羊水過(guò)少對(duì)妊娠結(jié)局及胎盤(pán)組織中Cx43、Caspase7蛋白表達(dá)的影響

姚瑾，滕穎

(沈陽(yáng)市第五人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽(yáng) 110000)

羊水是孕婦子宮羊膜腔內(nèi)的液體，是胎兒在整個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的重要環(huán)境和成分，對(duì)維持胎兒在子宮內(nèi)環(huán)境的新陳代謝和水的平衡及健康生長(zhǎng)發(fā)育具有重要作用。妊娠晚期羊水少于300 ml，被稱(chēng)為羊水過(guò)少，是圍產(chǎn)期常見(jiàn)并發(fā)癥，對(duì)妊娠維持、分娩母嬰及臨床結(jié)局影響較大[1]。羊水量過(guò)少的影響因素較多，目前其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。

縫隙連接蛋白43(Cx43)是細(xì)胞通道蛋白家族成員之一，在水、離子及電解質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)、循環(huán)中發(fā)揮重要作用[2]。Caspases是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一組存在于胞質(zhì)溶膠中的結(jié)構(gòu)上相關(guān)的半胱氨酸蛋白酶，其中半胱氨酸肽酶7(Caspase7)是細(xì)胞凋亡因子家族成員[3]。目前臨床對(duì)于Cx43、Caspase7與羊水過(guò)少的研究較少，本研究旨在研究羊水過(guò)少對(duì)母嬰妊娠結(jié)局的影響，并檢測(cè)胎盤(pán)組織中Cx43、Caspase7蛋白的表達(dá)，分析羊水過(guò)少與Cx43、Caspase7蛋白之間的關(guān)系和作用機(jī)制，為羊水過(guò)少的圍生期并發(fā)癥的防控及發(fā)生機(jī)制提供依據(jù)。

資料與方法

一、一般資料

1.研究對(duì)象：選取本院2016年1月至2018年12月診斷為羊水過(guò)少的孕產(chǎn)婦110例為研究對(duì)象(研究組)。入選標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)B超檢查羊水指數(shù)(AFI)≤5，或者最大羊水暗區(qū)的垂直徑(AFV)≤2 cm，單胎，孕周37～41周。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有婦科腫瘤、妊娠期高血壓、妊娠糖尿病、嚴(yán)重貧血、吸煙及濫用藥物史者。選取同期羊水正常產(chǎn)婦110例作為對(duì)照組。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批通過(guò)，所有患者知情同意并均簽署知情同意書(shū)。

二、研究方法

1.材料和儀器：兔Cx43多克隆抗體(購(gòu)自武漢博士德公司)，重組Caspase7兔單克隆抗體(購(gòu)自丹麥Dako公司)，DAB顯色試劑盒(購(gòu)自北京中山公司)，Cx43、Caspase7一抗工作濃度均為1∶50。顯微鏡與照相機(jī)為日本OLIMPUS公司產(chǎn)品。

2.免疫組化：取兩組產(chǎn)婦產(chǎn)后的胎盤(pán)組織，用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋切片，常規(guī)S-P免疫組化二步法，DAB顯色，脫水，透明和封片[4]。

3.結(jié)果判斷：顯微鏡下觀察Cx43、Caspase7蛋白的表達(dá)水平，每個(gè)樣本選擇5個(gè)細(xì)胞清晰的高倍視野(×400)觀察。免疫組化判斷標(biāo)準(zhǔn)：Caspase7、Cx43蛋白的陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)。根據(jù)著色強(qiáng)度(無(wú)色、淡黃色、棕黃色、褐色)分別賦分0分、1分、2分、3分；根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例(≤10%、11%～50%、51%～75%、>75%)分別賦分1分、2分、3分、4分。兩種積分相乘評(píng)估陽(yáng)性表達(dá)率，分為陰性(總分<3分)和陽(yáng)性(≥3分)，并按照陽(yáng)性程度分為“+”(3～5分)、“++”(6～9分)、“+++”(>9分)[5]。

