HPLC法測定復方胃蛋白酶顆粒中葡萄糖和蔗糖的含量

邢晟，梁翠榮，鞏麗萍，石峰，王祿山，吳秀蕓

(1.山東省食品藥品檢驗研究院，山東 濟南 250101；2.山東大學微生物技術國家重點實驗室<微生物技術研究院>，山東 青島 266237)

復方胃蛋白酶顆粒主要成分為胃蛋白酶、維生素B1和山楂，胃蛋白酶在胃酸參與下將蛋白質分解成蛋白胨及少量多肽，維生素B1可提高食欲、增加食量，山楂能增加胃中酵素，促進胃腸分泌，提高蠕動，為胃蛋白酶提供酸性環境，有健胃消食之功效。復方胃蛋白酶顆粒主要用于消化不良、食欲缺乏等[1-5]。葡萄糖、蔗糖、麥芽糖等是人體必需的營養要素，同時也是復方胃蛋白酶顆粒中的主要輔料，目前尚無生化制劑中葡萄糖、蔗糖、麥芽糖等輔料含量的標準檢驗方法，因此建立檢測生化制劑中糖含量的測定方法十分必要。

目前輔料多糖的檢驗方法主要參考《中國藥典》2015年版(四部)[6]中的相關規定。但這些輔料檢驗方法精確度有限，且可能受限于復方胃蛋白酶顆粒其他成分的干擾，因此僅做參考。根據文獻調研結果，建立用示差折光高效液相色譜法測定復方胃蛋白酶顆粒中葡萄糖含量的方法[7-8]。該方法快速、準確、穩定、可靠，可用于復方胃蛋白酶顆粒等制劑中糖含量的測定。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀；Mettler Toledo XSE205DU電子天平；蔗糖對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111507-201303，含量：99.8%)；葡萄糖對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110833-201205，含量：99.5%)；復方胃蛋白酶顆粒(來自7家生產企業)156批次；水為純化水(Millipore Q-POD制備)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 液相色譜條件 色譜柱為Welch Xtimate Sugar-H(7.8 mm×300 mm，8 μm)；流動相為0.004 mol·L-1硫酸溶液；檢測器為示差折光檢測器；流速為0.5 mL·min-1；柱溫為25 ℃；進樣量為10 μL。

2.2 溶液的制備 精密稱取供試品約1 g，置于100 mL量瓶中，加流動相(0.004 mol·L-1硫酸溶液)溶解并稀釋至刻度，搖勻，取1 mL置1.5 mL離心管中，12 000 rpm離心10 min，取上清液，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

分別精密稱取葡萄糖對照品1.015 g和蔗糖對照品1.002 g，分別置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液；分別精密稱取葡萄糖對照品1.012 g和蔗糖對照品1.011 g，分別置10 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲備液。

2.3 專屬性試驗 按生產工藝及處方比例，按“2.2”項下的方法制備成不含蔗糖和葡萄糖的陰性對照溶液，照上述色譜條件進行檢測(見圖1)。如圖可見，除蔗糖對照品和葡萄糖對照品外未見其他雜質的干擾峰，方法專屬性良好。

2.4 線性關系考察 分別精密量取葡萄糖和蔗糖對照品儲備液0.1、0.2、0.5、1.0、5.0 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度。精密量取上述對照品溶液以及對照品儲備液各10 μL注入液相色譜儀測定，以進樣量X(mg)為橫坐標，色譜峰面積Y為縱坐標，制得回歸方程：

Y=153 939X+78 623，r=0.999 8(葡萄糖)

Y=183 227X+19 588，r=0.999 9(蔗糖)

結果表明，葡萄糖進樣量在10.12～1 012.0 μg范圍內線性關系良好，蔗糖進樣量在10.11～1 011.0 μg范圍內線性關系良好。

2.5 精密度試驗 分別取對照品溶液10 μL連續進樣6次，測得葡萄糖峰面積的RSD為0.34%，蔗糖峰面積的RSD為1.06%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗 分別取對照品溶液10 μL，置室溫下分別放置0、10、20、30、40 h后進樣，測得葡萄糖和蔗糖峰面積的RSD分別為0.75%和0.41%(n=4)。結果表明供試品溶液在40 h內穩定性良好，能夠滿足測定需要。

2.7 重復性試驗 取同一批號供試品6份，照“2.2”項下的方法制備成供試品溶液測定，計算蔗糖的含量(該批次產品處方不含葡萄糖)，其RSD為0.19%，結果表明方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取確定蔗糖含量的供試品約1 g(蔗糖含量為0.39 g·g-1)，共計9份，分別置100 mL量瓶中，其中3份加入蔗糖對照品貯備液3 mL(約相當于供試品蔗糖含量的0.8倍)，3份加入蔗糖對照品貯備液3.8 mL(約相當于供試品蔗糖含量的1.0倍)，3份加入蔗糖對照品貯備液4.6 mL(約相當于供試品蔗糖含量的1.2倍)，照“2.2”項下的方法制備成供試品溶液，精密量取上述供試品溶液10 μL測定，結果蔗糖的平均回收率為98.73%，RSD為0.224%，表明回收率良好，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果(n=9)

2.9 復方胃蛋白酶顆粒葡萄糖及蔗糖含量測定 取收集到的156批復方胃蛋白酶顆粒樣品，照“2.2”項下的方法制備成供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，以外標法計算葡萄糖以及蔗糖的含量。結果見表2。

表2 樣品葡萄糖及蔗糖含量測定結果

3 討論

3.1 目的與意義 葡萄糖、蔗糖等在藥物制劑中廣泛應用。但由于個體糖耐量存在差異，且進食過多糖對身體不利，因此有效控制藥物制劑中糖的含量十分重要。目前尚無可同時檢測復方胃蛋白酶顆粒中葡萄糖、蔗糖含量的標準檢測方法，用示差折光高效液相色譜法測定復方胃蛋白酶顆粒中葡萄糖、蔗糖的含量，簡單、準確、可靠，可用于復方胃蛋白酶顆粒中葡萄糖與蔗糖的含量測定。

3.2 結果分析與建議 本次檢驗的7家生產企業均在產品說明書中明確標注添加蔗糖，僅有D企業明確標注添加葡萄糖。檢測結果顯示，7家生產企業產品總含糖量均為90%左右，其中A企業產品49批，蔗糖含量為3.7 g/袋，葡萄糖含量為6.0 g/袋；B企業產品4批，蔗糖含量為8.7 g/袋，葡萄糖未檢出；C企業產品13批，蔗糖含量為9.0 g/袋，葡萄糖未檢出；D企業產品38批，蔗糖含量為5.0 g/袋，葡萄糖含量為4.0 g/袋；E企業產品16批，蔗糖含量為9.0 g/袋，葡萄糖未檢出；F企業產品13批，蔗糖含量為8.7 g/袋，葡萄糖未檢出；G企業產品23批，蔗糖含量為9.0 g/袋，葡萄糖未檢出。結果顯示，除D企業外，A企業也在產品中添加了葡萄糖，該企業認為本次處方變更未影響產品藥品質量，不需進行補充申請，存在一定的不合規性。

目前因缺少質量控制標準，企業在糖類輔料的投料上存在一定的不合規性，為規范復方胃蛋白酶顆粒中糖的含量，建議明確規定糖類輔料的添加量，并在相關標準中增設糖的含量測定項目，以利于更好地控制產品質量。