豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗免疫抗體的檢測評估

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染性疾病，由于其潛伏期短、發病急、傳播迅速、宿主譜系廣、危害嚴重，因此世界各國均倍受關注。世界動物衛生組織（OIE） 將其列為A類動物傳染病之首，我國農業農村部將其列為一類動物傳染病[1]。口蹄疫病毒屬于小RNA病毒科、口蹄疫病毒屬，已證實有O、 A、 C、 Asia1、SAT1、 SAT2和SAT3共7個血清型，而各血清型之間無交叉免疫保護。因此口蹄疫疫情的發生會造成嚴重的經濟損失和重大的政治影響[2]。我國在2013年之前豬群中流行豬O型口蹄疫病毒，2013年2月在廣東茂名報道了第一起豬的A型口蹄疫疫情[3,4]，此后根據國內豬口蹄疫的流行形勢，國內口蹄疫研發機構及口蹄疫疫苗企業開始研發各類豬口蹄疫O型、A型二價疫苗。豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗（多肽2700+2800+MM13）研發成功并獲得農業農村部生產批準文號后，2019年在我省開始使用。

本研究旨在觀察豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗（多肽2700+2800+MM13）的注苗反應，并進一步了解疫苗首免及二免后使用不同的抗體檢測試劑盒來評價產生抗體的整體水平及合格率[5-7]，以期為今后豬O型和A型口蹄疫的防控及評價提供科學的參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗疫苗豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗（多肽2700+2800+MM13）：國內某口蹄疫疫苗生產企業，批號：20190102。

1.1.2 試驗動物選取吉林省2個規模化豬場60日齡左右的仔豬40頭（每個豬場選取20頭）。

1.1.3 檢測試劑盒豬口蹄疫O型VP1結構蛋白ELISA抗體檢測試劑盒，鄭州某生物技術有限公司（簡稱ZZ），批號：20191001。口蹄疫病毒O型抗體檢測試劑盒，北京某科技有限公司（簡稱BJ），批號：107HS803。豬口蹄疫A型VP1結構蛋白ELISA抗體檢測試劑盒，鄭州某生物技術有限公司（簡稱ZZ），批號：20190101。口蹄疫病毒A型抗體檢測試劑盒，北京某科技有限公司（簡稱BJ），批號：107HS820。

1.2 試驗方法

1.2.1 免疫接種方法采用耳根后深層肌肉注射，疫苗首次免疫后間隔30d加強免疫一次，免疫劑量均為1mL/頭。

1.2.3 血樣采集第1次：免疫前采血，檢測母源抗體，確定首免時間；第2次：首次免疫后30d采血，同時加強免疫一次；第3次：加強免疫后15d采血；第4次：加強免疫后45d采血；第5次：加強免疫后90d采血；第6次：加強免疫后120d采血。每次采集血樣40份。

1.2.4 抗體檢測分別采用購自鄭州和北京的試劑盒進行O型、A型免疫抗體檢測，結果按說明書進行判定。

2 試驗結果

2.1 臨床觀察結果每次接種疫苗后連續觀察5d，首次免疫后和加強免疫后，40頭豬精神狀態均良好，采食量正常，未出現免疫副反應。

2.2 抗體檢測結果

2.2.1 口蹄疫O型抗體檢測結果豬口蹄疫O型VP1結構蛋白ELISA抗體檢測試劑盒（ZZ）的檢測結果顯示，首免后30d口蹄疫O型抗體合格率達到97.5%，加強免疫后至120d時抗體合格率仍維持在100%，具體檢測結果見表1。

表1 不同時間O型抗體檢測結果（ZZ）

表2 不同時間O型抗體檢測結果（BJ）

2.2.2 口蹄疫A型抗體檢測結果豬口蹄疫A型VP1結構蛋白ELISA抗體檢測試劑盒（ZZ）的檢測結果顯示，首免后30d口蹄疫A型抗體合格率達到95%，加強免疫后至120d時抗體合格率能夠達到95%以上，具體檢測結果見表3。

表3 不同時間A型抗體檢測結果（ZZ）

口蹄疫病毒A型抗體檢測試劑盒（BJ）的檢測結果顯示，首免及二免后抗體合格率僅有10%～30% ，具體檢測結果見表4。

表4 不同時間A型抗體檢測結果（BJ）

3 分析與討論

3.1 豬群接種口蹄疫疫苗后不良反應的大小和疫苗的生產工藝有直接的關系，疫苗中雜蛋白含量越低，副反應就越小。豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗接種后豬群精神狀態均良好，采食量正常，未出現免疫副反應，這與口蹄疫合成肽疫苗的生產工藝有直接的關系[8-10]。

3.2 抗體檢測結果表明，豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗免疫后產生抗體水平合格率高、免疫持續期長，二免后90d、120d抗體合格率仍可達到95%以上，能夠為正常的生豬飼養周期（約180天）提供良好的保護。

3.3 從不同試劑盒檢測結果的符合率來看，兩種O型抗體檢測試劑盒的合格率結果保持一致，而A型抗體檢測試劑盒（BJ）的合格率相對較低，可能與試劑盒中包被的抗原極性和構象有關。因此，不建議使用該類試劑盒評價合成肽疫苗免疫后產生的A型抗體。

3.4 仔豬的首免日齡和母源抗體有直接的關系，母源抗體水平越高，對疫苗的拮抗作用越強[11-14]。因此此次接種前首先檢測了母源抗體水平，確保疫苗免疫后不受母源抗體的干擾。