電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）測(cè)定兩性霉素B中的鐵

閆秀麗（上海浦公檢測(cè)技術(shù)股份有限公司，上海201202）

兩性霉素B，中文別名有，二性霉素B、節(jié)絲霉素B、兩性霉素-B、兩性霉素乙、蘆山霉素、廬山霉素、異性霉素。為橙黃色針狀或柱狀結(jié)晶，無臭無味。不溶于水、無水乙醇、醚、苯及甲苯，微溶于DMF，溶于DMSO。mp.＞443K（溶解）。本品有引濕性，在日光下易破壞失效。兩性霉素B為多烯類抗真菌抗生素，通過影響細(xì)胞膜通透性發(fā)揮抑制真菌生長(zhǎng)的作用。臨床上用于治療嚴(yán)重的深部真菌引起的內(nèi)臟或全身感染。

兩性霉素B是從鏈絲菌培養(yǎng)液中分離得到的多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌藥，為全身性深部真菌感染的首選藥。兩性霉素B原料藥穩(wěn)定性較差，研究表明鐵含量高是影響其穩(wěn)定性的主要因素，因此鐵含量的控制是兩性霉素B雜質(zhì)控制的重要指標(biāo)。

兩性霉素B國內(nèi)外都有生產(chǎn)，且技術(shù)成熟，但生產(chǎn)藥劑的純度及穩(wěn)定性有差異，這主要是成品藥劑的純度影響了藥劑的穩(wěn)定性，藥劑中的雜質(zhì)來源有生產(chǎn)工藝中使用的管道，生產(chǎn)場(chǎng)所的環(huán)境及試劑、原料的純度等，存在于藥劑中的雜質(zhì)金屬元素會(huì)和兩性霉素B形成螯合物，使藥劑失活，穩(wěn)定性下降，導(dǎo)致藥效下降。

現(xiàn)在對(duì)兩性霉素B中鐵元素的測(cè)定來控制藥劑的穩(wěn)定性，著手各生產(chǎn)環(huán)節(jié)，控制雜質(zhì)的慎入。

文章研究建立用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）法測(cè)定兩性霉素B中鐵元素，具有檢出限低、靈敏度高、簡(jiǎn)便、高效、快捷等優(yōu)越性。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

（1）儀器：微波消解儀（上海屹堯科技有限公司，型號(hào)WX8000）；美國PE公司ICP-MS Nexion 300X，包括同心霧化器、漩流霧室、石英矩管等。

（2）試劑：鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液1000mg/L±2%；鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液中間液(10.00mg/L）：移取上述鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000mg/L）1.00mL 于100.0mL 容量瓶中，用5%（v/v）硝酸溶液定容至刻度，計(jì)算得濃度為10.00mg/L。

1.2 儀器工作條件

表1 微波消解兩性霉素B的參數(shù)設(shè)定Tab 1 Microwave digestion of amphotericin B parameter setting

表2 ICP-MS 的儀器操作條件及參數(shù)Tab 2 Icp-ms instrument operating conditions and parameters

1.3 測(cè)定方法

（1）樣品處理 稱取0.5g 經(jīng)粉碎混合均勻樣品于微波消解罐中，加入5mL硝酸，旋緊罐蓋，放入微波消解儀中，按照表1微波消解儀參數(shù)設(shè)定，消解。冷卻后取出，定容至50mL 容量瓶中，混勻備用。

（2）分析步驟 分別移取鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液中間液(10.00mg/L）0.00、0.05、0.10、0.20、0.40和0.50mL于50mL的容量瓶中，用5%（v/v）硝酸溶液定容至刻度，得濃度為0.0，10.0，20.0，40.0，80.0和100μg/L 的鐵元素標(biāo)準(zhǔn)濃度系列，按表2儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定，確立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果

2.1 同位素的選擇

同位素的選擇應(yīng)按照豐度大、干擾小、靈敏度高的原則最大程度地避免同量易位素與被分析的質(zhì)譜重疊，鐵的測(cè)定同位素主要有54Fe、56Fe、57Fe，58Fe，其中54Fe、56Fe受Ar-O干擾，58Fe豐度低，所以也不選用，57Fe豐度高，不受Ar-O干擾，故選用。

2.2 內(nèi)標(biāo)元素的選擇

為了消除機(jī)體效應(yīng)、接口效應(yīng)和信號(hào)漂移，由于與57Fe質(zhì)量最接近的內(nèi)標(biāo)元素為Sc，且Sc元素的豐度為100%，實(shí)驗(yàn)選用Sc內(nèi)標(biāo)元素來校正基體效應(yīng)和接口效應(yīng)對(duì)測(cè)定結(jié)果的干擾，結(jié)果表明Sc 內(nèi)標(biāo)溶液有效的調(diào)節(jié)了因檢測(cè)時(shí)間延長(zhǎng)所導(dǎo)致的信號(hào)漂移，對(duì)測(cè)定兩性霉素B中鐵元素的基體干擾進(jìn)行了有效補(bǔ)償。

2.3 方法的線性關(guān)系及檢出限

在0.00～100μg/L范圍內(nèi)，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)行測(cè)定，每一濃度重復(fù)測(cè)定3次，取平均值，得校正曲線的相關(guān)系數(shù)在0.9985～0.9995之間。

連續(xù)測(cè)定11次樣品空白溶液的濃度，得其標(biāo)準(zhǔn)偏差SD，根據(jù)公式得檢出限（LOD）=3SD，按上述稱樣量及定容體積，得出方法檢出限（mg/kg）為：0.05。

2.4 方法的精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)

稱取0.5g 混合均勻樣品于微波消解罐中，加入5mL 硝酸，同時(shí)加入10.00mg/L 濃度的鐵標(biāo)準(zhǔn)中間液0.05mL、0.20mL、0.50mL，即鐵元素質(zhì)量為0.50μg、2.00μg、5.00μg。旋緊罐蓋，放入微波消解儀中消解。冷卻后取出定容至50mL 容量瓶中，混勻備用。每個(gè)添加水平平行7 次，按上述儀器條件分3 天進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定結(jié)果如表3：

表3 精密度和準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)Tab 3 Precision and accuracy experiments

其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在4.84%-6.44%，加標(biāo)回收率范圍為86.0%-108.5%，說明方法的精密度和準(zhǔn)確度都很好。

3 結(jié)語

本研究通過電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定兩性霉素中的鐵元素，來有效評(píng)估兩性霉素的穩(wěn)定性及其純度，對(duì)于藥劑的存儲(chǔ)周期有一定的作用，同時(shí)對(duì)同位素及內(nèi)標(biāo)元素進(jìn)行了選擇；此法操作方便簡(jiǎn)單，定性定量準(zhǔn)確，實(shí)用性強(qiáng)，適合兩性霉素中鐵元素的測(cè)定。