治療， 能夠避免嚴重并發癥的出現。

【關鍵詞】 實時熒光定量聚合酶鏈反應;人巨細胞病毒感染;臨床診斷

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.07.013

Analysis of clinical significance of real-time fluorescence quantitative PCR in detection of human cytomegalovirus infection ? TAN Tian-zhao， LI Xue-fang， HUANG Guang-rong. Yangchun Peoples Hospital， Yangchun 529600， China

【Abstract】 Objective ? To analyze the value of real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （PCR） in detection of human cytomegalovirus （HCMV） infection. Methods ? A total of 363 suspected HCMV infection children and 50 healthy children， and their blood samples were collected for real-time fluorescent quantitative PCR detection. The results of fluorescent quantitative PCR detection were analyzed， and the positive rates of different genders and different ages were compared. Results ? According to real-time fluorescent quantitative PCR， there were 32 positive cases， with a positive rate of 8.82%; 1 case of healthy children was positive， with a positive rate of 2%. The HCMV load of positive children was 5.0 ×102-1.0×104 copies/ml.

The positive rate of HCMV children was higher than that of healthy children， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The positive rate of 188 male children with CMV infection was 9.04% （17/188）， and the positive rate of 175 female children with CMV infection was 8.57%. There was no significant difference in the positive rate of HCMV infection between male and female （P>0.05）. The highest positive rate was 14.5% in

152 children with CMV infection< 1 year of age， followed by 6.9% in children 1-3 years of age， and the lowest was 2.8% in 109 children > 3 years of age， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion ? <1 year old children are vulnerable to HCMV infection due to weak body immunity and resistance， so they need to be screened with the help of real-time quantitative PCR technology. Thus avoid serious complications by early diagnosis and treatment.

【Key words】 Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction; Human cytomegalovirus infection; Clinical diagnosis

HCMV是一種常見的致病因， 人是該病毒的唯一宿主。孕期出現的HCMV感染可由胎盤傳染給胎兒， 引起死胎、早產等問題， 對母嬰健康造成較大的威脅。同時哺乳期也可通過乳汁造成新生兒感染， 引起新生兒發育障礙[1]。嬰幼兒在感染HCMV之后， 由于免疫系統發育不成熟， 可引起嚴重的病變， 同時該病的臨床癥狀多樣化且無特異性， 存在一定的診斷困難。病毒培養是病毒感染診斷的金標準， 但是由于培育時間較長， 很難在臨床普及， 而病毒抗體檢測在嬰幼兒中的敏感度與特異性不夠理想[2]。實時熒光定量PCR是近些年來臨床醫學推廣的新技術， 在病毒檢測中具有快速、高效的特點。為了進一步分析該技術的應用價值， 文章選取2018年2月～2019年5月363例本院收治疑為HCMV感染患兒進行觀察， 研究如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2018年2月～2019年5月本院收治的363例疑似HCMV感染患兒， 其中男188例， 女175例;年齡3 d～12歲， 平均年齡（2.1±3.3）歲。另選取同期50例健康兒童作對比分析。

1. 2 方法 所有研究對象均采集血樣， 并行實時熒光定量PCR檢測， 本次研究采用進口實時熒光定量PCR儀以及HCMV DNA測試盒。具體操作方法：采集所有研究對象的外周靜脈血2 ml， 2500 r/min離心

5 min， 之后取100 μl血清加入100 μl DNA濃縮液混勻之后以12000 r/min離心10 min， 棄上清液并加入20 μl DNA提取液， 并在100℃恒溫箱中放置10 min， 再以

12000 r/min離心5 min， 然后提取3 μl使用實時熒光定量PCR儀進行檢測， 嚴格按照儀器以及實際說明書進行操作。

1. 3 觀察指標 分析熒光定量PCR檢測結果， 并比較不同性別、不同年齡HCMV感染的陽性檢出情況。

1. 4 統計學方法 采用SPSS16.0統計學軟件處理數據。計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗以及秩和檢驗。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2. 1 實時熒光定量PCR檢測結果分析 實時熒光定量PCR檢測顯示， HCMV感染患兒中32例為陽性， 陽性率為8.82%;健康兒童中1例為陽性， 陽性率為2%。陽性患兒的HCMV載量在5.0×102～1.0×104 copies/ml。HCMV感染患兒陽性率高于健康兒童， 差異具有統計學意義（P<0.05）。

2. 2 不同性別HCMV感染患兒陽性率比較 188例男性CMV感染患兒的陽性率為9.04%（17/188）， 175例女性CMV感染患兒的陽性率為8.57%（15/175）， 不同性別HCMV感染患兒陽性率比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2. 3 不同年齡CMV感染患兒陽性率比較 152例年齡<1歲CMV感染患兒的陽性率最高， 為14.5%;其次為1～3歲患兒， 陽性率為6.9%;109例>3歲患兒的陽性率最低， 為2.8%;不同年齡段CMV感染患兒的陽性率比較差異具有統計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

