G試驗(yàn)和真菌培養(yǎng)聯(lián)合檢測對侵襲性真菌病診斷價(jià)值以及臨床療效評價(jià)

楊璇，彭敏顏，劉志鋒，郝國慶，姜朝新

（廣東省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，廣東 佛山 528200）

侵襲性真菌病指的是人體血液、組織被真菌侵襲后，在機(jī)體部位繁殖、生存，造成器官、組織損壞或引發(fā)一系列炎癥反應(yīng)[1]。肺侵襲性真菌病指的是肺部被真菌侵襲，給肺部功能造成嚴(yán)重?fù)p傷，導(dǎo)致肺部病變。臨床主要表現(xiàn)為胸悶、頭暈、咳嗽、無力、失眠及干嘔等癥狀。國內(nèi)研究[2]表明曲霉絲狀真菌與酵母樣真菌是常見的病原菌。本研究選取我院收治的肺侵襲性真菌病患者102例與肺感染者102例作為研究對象，分別實(shí)施G試驗(yàn)與G試驗(yàn)聯(lián)合真菌培養(yǎng)檢測，以探究其對肺侵襲性真菌病的診斷價(jià)值，現(xiàn)具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 取2017年1月-2019年3月我院收治的侵襲型真菌病患者102例，設(shè)置為研究組，另選取102例非感染者作為參照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：伴有臨床感染證據(jù)；伴有真菌感染高危因素。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料不完全；不同意參與本次研究。兩組患者在一般資料方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05，具有可比性。

1.2 方法 G試驗(yàn)：標(biāo)準(zhǔn)品溶液a制備：選取（1,3）-β-D葡糖糖標(biāo)準(zhǔn)品，將1.5 mL溶解液加入至標(biāo)準(zhǔn)品中，配置成200 pg/mL，進(jìn)行1 min以上渦旋震蕩；標(biāo)準(zhǔn)品溶液b制備，將0.5 mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液a置入無熱源轉(zhuǎn)移管中，并加入0.5 mL溶解液，配置成100 pg/mL渦旋震蕩1 min以上；標(biāo)準(zhǔn)品溶液c制備：將0.5 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液b加入至無熱源轉(zhuǎn)移管中，另加入0.5 mL溶解液，配置成50 pg/mL渦旋震蕩1 min以上；標(biāo)準(zhǔn)品溶液d制備：將標(biāo)準(zhǔn)品c加入至無熱原轉(zhuǎn)移管中，并加入0.5 mL溶解液，配置成25 pg/mL，渦旋震蕩至少1 min；標(biāo)準(zhǔn)品溶液e制備，將0.5 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液d加入至無熱原轉(zhuǎn)移管中，并加入0.5 mL溶解液，配置成12.5 pg/mL，渦旋震蕩至少1 min，借助MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)進(jìn)行檢測，對血清中（1,3-β）-葡萄牙含量進(jìn)行計(jì)算。

真菌培養(yǎng)：應(yīng)用沙保氏培養(yǎng)基對真菌進(jìn)行培養(yǎng)，選用接種環(huán)沾10 μL支氣管肺泡灌洗液在培養(yǎng)基中進(jìn)行均勻接種，35 ℃條件下恒溫培養(yǎng)24-48 h，選取可疑菌落，應(yīng)用梅里埃生化鑒定卡對可疑菌落進(jìn)行鑒定。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察記錄兩組患者G試驗(yàn)檢測、G試驗(yàn)檢測與真菌培養(yǎng)檢測結(jié)果，分析G試驗(yàn)、及G試驗(yàn)檢測與真菌培養(yǎng)檢測靈敏度與特異性。分析實(shí)驗(yàn)室與G試驗(yàn)、G試驗(yàn)與真菌培養(yǎng)聯(lián)合檢測的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有研究數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，正態(tài)計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，組間比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計(jì)數(shù)資料組間率（%）的比較用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者G試驗(yàn)、G試驗(yàn)與真菌培養(yǎng)檢測結(jié)果對比分析與單獨(dú)G試驗(yàn)檢測相比，聯(lián)合檢測結(jié)果明顯較高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05，見表1。

表1 兩組患者G試驗(yàn)、G試驗(yàn)與真菌培養(yǎng)檢測結(jié)果對比分析（Mean±SD）

2.2 兩種方法診斷靈敏度與特異性對比分析 102例感染患者同時進(jìn)行G試驗(yàn)與真菌培養(yǎng)，兩者同時陽性有11例，兩者同時陰性有48例。G試驗(yàn)陽性有15例，真菌培養(yǎng)陽性28例，與G試驗(yàn)檢測侵襲性真菌病相比，G試驗(yàn)與真菌培養(yǎng)檢測特異性與敏感性明顯較高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05，見表2。

表2 兩種方法診斷靈敏度與特異性對比分析

2.3 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與檢測結(jié)果相關(guān)性對比分析 患者NEU%及WBC水平與檢測準(zhǔn)確性呈正相關(guān)，見表3。

