假博路定的鑒別研究

滕海堂，金 鵬，胡 珀，魯素雅

淮安市食品藥品檢驗所，淮安223001

恩替卡韋（entecavir）（商品名為博路定）為美國百時施貴寶公司研制開發的一種抗乙肝病毒藥物，2005 年被批準在中國上市，用于治療慢性乙型肝炎（CHB），療效優于拉米夫定[1]。

“4+7”藥品集中采購[2]之前，博路定價格較高，某些不法分子以低價之名，通過互聯網向患者出售假冒“博路定”以牟取暴利。為順利開展博路定的日常打假和藥品流通監督，筆者建立了液質聯用輔以外觀鑒別的方法，能有效辨別博路定真、偽品。

1 儀器與藥品、試劑

1.1 儀器

梅特勒XS205DU 電子天平；Waters 高效液相色譜儀（美國Waters 公司）；薄層掃描儀、Agilent 6540 四級桿飛行時間質譜儀（美國安捷倫公司）。

1.2 藥品與試劑

博路定真品（批號AAZ5491，規格0.5 mg，中美上海施貴寶制藥有限公司）；博路定假品（批號AAN6855，規格0.5 mg，網購品）；恩替卡韋膠囊（批號180304，規格0.5 mg，正大天晴制藥有限公司）；阿德福韋酯片（批號201805092，規格10 mg，江蘇天士力帝業藥業有限公司）；對照品：恩替卡韋（純度93.6%，批號101248-201804），阿德福韋酯（純度98.9%，批號100576-201802），拉米夫定（純度99.7%，批號101007-201502），均購于中國食品藥品檢定研究院；富馬酸替諾福韋二吡呋酯（內標，純度98.0%）；富馬酸替諾福韋艾拉酚胺（內標，純度99.0%）。乙腈為色譜純；三氟乙酸、鹽酸為分析純。

2 方法與結果

2.1 藥品外觀性狀鑒別[3]

真、偽品外觀的主要區別在于：內包裝鋁塑板的鋁膜上，真品商品名處平視呈暗藍色、斜視呈亮藍色防偽變色光，企業標識在365 nm 紫外燈下呈明顯的熒光；偽品鋁膜的商品名處無防偽變色光，企業標志也無熒光。

2.2 實驗室驗證

2.2.1 液相色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX Exlend Plus C18（2.1mm×50mm，1.8μm）；以0.02mol·L-1乙酸銨溶液（含0.1%甲酸）為流動相A，乙腈為流動相B（梯度洗脫：0～5 min，99%A；5～10 min，99%A→20%A；10～11 min，20%A）；檢測波長：254 nm；柱溫：35 ℃；流速：0.3 mL·min-1。

2.2.2 質譜條件 電噴霧離子源（ESI），正離子檢測，毛細管電壓：4000 V，錐孔電壓：65 V，離子源溫度：350 ℃，干燥氣流速：10 L·min-1，掃描范圍：50～1000 m/z，掃描方式：一級質譜全掃描、二級質譜全掃描，碰撞能量：10～35 V。

2.2.3 測定方法 分別取對照品恩替卡韋、阿德福韋酯各約20 mg，置100 mL 量瓶中，加甲醇20 mL 溶解，放冷后加入0.01 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。精密量取5 mL，置100 mL 量瓶中，加0.01 mol·L-1鹽酸溶液至刻度，搖勻，即得。

取偽品1 片研磨成粉，精密稱定，置50 mL 量瓶中，加0.01 mol·L-1鹽酸溶液適量，超聲溶解，放冷，0.01 mol·L-1鹽酸定容至刻度，搖勻，取溶液適量，以3 000 r·min-1離心10 min，取上清液，濾過，即得。

精密量取對照品溶液和偽品溶液各1 μL，注入液-質聯用儀，記錄液相色譜圖（見圖1）和一、二級質譜圖（見圖2）。

2.2.4 檢測結果 從圖1、圖2 看出，在博路定偽品色譜中，檢出與阿德福韋酯對照品色譜保留時間、一級質譜圖和二級質譜圖一致的色譜峰（見表1）。

表1 阿德福韋酯對照品和博路定偽品色譜的保留時間及一級、二級質譜特征

2.2.5 檢測篩查其他抗乙肝藥物 以上述方法為基礎建立質譜同時鑒別幾種抗乙肝藥物方法，結果如圖3、圖4。

由以上幾種抗乙肝藥的液相色譜圖、質譜圖，可在一定范圍內與偽品比對，明確其是何種成分。

3 討論

藥品外觀鑒別是現階段用來鑒別偽藥的初始方法，包括內外包裝、防偽特征和藥品性狀等。這種方法相對比較粗淺簡單，還要依賴于患者長期服用的這種藥品，且對該藥外觀有著清楚的了解方可感知。筆者發現，現有博路定偽藥外包裝真假無明顯差異，而內包裝差異性很大，很可能制假者從患者等途徑回收的外包裝和說明書，然后再壓制普通包衣片，實現造假源頭的第一步。但是內包裝防偽標識為企業核心技術，生產企業因涉密未公開，這也是制假者的最大缺陷漏洞。因此，患者、藥品監督人員及流通單位人員可以利用外觀初步辨別真、偽藥品。

近紅外光譜法[4]是十分常見的快速檢驗方法，其最大的優勢為取樣少、無損傷，不僅能夠檢查藥品制劑中活性成分，還能檢測輔料不同的形態以及種類，如原料藥、蛋白質、中草藥、膠囊、片劑、分散片等[5]。同品種、同劑型因不同廠家生產工藝及輔料差異而呈現出不同NIR 光譜。目前國內恩替卡韋片主要由中美上海施貴寶制藥有限公司和北京百奧藥業有限責任公司生產，本文只收集到前者的博路定（恩替卡韋片），由于批次少，廠家少，故未能建立有效博路定近紅外相關系數模型。有待國家局藥品近紅外一致性檢驗模型庫數量增大、覆蓋面進一步完善，滿足基層藥監快檢需求。

液質聯用儀能夠精準地定性定量分析待測物，尤其未知樣品。對未知物通過質譜解析快速判定分子量和分子式，有利于定位可能的化合物。通過比對可能的對照譜圖，具體明確添假、摻假成分。本文僅研究5 種抗乙肝藥物，有老藥，也有目前一線藥物，還有未上市新藥，具有典型性，但未能囊括抗乙肝類藥物，有待進一步擴大范圍，提高檢驗覆蓋面。