有汗型外胚層發育不良胚胎植入前遺傳學檢測1例

王喜良，郝冬梅，張金艷，侯開波，于月新

(北部戰區總醫院生殖醫學中心，沈陽 110016)

患者，女，出生時全身無體毛、睫毛及頭發，雙手及雙腳皮膚過度角化，指甲發育不良，無汗毛孔，正常排汗。有汗型外胚層發育不良(hidrotic ectodermal dysplasia，HED)家族史，基因型為GJB6(NM_006783.4，c.263C>T雜合突變，p.A88V)。2014年結婚，婚后同居生活，性生活正常，2016年孕5月行產前診斷，因胎兒為受累胎兒而引產。2017年來院要求行胚胎植入前遺傳學檢測(PGT)。

抽取患者夫婦及患者父母外周血，提取DNA，高通量測序。以GJB6基因(NM_006783.4 chr13：20796101-20806534反向轉錄)編碼區及外顯子-內含子交界為目標區域，并在基因上下游選擇若干單核苷酸多態性(SNP)位點作為遺傳標記，檢測SNP位點基因型，選擇其中相應位點構建單體型，進行連鎖分析。采用短效長方案進行促排卵，獲得的卵子采用卵胞漿內單精子注射(ICSI)方式人工授精，胚胎培養，發育到囊胚時活檢4～10個滋養層細胞，活檢后的胚胎采用玻璃化冷凍法進行冷凍保存。對活檢的滋養層細胞采用多重置換擴增方法(MDA)進行全基因組擴增。采用高通量測序技術，對染色體非整倍體、微缺失、微重復進行檢測，分辨率為4 Mb。以GJB6基因編碼區為目標區域，并在基因上下游選擇若干SNP位點作為遺傳標記，檢測SNP基因型，選擇其中相應位點構建單體型。采用一代測序技術對致病變異位點進行驗證。選擇正常胚胎行復蘇移植。妊娠16～18周抽取羊水進行一代測序驗證。

通過SNP連鎖成功構建了單體型。患者促排獲得了3個卵子，ICSI后均正常受精，2個胚胎發育到囊胚，進行活檢。1枚胚胎非整倍體檢測結果異常，1枚胚胎非整倍體檢測結果正常。對非整倍體結果正常的胚胎進行單體型分析，結果正常。進行一代驗證，結果正常，證明胚胎未攜帶致病變異(具體檢測結果見表1)。

表1 胚胎檢測結果

胚胎移植后第14天血HCG值為359 U/L，4周見胎心、胎芽，獲得臨床妊娠。妊娠16周抽取羊水，產前診斷結果顯示胎兒未攜帶致病變異。妊娠40+2周，剖宮產獲得一名女嬰，體重3 200 g，體檢未見明顯異常。

討 論

人體皮膚由胚胎的兩個胚層發育而來，其中外胚層發育成表皮及附屬器官。外胚層發育不良可導致外胚層來源的組織結構或功能異常。HED(OMIM 129500)為一種常染色體顯性遺傳病[1]，臨床表現主要為毛發缺陷、甲營養不良和掌跖角化三聯征，這些癥狀會對患者的身體和心理造成嚴重的不良影響[2-4]。

該病的致病基因為GJB6(gap junction beta 6)，編碼縫隙連接蛋白Cx30。Cx30為一種縫隙連接通道蛋白，其變異可引起多種皮膚和其他器官的疾病[5-6]。目前發現的GJB6致病變異有4種，包括G11R、V37E、D50N和A88V，這4種變異都會造成氨基酸替換[7]。本病例中的患者經檢測即為p.A88V變異。研究表明，p.A88V的改變可以使角質形成細胞內的ATP滲出到細胞外的基質中，ATP水平增高作為一個旁分泌信號可促進角質形成細胞的增生和分化，從而引起HED的相應臨床表現[8]。

常染色體顯性遺傳病行產前診斷有一半的患者要行流產或引產，會對孕婦及家庭帶來極大的傷害。近年來隨著輔助生殖技術的發展，PGT技術逐漸應用。PGT使用分子遺傳學技術，在體外培養的胚胎階段即可獲得胚胎的遺傳特性，然后挑選不攜帶已知致病變異的胚胎移植。

本病例采用PGT技術成功阻斷了1例HED患者的垂直傳遞，幫助患者家庭生育了一名健康的孩子，對家庭和社會都具有非常大的意義。