4.研究指標(biāo)：記錄兩組孕產(chǎn)婦圍生期結(jié)局，觀察新生兒不良反應(yīng)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

1、兩組一般資料比較

研究組共納入110例患者，平均年齡(26.5±7.6)歲，孕周(39.5±3.1)周，產(chǎn)前體重(74.32±8.09)kg。同期選取的110例對(duì)照組，平均年齡(26.6±7.9)歲，孕周(39.4±3.2)周，產(chǎn)前體重(74.47±8.36)kg。兩組產(chǎn)婦的臨床基線(xiàn)資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

二、兩組母嬰圍生期結(jié)局比較

研究組的剖宮產(chǎn)率及引產(chǎn)率均顯著高于對(duì)照組，同時(shí)其產(chǎn)程異常發(fā)生率也顯著高于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。此外，研究組新生兒不良結(jié)局總發(fā)生率顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

三、兩組產(chǎn)婦胎盤(pán)Cx43、Caspase7蛋白表達(dá)結(jié)果比較

研究組產(chǎn)婦胎盤(pán)Cx43蛋白陽(yáng)性率、陽(yáng)性程度及陽(yáng)性評(píng)分均顯著低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3、圖1A)；研究組產(chǎn)婦胎盤(pán)Caspase7蛋白陽(yáng)性率、陽(yáng)性程度及陽(yáng)性評(píng)分均顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表4、圖1B)。

表1 兩組產(chǎn)婦生產(chǎn)方式和產(chǎn)程情況比較 (%)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

表2 兩組新生兒不良結(jié)局比較[n(%)]

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

表3 胎盤(pán)Cx43蛋白表達(dá)結(jié)果比較[(±s)，n(%)]

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

表4 胎盤(pán)Caspase7蛋白表達(dá)結(jié)果比較[(±s)，n(%)]

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

圖1 胎盤(pán)組織中Cx43、Caspase7蛋白免疫組化分析(×400)

討 論

羊水是維系胎兒生存的要素之一，對(duì)于穩(wěn)定子宮溫度環(huán)境、緩沖腹部外來(lái)壓力及提供胎兒內(nèi)環(huán)境均具有重要作用。孕產(chǎn)婦正常妊娠，隨著孕周的增加羊水量逐漸增多，孕38周時(shí)可達(dá)1 000 ml，足月時(shí)一般約為800 ml左右。在妊娠期間，孕婦羊水過(guò)多或過(guò)少都屬于異常情況，其中以羊水過(guò)少居多，影響孕產(chǎn)婦母嬰結(jié)局。

懷孕過(guò)程中，胎兒肺泡吸入適量羊水有助于其膨脹和肺的發(fā)育，使胎兒發(fā)生宮內(nèi)窘迫的幾率減少，而羊水過(guò)少增加了胎兒宮內(nèi)窘迫的發(fā)生幾率。在孕婦待、臨產(chǎn)過(guò)程中出現(xiàn)宮縮時(shí)，羊水過(guò)少胎兒及臍帶容易受壓引起胎兒宮內(nèi)窘迫、新生兒窒息等，影響分娩方式。羊水過(guò)少導(dǎo)致陰道試產(chǎn)過(guò)程中胎兒對(duì)宮縮變化的耐受力下降，增加孕婦的剖宮產(chǎn)率[6]。胎兒可以通過(guò)羊水獲取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，羊水量會(huì)隨著妊娠時(shí)間而改變，而羊水過(guò)少可對(duì)胎兒生長(zhǎng)、發(fā)育產(chǎn)生嚴(yán)重危害，導(dǎo)致胎兒生長(zhǎng)發(fā)育受到限制，低體重兒增加[7]，這也可能就是本研究中足月羊水過(guò)少新生兒不良結(jié)局中新生兒低體重兒發(fā)生率高的原因。此外，本研究中研究組羊水糞染和絨毛膜羊膜炎均顯著高于對(duì)照組，這可能是羊水過(guò)少會(huì)降低分娩時(shí)羊水的沖洗能力，造成胎糞或細(xì)菌感染引起的[8]。本次研究結(jié)果顯示，研究組產(chǎn)婦剖宮產(chǎn)、產(chǎn)程異常、新生兒不良結(jié)局總發(fā)生率均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

