艾灸神闕穴調節高脂血癥小鼠相關炎性因子的效應研究*

李 梅 陳 雷 王耀帥

1 寧波市中醫院 浙江 寧波 315000

2 南京中醫藥大學 江蘇 南京 210023

灸法是使用灸材在人體腧穴進行烘烤，借助灸火的溫通力量達到防治疾病目的的一種外治療法。溫通作用是艾灸作用的機制之一，而“抗炎”是艾灸溫通作用的基礎。有一部分學者認為，炎癥反應過程特別是慢性炎癥反應過程的分子機制貫穿于很多疾病的發生發展過程中，并且認為炎性反應可能是諸多疾病的重要共同通路[1]。因此防治慢性炎癥性疾病的關鍵點和共同環節就是“控炎”。由此，我們選擇高脂血癥這個炎癥的載體來觀察艾灸調脂控炎的效應，以期探討艾灸可以通過調脂控炎的效應治療高脂血癥，進而防治動脈粥樣硬化性相關慢性疾病[2]。

1 材料與方法

1.1 分組與造模：選用雄性C57BL/6J小鼠，體重20±2g，購自常州卡文斯實驗動物有限公司（許可證號：SCXK（蘇）2011-0003），飼養于南京中醫藥大學實驗動物中心（清潔級），適應性喂養1周后分組，隨機分為正常組、模型組、艾灸組、藥物組，共4組，每組10只。參考高脂血癥造模方法[3-4]，結合預實驗的結果進行改進，采用高脂飼料（北京華阜康生物科技股份有限公司[許可證號：SCXK（京）2014-0008）]自由飲食6周，造成高脂血癥小鼠模型。造模期間，正常組每日以普通飼料喂養。

1.2 試劑及器材：總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所），白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）檢測試劑盒（南京阿普斯黛爾生物技術有限公司），直徑0.7cm艾條（南京艾顏堂艾絨有限責任公司），洛伐他汀膠囊（批號：H10980272，揚子江藥業集團有限公司），Allegra X-22系列多功能臺式高速離心機（北京東迅天地醫療儀器有限公司），WZ-23000RX無紙記錄儀（杭州凌碩檢測儀器有限公司），ELx800酶標儀（美國Bio Tek公司），BCD-174型低溫冰箱（德國西門子公司），VXE380型超低溫冰箱（Thermo公司Czech捷克），QE-400A型電子稱（南京聯宇計量設備公司）。其他：無菌操作臺、移液器、燒杯、小剪刀、眼科鑷、注射器、EP管、冰袋等。

1.2 實驗方法：分述如下。

1.2.1 干預方法：①正常組：繼續使用普通飼料喂養，與艾灸組一樣方法進行抓取和固定，但不予艾灸處理。②模型組：繼續予以高脂飼料喂養，與艾灸組一樣方法進行抓取和固定，但不予艾灸處理。③艾灸組：繼續予以高脂飼料喂養。小鼠被仰臥位固定于小鼠固定器上，充分暴露小鼠神闕穴皮膚，剪除神闕穴區鼠毛，使用碘伏棉球消毒，待其安靜不掙扎后，使用直徑為0.7cm的清艾條，予每天1次持續10分鐘的艾灸治療，總共治療2周。艾灸治療時，將艾條垂直懸于神闕穴上方10±2mm處，為保持艾條一直處于紅火狀態，每分鐘彈灰1次。人工控制無紙記錄儀溫度探頭緊貼于施灸皮膚，監測并記錄實施艾灸時的溫度；同時也可根據無紙記錄儀顯示的溫度及時調整艾條距皮膚的距離。通過調節艾條與施灸皮膚的距離和及時彈灰保持紅火狀態，將施灸溫度控制在45±2℃[5-6]。④藥物組：繼續予以高脂飼料喂養。使用電子稱稱取藥物組小鼠體重，每日予以洛伐他汀（10mg/kg）混懸液灌胃1次，共治療2周。治療期間同艾灸組一樣方法進行抓取和固定，但不予艾灸處理。

1.2.2 血清制備：治療結束后，禁食不禁水12小時后單側眼球摘除收集血液將其置于離心管中靜置1小時。常規條件下（離心參數：3000轉/分鐘）離心一刻鐘后取上層血清，將上層血清置于EP管中，保存于-20℃的冰箱中待測。

1.2.3 指標檢測：使用TC、TG試劑盒，釆用酶標儀比色法檢測各組小鼠血清TC、TG的含量。使用IL-6、IL-10、TNF-α檢測試劑盒釆用雙抗體夾心法檢測相關的血清炎性指標的水平。

