解幽膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

杜成興 潘年瓊 楊熟英 霍昕 楊迺嘉

(1.貴州省生物技術(shù)研究開發(fā)基地，貴州 貴陽 550002；2.貴州省科暉制藥廠，貴州 清鎮(zhèn) 551400）

解幽膠囊由5-HMF加輔料制成。5-羥甲基糠醛（5-HMF）是中藥中廣泛存在的化學(xué)成分,在中藥炮制、貯藏、配伍過程中含量變化明顯。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明5-HMF具有抗氧化、改善學(xué)習(xí)記憶、抗過敏、保護神經(jīng)細(xì)胞、抗炎等藥理作用[1-4]。本研究采用高效液相色譜法對解幽膠囊中的5-HMF進(jìn)行含量測定，以期建立解幽膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[5-9]，為解幽膠囊的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1.儀器和材料

1.1 儀器

AUW120D型電子天平（島津儀器蘇州有限公司），AL204型電子天平（梅特勒—托利多儀器（上海）有限公司），Ultimate 3000高效液相色譜儀（美國賽默飛公司）。其他儀器均由貴州省生物技術(shù)研究開發(fā)基地提供。

1.2 材料

5-HMF對照品（批號：111626-201610）采購于中國食品藥品檢定研究院。解幽膠囊樣品、藥材及試劑由貴州省生物技術(shù)研究開發(fā)基地提供。

2.方法和結(jié)果

2.1 色譜適應(yīng)性條件

依利特Supersil ODS-B C18柱（250mm×4.60mm，5μm）、流動相為甲醇—水（15:85)、流速為1ml·min-1、柱溫30℃、檢測波長為280nm；進(jìn)樣量10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 樣品制備方法

取解幽膠囊混合均勻，稱取樣品0.0318g，置于100ml容量瓶中，加入10%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置，得樣品溶液。

2.2.2 對照品制備方法

精密稱取5-HMF對照品10mg，置于100ml容量瓶中，加入10%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置，得5-HMF對照品溶液（10.2672μg/ml）。

2.3 線性關(guān)系考察

精密配制6種濃度的5-HMF對照品溶液：2.5668μg/ml、5.1336μg/ml、10.2672μg/ml、20.5344μg/ml、41.0688μg/ml、82.1376μg/ml，分別進(jìn)樣 10μL，以 5-HMF濃度為X軸，峰面積為Y軸，得線性回歸方程。結(jié)果表明，5-HMF在2.5668～82.1376μg/ml范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，回歸方程為y=70515x-20018（r=0.9999）。

2.4 穩(wěn)定性實驗

取解幽膠囊適量混合均勻，精密稱取樣品0.0318g。按2.2.1項下制備方法，得樣品溶液，間隔1h進(jìn)樣一次，按2.1項下色譜條件，進(jìn)樣7次，每次10μL，計算樣品中5-HMF的含量。結(jié)果顯示RSD=0.09%，符合中國藥典要求（RSD<2%），表明供試品在6h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 精密度實驗

取解幽膠囊混合均勻，精密稱取樣品0.0318g，按2.1項下色譜條件，進(jìn)樣6次，每次10μL，計算樣品中5-HMF的含量。結(jié)果顯示，RSD=0.79%，符合中國藥典要求（RSD<2%），表明儀器精密性良好。

2.6 中間精密度實驗

取解幽膠囊混合均勻，精密稱取樣品0.0318g，按2.1項下色譜條件，進(jìn)樣6次，每次10μL，計算樣品中5-HMF的含量。結(jié)果顯示，RSD=1.71%，符合中國藥典要求（RSD<2%），表明中間精密度良好。

2.7 重復(fù)性實驗

取解幽膠囊混合均勻，精密稱取樣品6份，每份0.0318g。按2.1項下色譜條件進(jìn)樣，每次10μL，計算樣品中5-HMF的含量。結(jié)果顯示，RSD=0.96%，符合中國藥典要求（RSD<2%），表明實驗重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率實驗

取解幽膠囊混合均勻，精密稱取9份，每份0.0318g，分為3組。每組按取樣量的50%、100%、150%分別加入5-HMF對照品，按2.2.2項下制備方法，得樣品溶液，按2.2.1項下色譜條件，進(jìn)樣9次，每次10μL，計算樣品中5-HMF的含量，結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，平均加樣回收率結(jié)果為99.93%，RSD=1.44%，符合中國藥典要求（RSD<2%），表明實驗可行性良好，該方法可用于解幽膠囊的含量測定。

表1 加樣回收率實驗結(jié)果

2.9 含量測定

取3個不同批次中試生產(chǎn)的解幽膠囊混合均勻，每批次稱取2份，每份0.0318 g，按2.2.1項下制備方法，得樣品溶液，按2.1項下色譜條件，進(jìn)樣10μL，計算樣品中5-HMF的含量，結(jié)果見表2。結(jié)果表明：解幽膠囊中5-HMF的平均含量為32.7310 mg/g，最低為32.5010mg/g。

表2 含量測定實驗結(jié)果

3.結(jié)論

在測定3批解幽膠囊樣品的含量時發(fā)現(xiàn)，解幽膠囊中5-HMF的平均含量為32.7310mg/g，最低為32.5010mg/g，考慮到實際生產(chǎn)過程中含量會有所不同，因此將解幽膠囊中的5-HMF的限量定為：解幽膠囊每包含5-HMF不得少于32mg。經(jīng)過方法學(xué)考察，解幽膠囊中5-HMF在2.5668～82.1376μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，回歸方程為y=70515x-20018（r=0.9999），加樣回收率為99.93%（RSD＜2%），說明本方法專屬性強，重現(xiàn)性好，可有效控制解幽膠囊的質(zhì)量，為以后解幽膠囊的進(jìn)一步開發(fā)利用及上市銷售提供了前期基礎(chǔ)。