本次研究結(jié)果顯示，研究組產(chǎn)婦胎盤(pán)Cx43蛋白陽(yáng)性表達(dá)顯著降低，而Caspase7蛋白陽(yáng)性表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.05)，可能在影響羊水過(guò)少的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。Cx是構(gòu)成連接子的基本結(jié)構(gòu)單位，廣泛地存在于哺乳動(dòng)物的器官、組織中。Cx43不僅有細(xì)胞通訊功能，還在上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞之間存在廣泛的縫隙連接，在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，其異常表達(dá)與多種婦產(chǎn)科疾病也存在密切關(guān)系[9]。Cx43蛋白的增加能夠有效促進(jìn)水或者離子及電解質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)，提高液體的循環(huán)速度。Cx43蛋白低表達(dá)時(shí)，細(xì)胞間縫隙連接的數(shù)量下降，影響水通道蛋白的數(shù)量及生理活性。婦女孕期，Cx43蛋白的下調(diào)影響胎盤(pán)的血流灌注量，影響到水、電解質(zhì)及離子等的代謝及轉(zhuǎn)運(yùn)，使羊水形成減少；也影響胎兒尿量的形成等，使羊膜層上皮細(xì)胞吸收水鈉等電解質(zhì)的作用加強(qiáng)，進(jìn)而減少羊水總量，導(dǎo)致羊水過(guò)少的發(fā)生[10-11]。郭丹鳳等[12]在研究中將產(chǎn)婦分為羊水過(guò)少組、羊水正常組，結(jié)果顯示，胎膜、胎盤(pán)組織的Cx43蛋白表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，均與妊娠晚期的羊水量呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與本次研究結(jié)果相吻合。

Caspase7是細(xì)胞凋亡因子家族成員，是細(xì)胞凋亡進(jìn)程的重要執(zhí)行分子，參與細(xì)胞的氧化應(yīng)激或程序性凋亡等病理過(guò)程。Caspase7的過(guò)表達(dá)可導(dǎo)致胎盤(pán)血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷，進(jìn)而影響通過(guò)胎盤(pán)的血流灌注量、胎盤(pán)的濾過(guò)功能及水、電解質(zhì)代謝功能，降低羊水形成的速度，導(dǎo)致羊水形成障礙。Caspase7的過(guò)表達(dá)也增加了上皮細(xì)胞萎縮、壞死或者程序性凋亡的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致胎盤(pán)絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞或者合體滋養(yǎng)細(xì)胞功能的退化，可影響葉狀絨毛膜或者胎膜上皮細(xì)胞的生理作用，導(dǎo)致羊水循環(huán)功能的下降，羊水的形成及羊水量受到一定影響[13-14]。李小琴等[15]分別檢測(cè)羊水過(guò)少、羊水過(guò)多、羊水量正常產(chǎn)婦臍帶血Caspase7蛋白水平，結(jié)果顯示，產(chǎn)婦羊水過(guò)少或過(guò)多者臍帶血Caspase7蛋白水平均呈現(xiàn)高表達(dá)，認(rèn)為與羊水量的異常有關(guān)，與本次研究結(jié)果相一致。Caspase7蛋白高表達(dá)可造成胎盤(pán)血管的氧化應(yīng)激反應(yīng)，Cx43蛋白低表達(dá)會(huì)影響縫隙連接蛋白的活性，二者均導(dǎo)致羊水的減少，但Caspase7蛋白與Cx43蛋白之間的相互作用分子機(jī)制仍待后續(xù)研究。

綜上所述，羊水過(guò)少產(chǎn)婦陰道順產(chǎn)率降低，產(chǎn)婦產(chǎn)程異常、新生兒不良結(jié)局總發(fā)生率上升；產(chǎn)婦胎盤(pán)Cx43蛋白陽(yáng)性表達(dá)下降、Caspase7蛋白陽(yáng)性表達(dá)上升的趨勢(shì)，可能與羊水過(guò)少有關(guān)。