乳腺癌組織中MTSS1和uPA的表達及其與轉移相關性研究

王合兵，陳昌明，肖 堅，陳文新，楊炳林

福建醫科大學附屬三明第一醫院，福建 三明 365000

乳腺癌是威脅女性健康的最重要的疾病之一，其發病率呈現逐年上升的趨勢，近年來，隨著乳腺癌診療技術的不斷發展，乳腺癌發生、發展、轉移的分子層面已經成為研究的重點和熱點。轉移抑制因子1(metastasis suppressor 1，MTSS1)基因與尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase plasmino-gen activator， uPA)與乳腺癌的發生、發展、浸潤轉移有著密切的關系［1］。目前關于 MTSS1在結腸癌、膀胱癌、前列腺癌及肝癌等腫瘤中的表達情況已有報道，但MTSS1在乳腺癌中的表達及意義如何，國內外相關報道較少［2］。uPA在幾乎所有惡性腫瘤中高表達并發揮積極的腫瘤進展和轉移中的重要作用［3］。本研究采用免疫組織化學法觀察MTSS1、uPA在乳腺癌組織及癌旁組織的表達水平，并檢測二者在同時期手術的通過隨訪發現轉移的患者其第一次術后病理蠟塊中的表達水平，并探討其與乳腺癌轉移的相關性，為乳腺癌的臨床診療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將福建醫科大學附屬三明第一醫院乳腺科2009年8月1日- 2012年12月31日間手術切除的乳腺癌標本80例作為研究組，選取這些患者的癌旁組織標本80例作為對照組，選取30例復發轉移患者的第一次術后病理標本組織作為復發轉移組，患者全部為女性，年齡38～70歲，平均年齡（51.32±3.82）歲，其中3例淋巴轉移。患者手術前均為進行放療、化療、免疫治療治療史。

1.2 試劑選擇及標本處理

兔抗人MTSS1單克隆抗體、通用型生物素標記的二抗均購自北京博奧森生物技術有限公司;濃縮型DAB試劑盒、多聚賴氨酸購自北京中杉金橋生物技術有限公司。兔抗人uPA多克隆抗體購自武漢博士德生物工程有限公司，抗體稀釋濃度為1∶100。免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。乳腺癌標本及癌旁組織經10%福爾馬林固定、常規石蠟包理，4μm厚連續切片，供常規蘇木精-伊紅染色和免疫組化染色。采用Envision二步法，參照檢測試劑盒說明書進行，用已知乳腺癌陽性片作陽性對照。

1.3 方法

用常規蘇木精-伊紅染色和免疫組化染色，嚴格按照試劑盒說明操作，用已知乳腺癌陽性片作陽性對照，結果陽性；以PBS代替一抗作陰性對照，結果陰性。

1.4 效果判定評價指標

MTSS1以細胞質內出現黃色或棕黃色顆粒為陽性表達。每張切片在高倍鏡下隨機選取5個視野，按染色強度及陽性細胞數占腫瘤細胞總數的百分比綜合計分［4］。染色強度：無色計為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞數:小于總數的5%時計為0分，5%～25%＜為1分，25%～50%為2分，＞50%為3分。染色強度得分與陽性細胞數得分相乘，0～1分為陰性，2分為陽性(+)性。uPA蛋白陽性表達主要分布于細胞質，以細胞漿出現黃色或棕黃色顆粒為陽性表達。按腫瘤細胞中陽性比例計算百分率，陽性細胞＜10%記為（-）；陽性細胞數在10%～25%記為（+）；陽性細胞數在25%～50%記為（++）；陽性細胞數＞50%記為（+++）。

1.5 統計學方法

數據采用SPSS 17.0軟件進行統計分析，計數資料用例數和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，并行Spearman相關分析；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MTSS1在乳腺癌、癌旁組織、復發轉移組織中的表達

MTSS1在乳腺癌陽性染色多在細胞膜及細胞質內，為棕黃色，而在細胞核內無陽性表達。

圖1 MTSS1在乳腺癌、癌旁組織、復發轉移組織中的表達

MTSS1在正常組織的表達僅有少數為弱陽性，大多數為陰性。研究組乳腺癌患者中MTSS1表達陽性率高達86.25%（圖1-1），在對照組癌旁組織表達的陽性率為56.25%（圖1-3），在復發轉移組表達的陽性率為46.47%（圖1-4），乳腺癌表達陽性率明顯高于對照組高于轉移復發組，差異具有統計學意義（P＜0.05），對照組與復發轉移組差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 MTSS1在不同乳腺組織中的表達情況

