新疆吐魯番雌性子午沙鼠發情周期的實驗觀察*

沙塔娜提 史 深 廖力夫 孫亞偉 趙紅瓊 徐藝玫

(1.新疆農業大學， 烏魯木齊 830002)(2.新疆疾病預防控制中心， 烏魯木齊 830002)

子午沙鼠(Meriones.meridianus)屬于嚙齒目(Rodentia)，倉鼠科(Cricetidae)，沙鼠亞科(Gerbillinae)，小沙鼠屬(Meriones)[1]，為中等體型鼠，體長105～155 mm；因產地不同而存在較大的差異。體背深灰棕色，后足踵部有一點狀小塊裸露區。本實驗室繁殖的子午沙鼠是分布于吐魯番盆地的葉氏亞種(M.meridianusjei)[2-3]，體型明顯小于其它亞種。子午沙鼠具有耐干旱，性情溫和，易飼養繁殖等特點。自1996年實驗室繁殖以來，子午沙鼠在包蟲病動物模型[4]、戊型肝炎動物模型[5]等方面顯示出明顯的應用前景。根據我國實驗動物標準化的要求，新培育的子午沙鼠必須按實驗動物標準的要求，逐步完善其生物學特征的數據庫的建立。雖然子午沙鼠的實驗室繁殖已有近20多年的經驗，但有關子午沙鼠雌體發情周期缺乏詳細的資料。為掌握子午沙鼠雌體發情規律，本文擬用HE染色法對性成熟6月齡子午沙鼠進行發情周期的實驗觀察，為雌性子午沙鼠的科學合籠配對、種群繁殖和實驗動物標準化的完成，提供科學依據和數據庫。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

新疆吐魯番雌性清潔級6月齡子午沙鼠24只，由新疆自治區疾病預防控制中心實驗動物研究中心提供，本實驗在新疆疾病預防控制中心實驗動物研究中心進行(SYXK(新)2016-0001)，飼料為全價小鼠繁殖飼料(成都達碩實驗動物有限公司)，墊料為新疆自治區疾病預防控制中心實驗動物研究中心提供的紙屑墊料，子午沙鼠飼養室控制溫度18～24 ℃，相對濕度40%～70%，明暗交替14 h/10 h[6]。

1.2 試劑與儀器

蘇木精(北京索萊寶科技有限公司)，伊紅染液(上海吉至生化科技有限公司)，磷酸緩沖液(北京萬佳首化生物科技有限公司)，顯微鏡(Nikon MODEL ECLIPSE Ci-L TOKYO,JAPAN)。

1.3 實驗方法

1.3.1采樣：每天間隔4 h采樣一次，保定動物，移液器吸取20 μL生理鹽水數次沖洗陰道吸出陰道脫落細胞，涂于載玻片，自然干，進行HE染色后鏡檢及細胞分類計數。

1.3.2染色方法：HE染色法是將自然干燥的陰道涂片浸潤蘇木素染液染色5～10 min，流水沖洗，鹽酸乙醇分色數秒(根據涂片染藍色的深淺確定時間)。自來水浸泡返藍5 min，伊紅染液染色3 min，流水沖洗。干燥，鏡檢[7]。

1.3.3鏡檢及角化細胞分類計數：根據長爪沙鼠發情規律[8]，將觀察的圖片根據角化細胞分類計數法分不同的4個發情周期，分別為發情前期、發情期、發情后期、發情間期。

1.4 統計方法

2 結果

2.1 雌性子午沙鼠發情周期持續時間

從表1可知，子午沙鼠的發情周期為(4.7±1.2)d，其中發情前期(22.0±12.0) h，發情期(26.8±8.1) h, 發情后期(18.2±9.1) h，發情間期(50.0±38.2) h，占總發情周期的19.5%、23.8%、16.1%和44.3%。

表1 雌性子午沙鼠發情周期持續的時間Table 1 The duration of estrus cycle

2.2 子午沙鼠不同發情周期陰道脫落細胞比例變化和特征

圖1顯示，發情前期、發情期、發情后期和發情間期的各類上皮細胞形態和比例存在顯著性差異。細胞涂片也存在明顯的不同特征。結果見圖2。

圖1 子午沙鼠發情周期各時期陰道脫落細胞比例注：各發情周期有核上皮細胞，角化細胞，淋巴細胞都差異顯著(P<0.05)Fig.1 The proportion of vaginal exfoliated cells in Meriones.meridianus different stages of estrus Note：There were nucleated cells, cornified cells and lymphocytes in each estrous cycle (P<0.05)

圖2 雌性子午沙鼠各個發情周期涂片注: A.發情前期涂片 B.發情期涂片 C.發情后期涂片 D.發情間期涂片(HE，×100)Fig.2 Slides of M.meridianus each estrous phasesNote: A；Proestrus slide；B：Eestrus slide；C：Metoestrus slide；D：Dioestrus slide(HE，×100)

3 討論

目前在國內關于子午沙鼠生物學特性已有報道，但僅限于繁殖周期，生仔數目等內容[8-10]，有關子午沙鼠雌體發情規律的相關內容所知甚少，無法滿足今后的研究需要，因此有必要開展子午沙鼠發情規律的研究。

目前用于鑒定動物的發情期方法主要有巴氏染色法，唾液結晶法[11]，溫度檢測法[11]，瑞氏染色，HE染色，以及陰道外觀和陰道栓觀察法[12]。唾液結晶法，溫度檢測法，陰道外觀和陰道栓觀察法僅能粗略判斷發情周期，巴氏染色法染色步驟較繁雜，瑞氏染色雖然步驟簡單，易操作，但辨認細胞需要一定的經驗。HE染色法[7]操作簡易便捷，可快速觀察鑒定動物的陰道上皮細胞，是目前動物發情周期常用的方法。

本實驗用HE染色法觀察并記錄角化細胞的分類和數量，證實雌性子午沙鼠的發情周期為(4.7±1.2)d，發情周期分4個時期：發情前期(22.0±12.0) h，發情期(26.8±8.1) h，發情后期(18.2±9.1) h和發情間期(50.0±38.2) h。從實驗結果和已有文獻[7]看，HE染色法和間隔4 h采樣法可以判定雌性子午沙鼠發情的各個性周期。

陳立青等[8]每天采樣一次長爪沙鼠陰道材料，用瑞氏染色和HE染色法觀察陰道各類上皮細胞形態和比例，提供簡易、便捷、快速觀察鑒定長爪沙鼠陰道上皮細胞的方法，顯示長爪沙鼠的發情周期為(4.4 ±1.5) d，鄭鵬等[12]用陰道外觀和陰道栓每隔12 h采樣觀察昆明小鼠的發情，發情周期范圍大概在(4～5)d[13]，該方法操作人員需要一定的經驗才能熟練。本研究用間隔4 h采樣，結合HE染色法觀察了子午沙鼠的發情周期為(4.7±1.2) d，與長爪沙鼠和昆明小鼠的發情周期略有不同，但獲得的發情周期更準確，表明適當短的采樣間隔時間比間隔12 h或1 d的采樣獲得的發情周期更易準確。從本實驗早期預實驗結果看，間隔(4～8)h采樣對細胞數量和發情周期觀察影響有限，而太短的采樣間隔時間可能會對細胞數量和發情周期分析造成一些影響。

據陳立青等[8]報道，長爪沙鼠的發情前期、發情期、發情后期和發情間期分別占發情期的19.9%、24.4%、16.7%和45.5%，子午沙鼠各相應發情期為19.5%、23.8%、16.1%和44.3%，兩者數據非常接近，可能與同屬小沙鼠屬動物，遺傳上親緣較近有關。