醫院多重耐藥菌對常用消毒劑抗性的研究

林偉 劉雪玉 陳凌暉

隨著近年來臨床帶有侵入性性質的診斷、治療操作越來越多，其中大量使用了廣譜抗菌素，導致耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌等致病性耐藥菌日漸增多，由此成為院內患者發生感染的主要致病菌，一方面這些致病菌不僅會在病患之間交叉感染，另一方面也會由于附著在醫院物品表面而發生交叉感染，所以，在醫院內環境感染控制的工作中，醫院環境清潔也成為了十分重要的內容。日常消毒工作中，消毒不徹底、不恰當等，均會導致致病菌對消毒劑產生耐藥性[1]。不少學者在臨床領域中，均展開了與多重耐藥菌、消毒劑抗性等相關的研究，而這主要是因為多重耐藥菌感染后，會增加患者疾病治療的難度[2]。為了進一步明確醫院環境分離致多重耐藥菌情況，及其對醫院常用消毒劑的抗性、敏感性情況，為后期制定合理的消毒方案提供依據，研究內容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月2日—2018年1月30日于本院各臨床科室檢出的多重耐藥菌株：銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯桿菌以及鮑曼不動桿菌。標本采集來源于住院患者接觸醫院環境物體表面（病床被褥、床檔等）。

1.2 方法

在消毒劑的選擇上，使用常規的消毒劑，分醫務人員手部作為研究樣本，對所選取的樣本行細菌培養分離別為84消毒液、苯扎溴銨、碘伏消毒劑，上述三種常用的消毒劑在院內應有的有效時間為7 d。

檢測方法：在檢測過程中，采用中和劑進行鑒定試驗。試驗菌設為銅綠假單胞菌。84消毒液、碘伏中和劑為濃度為80.2%的吐溫，濃度為0.5%的含硫代硫酸鈉，濃度為0.2%的卵磷脂磷酸鹽緩沖液；苯扎溴銨的中和劑為濃度為80.3%的吐溫，濃度為0.5%的含硫代硫酸鈉，濃度為0.3%的卵磷脂磷酸鹽緩沖液。

菌懸液的制備方法：在新鮮固體瓊脂培養基的接種平板上，直接涂抹從現場采集到的菌株樣本，將培養基接種平板放置在溫度為37℃的培養基中，培養時間為24 h。將準備好的典型菌落接種MH肉湯取出，把接種的平板放在溫度為37℃的環境中培養24 h，同樣放置在溫度為37℃的培養基中，培養時間為6 h。6 h后，將其取出，借助活菌計數的方式，使其菌懸液的濃度達到1.0×107～1.0×109cfu/mL，進行備用。

對最小殺菌濃度進行測定：主要使用等比稀釋的方法，將最小的抑菌濃度無菌增長作為最低的稀釋液，選取容量為0.1 mL，將其加入到容量為0.9 mL的中和液中，10 min后取出0.2 mL的混懸液將劑量為0.2 mL的混懸液取出，然后將其接種到瓊脂的培養平板上，將其放在溫度為37℃的環境中培養48個小時，對培養的結果進行觀察。當無細菌生長的最低稀釋度，可看做是最小殺菌濃度值，該試驗需反復做3次。

1.3 觀察指標

觀察三種消毒劑對環境分離致病菌檢出率及各致病菌對消毒液抗性的影響。

1.4 統計學方法

使用SPSS 19.0統計軟件對統計數據進行處理，計數資料使用χ2檢驗，相關數值反映了實際頻數與理論頻數的吻合程度，P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 致病菌檢出情況

本次研究中分離出的耐藥菌包括30株銅綠假單胞菌，15株肺炎克雷伯桿菌，5株鮑曼不動桿菌。其中，銅綠假單胞菌檢出的30株，患者被褥檢出率最高為66.67%；肺炎克雷伯桿菌檢出的15株，患者被褥檢出率最高為46.67%；鮑曼不動桿菌檢出的5株，患者被褥檢出率最高為60.00%。見表1。

2.2 致病菌對消毒液最小抑菌與殺菌濃度分布

常用消毒劑對三種致病菌的最小抑菌與殺菌濃度分布情況，如表2所示。銅綠假單胞菌對84消毒液有抗性；肺炎克雷伯桿菌對苯扎溴銨有抗性；鮑曼不動桿菌對84消毒液和苯扎溴銨有抗性，P＜0.05，差異具有統計學意義。

3 討論

在醫院環境中，細菌、真菌等微生物較多[3]，目前，抗菌消毒劑耐藥菌株的種類不斷被創新，數量也呈現出明顯的上升趨勢[4-5]。臨床指出，院內致病菌的類型較多，不同的致病菌對不同的消毒液的抗性和敏感性，存在明顯的差異[6-7]。基于該研究成果的論述，本研究重點分析了醫院環境分離致多重耐藥菌對常用消毒劑抗性。

在本次研究中，通過分析醫院環境分離致多重耐藥菌對常用消毒劑的抗性，首先選取了致病耐藥菌，依據檢出的數量，銅綠假單胞菌最多，鮑曼不動桿菌最少。由此檢出率可以證實，目前醫院內環境中的銅綠假單胞菌在院內病原菌中，占比最高，是比較重要和常見的耐藥菌[8]。在此基礎上，從最小抑菌濃度和最小殺菌濃度方面，實現細菌對消毒劑抗性的檢測。本次研究結果顯示，銅綠假單胞菌在84消毒液檢測方面，分離株明顯高于標準株，說明銅綠假單胞菌對84消毒液有抗性，對其他兩種消毒菌有敏感性[9-10]。肺炎克雷伯桿菌在苯扎溴銨檢測方面，分離株明顯高于標準株，說明銅綠假單胞菌對苯扎溴銨有抗性，對其他兩種消毒液有敏感性。鮑曼不動桿菌在84消毒液隔和苯扎溴銨面的檢測，分離株明顯高于標準株，說明鮑曼不動桿菌對84消毒液隔和苯扎溴銨有抗性，對碘伏有敏感性[11-12]。由此可以看出，上述三種致病菌對不同消毒劑均有一定的抗性，需要重視醫院對對消毒劑的應用[13-14]。經過本次研究，本人認為日后醫院要進一步加強對環境表面的清潔工作，醫務人員要保持手清潔。

表1 院內三種多重耐藥致病菌檢出情況 [例（%）]

表2 常用消毒劑對三種致病菌的最小抑菌與殺菌濃度分布情況（株）

綜上所述，醫院環境有多重耐藥菌，不同耐藥菌對不同消毒劑產生的抗性和敏感性不同，建議臨床依據平時對耐藥菌的監測情況，適時調整消毒方案，做好醫院環境和醫護人員手部的清潔。