2.2 MTSS1表達與乳腺癌轉移的關系比較

MTSS1在有復發轉移的乳腺癌組織中的表達水平明顯低于無轉移的原發乳腺癌組織，差異有統計學意義(χ2=28.4091，P＜0.05)，見表2。

表2 MTSS1表達與乳腺癌轉移的關系

2.3 uPA在乳腺癌、癌旁組織、復發轉移組織中的表達

uPA蛋白在不同組織中的表達具有明顯的規律性，其陽性率表達轉移復發組高于乳腺癌研究組高于癌旁組織對照組，且各組間比較差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3 uPA在乳腺癌、癌旁組織、復發轉移組織中的表達

2.4 uPA表達與乳腺癌轉移的關系比較

uPA在乳腺癌轉移組和非轉移組中的陽性率分別為93.94%和51.95%，差異具有統計學意義（P＜0.05）。

表4 uPA表達與乳腺癌轉移的關系比較

2.5 MTSS1蛋白與uPA蛋白陽性表達之間的相關性

在121例MTSS1陽性表達組織中只有22例uPA陽性表達，69例MTSS1陰性表達中有46例uPA陽性表達，進行Spearman相關性分析，R=-0.9015，P＜0.05，MTSS1蛋白與uPA蛋白在乳腺癌的浸潤、轉移的過程中表達呈明顯的負相關性。見表5。

表5 MTSS1蛋白與uPA蛋白陽性表達之間的相關性 例

3 討論

3.1 MTSS1蛋白表達與乳腺癌的關系

本研究發現，MTSS1在乳腺癌組織中的表達陽性率明顯高于正常乳腺組織和癌旁組織高于復發轉移組織，提示MTSS1可能在乳腺癌的發生發展中起重要作用，在轉移的乳腺癌組織中的表達水平明顯低于局限性乳腺癌組織［5-6］，提示MTSS1與乳腺癌的侵襲轉移相關，這與最初發現的MTSS1作為潛在的腫瘤轉移抑制基因的功能相符，說明在乳腺癌細胞中MTSS1充當著控制轉移的角色，所以乳腺癌在發生發展的過程中起著重要的作用，同時對癌細胞轉移起到很好地抑制作用。

3.2 uPA蛋白與乳腺癌的關系

研究表明［7］，與正常組織相比uPA基因在肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌的組織中呈現較高陽性表達，尤其是在乳腺癌的轉移復發病灶的組織中呈現很好的陽性表達。證實uPA基因在腫瘤浸潤和轉移過程中扮演重要角色［8］。本實驗檢測uPA蛋白在癌旁組織、乳腺癌組織和轉移復發組織的陽性表達差異具有統計學意義，推斷uPA參與了乳腺癌的發生發展，并且在乳腺癌的轉移過程中起到了重要作用，與文獻資料相符［9］。

3.3 MTSS1蛋白與uPA蛋白的相關性

迄今尚未發現文獻中有關MTSS1蛋白與uPA蛋白的相關性的報道，本實驗顯示，在121例MTSS1陽性表達組織中只有22例uPA陽性表達，69例MTSS1陰性表達中就有46例uPA陽性表達，提示MTSS1蛋白與uPA蛋白在乳腺癌的浸潤、轉移的過程中表達呈明顯的負相關性，MTSS1蛋白與uPA蛋白的共同作用還有待進一步研究。

綜上所述，乳腺癌患者中MTSS1表達陽性率高于癌旁組織和轉移復發組織，在乳腺癌的發生、發展過程中起到了重要的作用，但是對于腫瘤的浸潤轉移起到了重要的抑制作用。乳腺癌患者uPA表達陽性率高于癌旁組織，但是低于轉移復發組織，提示在乳腺癌的發生、發展以及浸潤轉移的過程中均起到重要的作用。通過研究，MTSS1蛋白與uPA蛋白具有明顯的負相關性。