表3 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與檢測結(jié)果相關(guān)性對比分析

3 討論

真菌對肺部組織、支氣管及氣管進(jìn)行侵襲后，引發(fā)肺部炎癥反應(yīng)及氣道黏膜炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致肺部組織發(fā)生病理性損害，該現(xiàn)象被稱為肺侵襲性真菌病[3]。其中常見的真菌為曲霉絲狀真菌與酵母楊真菌，該真菌均屬于念珠菌。多見于血液系統(tǒng)腫瘤患者、器官移植患者以及重癥監(jiān)護(hù)室患者。近幾年來，糖皮質(zhì)激素與廣譜抗生素應(yīng)用量逐漸增加，使侵襲性真菌病發(fā)病率呈逐年上升趨勢[4]。以往診斷方法包括病理組織活檢與針吸。這些方法敏感性較低、檢出率低、給患者機(jī)體造成損傷較大，因此，在臨床中應(yīng)用受到一定限制。

真菌侵襲肺部時，（1,3）-β-D葡萄糖利用釋放作用，于人體體液中出現(xiàn)，一般采用G試驗(yàn)早期診斷是否發(fā)生毛孢子菌、曲霉屬、念珠菌屬等侵襲性真菌感染[5]。G試驗(yàn)存在的局限為只能判定是否出現(xiàn)真菌侵襲性感染，無法有效確定感染真菌類型[6]。輸注白蛋白以及應(yīng)用抗生素后會造成患者葡聚糖含量上升，進(jìn)而導(dǎo)致G試驗(yàn)假陽性上升。另外，重癥患者輸入蛋白制劑或者食用菌類食物后，也會造成假陽性上升[7]。使用卡泊芬凈等抗真菌藥物時，會導(dǎo)致假陰性上升。

現(xiàn)階段，血清特異性抗原檢測特異性高、敏感性高且具備操作便捷等優(yōu)點(diǎn)受到臨床高度關(guān)注。大多數(shù)真菌細(xì)胞壁中含有（1,3）-β-D葡萄糖，作為真菌特異性物質(zhì)的一種，一旦出現(xiàn)真菌感染，（1,3）-β-D葡萄糖被釋放血液或其他體液中，因此，侵襲性真菌感染早期診斷的重要指標(biāo)為（1,3）-β-D葡萄糖。曲霉屬真菌細(xì)胞壁的特異性多糖成分之一為半乳甘露聚糖，在發(fā)病7周左右，半乳甘聚糖水平有所上升，但經(jīng)CT檢查與臨床癥狀檢查無特異性表現(xiàn)。尚未進(jìn)行真菌培養(yǎng)前，半乳甘露聚糖抗原定性測定有利于早期診斷真菌感染。然而，半乳甘露聚糖主要用于曲霉菌感染，在廣譜真菌感染中診斷價(jià)值較低。與G試驗(yàn)相同，多種因素均可造成其診斷結(jié)果假陽性上升。以往真菌培養(yǎng)需要耗時長，且存在外源性污染及敏感性低等特征，臨床中應(yīng)用較少。但真菌培養(yǎng)可培養(yǎng)出利于藥敏與鑒定真菌，有助于臨床指導(dǎo)用藥[8]。

有研究應(yīng)用半乳甘露聚糖、G試驗(yàn)以及真菌培養(yǎng)檢測侵襲性真菌感染，結(jié)果表明，三者聯(lián)合的敏感性明顯高于單項(xiàng)檢測。本研究因半乳甘露聚糖檢測與G試驗(yàn)檢測無顯著差異，故單純使用G試驗(yàn)檢測以及G試驗(yàn)與真菌培養(yǎng)聯(lián)合檢測。檢測結(jié)果表明，聯(lián)合檢測診斷結(jié)果較高，且聯(lián)合檢測敏感性與特異性高于單獨(dú)G試驗(yàn)檢測結(jié)果。研究結(jié)果與上述研究結(jié)果基本一致。也有研究應(yīng)用G試驗(yàn)與半乳甘露聚糖試驗(yàn)檢測侵襲性真菌感染，結(jié)果表明半乳甘露聚糖檢測敏感性與特異性均低于G試驗(yàn)組。因此，研究中未應(yīng)用半乳甘露聚糖試驗(yàn)檢測。有研究指出G試驗(yàn)及真菌聯(lián)合檢測侵襲性真菌感染敏感性與特異性較高。本研究結(jié)果表明與單項(xiàng)G試驗(yàn)檢測相比，聯(lián)合檢測敏感性與特異性明顯較高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與上述研究結(jié)果基本一致。通過分析聯(lián)合檢測與患者CRP水平、NEU及WBC相關(guān)性表明，準(zhǔn)確性與其呈正相關(guān)。

綜上所述，肺侵襲性真菌病實(shí)施G試驗(yàn)與真菌培養(yǎng)聯(lián)合檢測診斷價(jià)值高，為臨床治療提供有效依據(jù)。