1.3 統計學方法：本研究采用SPSS 19.0進行結果統計和分析。用完全隨機設計的單因素方差分析統計符合正態分布且方差齊的計量數據，再以LSD檢驗進行組間比較；采用Welch檢驗符合正態分布但方差不齊的計量數據，并以Tamhane s T2檢驗進行組間比較，結果均以±s的形式表示。所有檢驗均是雙側檢驗，以P＜0.05或P＜0.01為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組小鼠TC、TG變化對比：見表1。

表1 艾灸神闕穴對高脂血癥小鼠血清TC、TG水平的影響（±s，mmol/L）

表1 艾灸神闕穴對高脂血癥小鼠血清TC、TG水平的影響（±s，mmol/L）

注：與正常組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.01。

組別正常組模型組艾灸組藥物組TG 0.88±0.09 1.68±0.31##0.92±0.37*0.95±0.32*只10 10 10 10 TC 3.87±0.73 7.71±1.41##3.97±1.33*4.51±1.27*

2.2 各組小鼠IL-6、IL-10、TNF-α變化的比較：見表2。

表2 艾灸神闕穴對高脂血癥小鼠血清IL-6、IL-10和TNF-α水平的影響（±s，pg/ml）

表2 艾灸神闕穴對高脂血癥小鼠血清IL-6、IL-10和TNF-α水平的影響（±s，pg/ml）

注：與正常組比較，##P＜0.01，#P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05。

T N F-α 9 7.1 8±2 1.8 9 1 3 6.0 9±3 3.3 5##1 0 0.6 5±4 8.5 1*9 5.0 2±4 6.0 8*正常組模型組艾灸組藥物組1 2 3.6 9±4 9.7 1 2 0 0.6 4±5 3.9 6##1 2 8.4 3±7 1.3 7*1 3 1.5 0±6 5.9 8*7 4.4 2±1 1.0 6 9 4.1 1±1 6.6 9#1 3 2.4 2±3 4.6 4*1 3 1.5 7±3 0.0 5*組別I L-6 I L-1 0

3 討論

筆者研究結果表明，艾灸可以有效調控血脂，并且可以改善機體的異常炎性反應，控制炎癥可能是艾灸調節血脂的重要途徑。同時，我們注意到，在我們的實驗研究中，雖然艾灸調節血脂與控制炎癥的作用與洛伐他汀藥物相當，但是艾灸在調脂控炎方面的獨特優勢仍值得進一步研究。艾灸的優勢，一方面是艾灸控炎作用的整體性和雙向性，另一方面是對于慢性炎癥性疾病“治未病”的防治作用。

炎癥反應具有四個基本的反應通路[7]，艾灸控制炎癥的作用具有整體性，表現在艾灸可以干預炎性反應的起始、中間、終末等各個環節。目前動脈粥樣硬化被醫學界的多數學者認為是一種慢性炎癥性疾病，炎癥反應縱貫全過程[8]。其常見的致病因素是血脂的異常，本研究結果已表明艾灸對血脂具有良好的調節作用。在炎癥介質方面選擇IL-6、IL-10、TNF-α進行觀察，發現艾灸在阻斷此環節中發揮良好作用。另外艾灸控炎作用體現了艾灸良性的雙向調節作用。艾灸對炎癥因子（IL-6，TNF-α）起抑制作用，同時對抑炎因子（IL-10）起促進作用。這種調節體現了艾灸的雙向調節能力。本研究充分說明，艾灸通過降低血脂水平、抑制炎癥因子、促進抗炎因子進而發揮調脂控炎的效果。結合本實驗的研究結果和醫學界同類研究結果[9-10]，筆者認為艾灸調節血脂的功能與控制炎癥反應密切相關，多環節多通路調脂控炎的整體作用是艾灸的重要優勢。艾灸的整體性調整作用是基于人體生理范圍內的雙向性調整，因此艾灸可以達到有病治病、無病保健的目的。高脂血癥是血管損傷的高危因素，可以引起“高脂血癥-血管損傷-動脈粥樣硬化-心腦血管疾病”的聯動反應[11]，西藥在防治動脈粥樣硬化等慢性炎癥性疾病方面有諸多不足之處[12]。艾灸在很大程度上避免了服藥的副作用，且療效好、操作方便、患者易于接受。《黃帝內經》中有記載“是故圣人不治已病治未病”，所以，基于艾灸對慢性炎癥性疾病的調控，從“治未病”的角度進一步深入研究艾灸對高脂血癥的治療來預防心腦血管疾病。