冠心病患者血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L水平變化與冠脈病變程度的關系

梁善福 孫運 陳豐毅 程帥

冠心病（coronary heart disease，CHD）患者并發(fā)癥的發(fā)生率較高，遠期心血管惡性臨床結局的惡化較為明顯[1]。部分地區(qū)的研究發(fā)現(xiàn)，CHD 的發(fā)病率和致殘率均呈上升趨勢[2]。血清學細胞因子檢測具有經(jīng)濟和便捷的特點，對CHD 的病情評估有一定的參考價值，有助于指導CHD 患者的整體性治療及臨床預后隨訪工作。血清中胱抑素C（Cys-C）能夠通過誘導氧化應激性反應，加劇氧化自由基的浸潤程度，進而促進心肌細胞的損傷[3]；I 型膠原羧基末端肽（ICTP）是心力衰竭相關標志物，在心肌細胞順應性改變的過程中，其濃度可明顯上升[4]；基質金屬蛋白酶2（MMP2）是金屬蛋白酶家族成員，能夠通過誘導炎癥性因子的激活，加劇對冠狀動脈的損傷[5]；可溶性CD40L（sCD40L）是趨化相關因子，能夠通過誘導下游趨化因子的富集，最終促進CHD的病情進展[6]。為了解血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 的表達及其與CHD 患者病情的關系，從而為臨床CHD 的診療提供參考，本研究選取我院確診的148 例CHD 患者及健康對照者為研究對象，統(tǒng)計分析了Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 的表達及其與冠狀動脈病變的關系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料選取我院確診的148 例CHD 患者作為CHD 組，70 例健康者作為對照組。CHD 組男80 例，女68 例，患者年齡46～79 歲，平均（63.6± 11.4）歲；其中急性心肌梗死組（AMI 組）33 例，穩(wěn)定型心絞痛組（SAP 組）68 例，不穩(wěn)定型心絞痛組（UAP組）47 例；冠脈造影結果：單支病變73 例，雙支病變39 例，三支病變36 例；合并疾病：高血壓87 例，糖尿病41 例，血脂異常57 例；吸煙49 例。對照組男38 例，女32 例，年齡44～79 歲，平均（62.0±9.8）歲，吸煙23 例。兩組研究對象的年齡、性別、吸煙率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

診斷及入選標準：①CHD 患者的診斷參考中華醫(yī)學會制定的診斷標準[7]；②患者年齡≤79 歲；③經(jīng)冠脈造影發(fā)現(xiàn)至少一支血管的狹窄程度＞50%；④對照組為體檢志愿者，體檢結果健康；⑤本研究符合《赫爾辛基宣言》相關醫(yī)學倫理規(guī)定，經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準。

排除標準：①血液系統(tǒng)疾病患者；②惡性腫瘤；③心臟瓣膜病；④感染性疾病；⑤心肌炎、心功能（NYHA）分級≥Ⅱ級。

1.2 指標檢測方法采用一次性靜脈血采集器采集肘部靜脈血5ml 后自然放置，取上清液體進行檢測。采用貝克曼庫爾特公司UniCel DxI 800 免疫發(fā)光儀器進行Cys-C、ICTP 的檢測，配套試劑盒購自北京九強生物公司。

采用ELISA 法進行MMP2、sCD40L 的檢測，采用十字交叉的方法進行抗原濃度的測定，采用碳酸鹽緩沖液進行抗原稀釋，加入96 孔的酶標板中，蓋好酶標板蓋后置于4℃冰箱過夜，蒸餾水沖洗3 次，每次5min，輕輕叩擊酶標板甩干。每孔中加入5%的脫脂牛奶200μl，置于4℃冰箱過夜，蒸餾水沖洗3 次，每次5min，加入稀釋好的抗體（購自Abcum 公司，批號：20083845，濃度1∶800），蒸餾水沖洗3 次，每次5min，每孔中加入100μl 的底物，顯色后在酶標儀上進行吸光度的檢測。

1.3 冠脈評分標準冠脈評分采用Gensini 法進行：①根據(jù)狹窄程度評分：狹窄程度＜25%記為1 分，25%～49%為2 分，50%～74% 為4 分，75%～90% 為8 分，91%～99%為16 分，100%為32 分；②根據(jù)病變部位評分：左主干5 分，左前降支或回旋支2.5分，左前降支中段1.5 分，左前降支遠段1.0 分，左回旋支中、遠段1.0 分，右冠狀動脈1.0 分，小分支0.5 分。兩類積分求和，即為總分。總分≤24 分為輕度狹窄，25～49 分為中度狹窄，≥50 分為重度狹窄。

1.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS 21.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，符合正態(tài)分布的計量資料采用±s表示，兩組間分析采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗；相關性分析采用Pearson 線性相關分析法；P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 CHD 組與對照組血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 水平比較CHD 組患者血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 水平高于對照組（P<0.05），見表1。

表1 CHD 組與對照組血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L水平比較（±s）

表1 CHD 組與對照組血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L水平比較（±s）

sCD40L（μg/L）CHD 組 148 1.14±0.38 4.82±0.70 2.37±0.81 4.48±1.30對照組 70 0.55±0.17 3.67±0.52 1.30±0.56 2.16±0.63 t 12.405 12.235 9.976 14.153 P 0.000 0.000 0.000 0.000組別 n Cys-C（mg/L）ICTP（ng/ml）MMP2（ng/ml）

2.2 不同類型CHD 患者血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 水平比較SAP 組、UAP 組及AMI 組患者血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 水平組間呈逐漸升高的趨勢，組間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