HCMV感染是一種常見的疾病， 尤其是兒童， 感染率>80%。HCMV在感染之后經過系統治療雖然臨床癥狀完全消失， 但是病毒并不會完全被清除， 而是潛伏在人體形成終生感染。該病屬于條件致病菌， 當宿主由于各種因素造成的免疫力下降時， 潛伏在人體中的病毒可能增殖明顯而引起感染癥狀[3]。孕婦在感染HCMV之后， 能夠通過多種途徑引起胎兒HCMV感染， 如胎盤垂直傳染、產道感染以及乳汁傳播等， 可引起多種不良預后， 對母嬰健康安全造成了較大的影響。因此需要盡早發現和治療， 避免影響胎兒的正常發育。而HCMV感染可引起多組織器官受累， 包括肝臟、肺臟、腎臟、心臟以及淋巴系統等， 約有90%的HCMV感染嬰幼兒雖然為無癥狀感染， 但是仍有一部分患兒存在語言障礙、聽力障礙以及學習困難等后遺癥， 有一部分宮內HCMV感染的患兒在出生后發現存在黃疸、肝脾腫大以及發育畸形等問題， 由于患兒的臨床癥狀存在多樣化的特點， 無法通過觀察患兒的臨床癥狀來早期診斷， 因此需要利用先進的檢測技術進行篩查， 從而降低這些問題的出現， 能夠確保嬰幼兒的健康成長。

ELISA法檢測HCMV免疫球蛋白M（IgM）抗體一直被認為是HCMV感染臨床診斷的重要方法， 這主要是由于HCMV感染后3～5 d人體即可產生相應的IgM抗體， 且抗體的持續時間>3個月[4]。但是臨床研究指出， 部分IgM陰性的患兒可能由于免疫機制發育不完善， 因此在HCMV感染之后未出現IgM抗體或是抗體消失， 同時IgM陽性并不能作為HCMV感染的唯一指標， 這主要是由于風濕因子以及過往皰疹病毒感染殘留的病毒交叉反應也可造成假陽性現象， 從而影響了該檢查技術在HCMV感染臨床篩查中的應用[5]。此外， 該方法無法評價藥物治療效果以及患兒的預后情況。

實時熒光定量PCR技術是近些年來臨床醫學新推出的一種檢測技術， 其主要是將基因擴增、分子雜交以及熒光化學等技術相結合， 利用PCR擴增產物進行分析， 且該過程是在封閉環境中實現的， 因此能夠避免污染和無法定量的問題。該技術能夠快速檢測HCMV的DNA水平， 從而反映患兒病毒感染的嚴重程度與HCMV DNA復制水平， 從而指導臨床診斷、用藥和療效評價。因此， 實時熒光定量PCR技術在HCMV感染的臨床診斷中具有較好的應用效果。

本次研究結果顯示， 實時熒光定量PCR檢測顯示， HCMV感染患兒中32例為陽性， 陽性率為8.82%;健康兒童中1例為陽性， 陽性率為2%。陽性患兒的HCMV載量在5.0×102～1.0×104 copies/ml。HCMV感染患兒陽性率高于健康兒童， 差異具有統計學意義（P<0.05）。188例男性CMV感染患兒的陽性率為9.04%（17/188）， 175例女性CMV感染患兒的陽性率為8.57%（15/175）， 不同性別HCMV感染患兒陽性率比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。152例年齡<1歲CMV感染患兒的陽性率最高， 為14.5%;其次為1～3歲患兒， 陽性率為6.9%;109例>3歲患兒的陽性率最低， 為2.8%;不同年齡段CMV感染患兒的陽性率比較差異具有統計學意義（P<0.05）。這可能是由于嬰幼兒免疫系統發育不成熟， 容易受到病毒的感染， 而隨著年齡的增長， 身體的免疫力和抵抗力增強， 因此HCMV感染與兒童的年齡密切相關。對于出現黃疸、肝損傷以及肺炎等癥狀的患兒， 若未發現明顯誘因， 需要盡早進行實時熒光定量PCR測定， 篩查有無HCMV感染， 同時對于肝功能損傷的患兒需要積極進行保肝治療， 避免肝損傷的進一步加重[6-8]。

綜上所述， <1歲兒童由于機體的免疫力和抵抗力較弱， 容易出現HCMV感染的情況， 因此需要借助實時熒光定量PCR技術進行篩查， 從而盡早診斷和治療， 能夠避免嚴重并發癥的出現。

參考文獻

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[收稿日期：2019-12-05]