表2 不同類型CHD 患者血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 水平比較（±s）

表2 不同類型CHD 患者血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 水平比較（±s）

sCD40L（μg/L）SAP 組 68 0.75±0.35 4.10±0.63 1.56±0.71 2.71±0.88 UAP 組 47 1.20±0.32 4.94±0.68 2.28±0.74 4.63±1.21 AMI 組 33 1.52±0.27 5.40±0.55 3.42±0.63 5.39±1.01 F 25.591 18.442 23.006 34.183 P 0.000 0.000 0.000 0.000組別 n Cys-C（mg/L）ICTP（ng/ml）MMP2（ng/ml）

2.3 不同冠脈病變支數(shù)CHD 患者血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 水平、Gensini 評分比較單支、雙支及三支冠脈病變的CHD 患者血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 水平及Gensini 評分組間呈逐漸升高的趨勢，組間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表3。

表3 不同冠脈病變支數(shù)CHD 患者血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 水平、Gensini 評分比較（±s）

表3 不同冠脈病變支數(shù)CHD 患者血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 水平、Gensini 評分比較（±s）

Gensini評分單支 73 0.73±0.34 3.98±0.56 1.49±0.80 2.65±0.95 9.4±3.0雙支 39 1.19±0.30 4.87±0.61 2.12±0.71 4.80±1.17 20.6±5.2三支 36 1.65±0.31 5.70±0.68 3.80±0.70 5.53±0.97 35.1±8.4 F 27.118 22.304 28.002 39.186 44.880 P 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000支數(shù) n Cys-C（mg/L）病變ICTP（ng/ml）MMP2（ng/ml）sCD40L（μg/L）

2.4 CHD 患者血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L水平與Gensini 評分的相關性CHD 患者血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 水平與Gensini 評分均呈顯著正相關（P<0.05），見表4。

表4 相關性分析結果

3 討論

冠狀動脈內皮細胞損傷或者長期的炎癥反應激活，能夠顯著促進冠狀動脈內皮下平滑肌細胞痙攣，促進冠狀動脈狹窄，最終導致心肌細胞的缺血缺氧性損傷[8]。流行病學統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，CHD 的發(fā)病率為0.5%～2.7%，甚至更高，在長期精神壓力較大或者有不良飲食習慣的群體中，CHD 的發(fā)病率持續(xù)上升[9，10]。心臟超聲雖然能夠評估CHD 患者的心功能，但其對于CHD 患者冠狀動脈病變或者狹窄程度并無評估價值；冠狀動脈介入造影檢查，能夠在CHD 的病情評估過程中發(fā)揮重要作用，但冠狀動脈介入造影檢查的費用較高，屬于創(chuàng)傷性檢查，因此患者對其接受程度較低。血清學指標能夠發(fā)揮其定量化和檢測便捷的特點，在心血管系統(tǒng)疾病的診療過程中具有重要的參考價值。本研究探討了血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 水平變化與CHD 患者冠狀動脈狹窄評分的關系。

在Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 的相關基礎領域研究中，發(fā)現(xiàn)Cys-C 主要參與胱抑素或者半胱氨酸的代謝平衡過程，能夠通過提高下游游離氧自由基的富集程度，加劇對心肌細胞膜的侵襲；ICTP 是羧基末端結構，能夠反映心肌細胞的儲備功能，在心力衰竭或者心臟順應性改變的過程中，機械性的刺激能夠顯著促進ICTP 的釋放[11]；MMP2 是金屬蛋白酶家族成員，其對心肌細胞間質成分的分解，能夠促進心肌細胞的纖維化[12]；sCD40L 還能夠影響補體成分及自身免疫性損傷過程，加劇CHD 患者的病情進展[13]。

通過對血清中Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L的表達分析研究可以發(fā)現(xiàn)，在CHD 患者血清中，Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 的水平明顯上升，與對照組相比，有統(tǒng)計學差異，提示Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 均能夠影響CHD 的病情進展，涉及多重生理病理機制，同時還涉及炎癥信號通路的激活和心肌細胞的重塑性病理改變。焦云娣等[14]也認為，在CHD 患者血清中，Cys-C 的表達水平或者表達幅度明顯上升，在遠期心肌梗死發(fā)生率較高或者發(fā)生心力衰竭的患者中，血清Cys-C的表達水平可上升3～4 倍。急性心肌梗死組（AMI組）、穩(wěn)定型心絞痛組（SAP 組）和不穩(wěn)定型心絞痛組（UAP 組）中是不同類型的冠心病患者，在不同亞組患者中，可以發(fā)現(xiàn)SAP 組、UAP 組及AMI 組患者的血清Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 水平具有逐漸上升的趨勢，提示相關細胞因子與CHD 患者的病情程度密切相關，之所以在AMI 患者中相關指標的上升幅度最高，考慮可能由于AMI 患者心肌細胞的缺血程度較為嚴重，心肌細胞的壞死及因此誘導的炎癥反應程度較高，進而持續(xù)促進了Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 的釋放[15]。Gensini 評分是評估CHD 患者冠狀動脈損傷程度的指標，在血管病變數(shù)量較多或者Gensini 評分較高的患者中，Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 的表達水平可明顯上升，進一步提示Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 的表達與CHD 患者冠狀動脈病變的關系，臨床上對于需要評估冠狀動脈病變程度的患者，在冠狀動脈介入造影的基礎上，必要時可以通過檢測Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L，進而評估CHD 的整體病情。

綜上所述，在CHD 患者血清中，Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 的表達水平明顯上升，同時Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 的表達與CHD 患者的病情程度及冠狀動脈損傷程度密切相關。本研究的局限性在于未探討Cys-C、ICTP、MMP2、sCD40L 與CHD 患者生存指標的關系，有待于進一步研究。