神經梅毒患者血清和腦脊液中的CXCL13和TH1TH2細胞因子的臨床意義

喬雨林 向文強 王磊

梅毒是一種由梅毒螺旋體感染引起的慢性、系統性、全身性的傳播疾病，主要通過性接觸直接傳播，部分為間接接觸傳染、輸血、哺乳及胎盤也可傳播。2007年，世界衛生組織估計全世界每年有1 200萬新的梅毒螺旋體感染發生率[1]。神經梅毒是中樞神經系統感染性疾病，由于梅毒螺旋體侵入中樞神經系統，導致腦膜、腦和脊髓受累。梅毒的任何疾病階段都可能發生梅毒侵襲中樞神經系統，導致一些患者出現神經梅毒。10%～25%未經治療的梅毒患者會發展為神經性梅毒[2]。神經梅毒的臨床表現多種多樣，通常無特異性，常導致誤診和漏診[2,3]。神經性梅毒治療晚期神經性梅毒的療效非常差。然而，常規治療有可能在早期治愈梅毒。因此，臨床醫師應重視神經梅毒的診斷、治療和預后，并嘗試在早期診斷和治療梅毒，以改善其預后。神經性梅毒的發病機制尚不清楚，免疫反應(尤其是細胞免疫)一直是神經性梅毒發病機制研究的熱點。有研究指出，對梅毒螺旋體的免疫應答在梅毒螺旋體感染后梅毒的發生和恢復中起著重要作用[4]。T細胞分泌的趨化因子和細胞因子具有特異的免疫調節和殺傷活性，在抗梅毒螺旋體感染中起著關鍵作用。目前細胞因子在早期診斷方面仍存在爭議。本研究以神經梅毒患者為研究對象，并根據其癥狀對其進行進一步劃分，旨在探討神經梅毒患者血清和腦脊液中的CXCL13和TH1TH2細胞因子的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年3～9月我院收治的30例無癥狀神經梅毒患者、30例輕癱性神經梅毒患者為研究對象，并選取同期入院體檢的30例健康人群作為對照。3組患者年齡、性別比、體重等基線資料差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 3組受試者基線資料比較 n=30

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：①符合診斷標準的初診神經梅毒患者；②既往無診斷及治療史；③無皮疹史；④臨床資料完整；⑤同意并配合本次研究。

1.2.2 排除標準：①孕、產婦；②合并其他免疫疾病患者；③感染其他性病患者；④合并惡性腫瘤患者；⑤研究過程存在不潔性生活史者；⑥臨床資料不全者。

1.3 研究方法

1.3.1 血液、腦脊液樣本收集：無癥狀神經梅毒組、輕癱性神經梅毒組受試者取血液、腦脊液樣本，健康對照組僅取血液樣本。血液樣本搜集：于清晨取受試者空腹狀態下靜脈血2 ml，在3 000 r/min下離心5 min，收集血清，保存于4℃的冰箱中待測。腦脊液樣本搜集：患者取側臥位，背部與床面保持垂直，雙手緊抱雙膝，貼近腹部保證脊柱盡量后凸，穿刺點取兩側骼嵴連線中點處；對皮膚進行常規消毒，將穿刺包打開，戴無菌手套后鋪洞巾，用2%的利多卡因(辰欣藥業股份有限公司)進行逐層浸潤麻醉；以左手固定皮膚，以右手持穿刺針垂直背部緩慢刺入4～6 cm，感到落空感后緩慢抽出針芯；觀察到腦脊液流后連接測壓管，記錄壓力；撤去測壓管，收集3～5 ml，插入針芯將穿刺針緩慢拔出，針眼處覆蓋消毒紗布。

1.3.2 細胞因子CXCL13、TH1、TH2水平測定：采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血液、腦脊液樣本中細胞因子CXCL13、TH1、TH2表達水平，ELISA試劑盒購自上海啟明生物科技有限公司(中國上海)。根據說明書要求檢測所有細胞因子，測定450 nm波長處吸光度值，細胞因子含量按標準曲線計算。

2 結果

2.1 3組患者血清中細胞因子CXCL13水平比較 無癥狀神經梅毒組、輕癱性神經梅毒組血清CXCL13水平高于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；無癥狀神經梅毒組、輕癱性神經梅毒組血清CXCL13水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

組別CXCL13健康對照組 30.18±4.33無癥狀神經梅毒組140.23±22.31?輕癱性神經梅毒組141.12±23.06?F值22.175P值<0.05

注：與健康對照組比較，*P<0.05

2.2 3組患者血清中細胞因子TH1水平比較 無癥狀神經梅毒組、輕癱性神經梅毒組患者血清TH1水平低于健康對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；無癥狀神經梅毒組、輕癱性神經梅毒組患者血清TH1水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

組別TH1健康對照組 0.254±0.030無癥狀神經梅毒組0.225±0.026?輕癱性神經梅毒組0.225±0.024?F值5.117P值<0.05

注：與健康對照組比較，*P<0.05

2.3 3組患者血清中細胞因子TH2水平比較 無癥狀神經梅毒組、輕癱性神經梅毒組血清TH2水平高于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；無癥狀神經梅毒組、輕癱性神經梅毒組血清TH2水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

2.4 梅毒患者腦脊液中細胞因子CXCL13水平比較 輕癱性神經梅毒組受試者腦脊液中CXCL13水平高于無癥狀神經梅毒組(P<0.05)。見表5。

組別TH2健康對照組 0.220±0.019無癥狀神經梅毒組0.242±0.022?輕癱性神經梅毒組0.240±0.021?F值4.126P值<0.05

注：與健康對照組比較，*P<0.05

組別CXCL13無癥狀神經梅毒組154.60±25.29輕癱性神經梅毒組248.31±30.06t值10.263P值<0.05

2.5 梅毒患者腦脊液中細胞因子TH1、TH2水平比較 輕癱性神經梅毒組受試者腦脊液中TH1水平低于無癥狀神經梅毒組、TH2水平高于無癥狀神經梅毒組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表6。

組別TH1TH2無癥狀神經梅毒組0.233±0.0280.230±0.022輕癱性神經梅毒組0.208±0.0270.257±0.023t值5.3695.689P值<0.05<0.05

3 討論

梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的一種性傳播疾病，可造成多器官的損害。梅毒最早出現在15世紀末的歐洲，人們普遍認為它是由哥倫布的船員從新大陸運過來的。最初，梅毒被描述為一種臨床實體，當時一種通常被稱為“大痘”或“邪惡痘”的疾病在歐洲得到承認，它的早期病死率高達25%[2]。然而，梅毒的流行病學是復雜的，該病的發病率受公共衛生政策以及社會、經濟和政治因素的影響。1999年，北美新增約107 000例，西歐新增136 000例，撒哈拉以南非洲新增380萬例，南亞新增400萬例，拉丁美洲新增290萬例(世界衛生組織，2001年)[3]。青霉素的現成性和機體對這種抗生素的敏感性相結合，使得美國梅毒的年發病率下降了36倍，從1943年的72例/10萬降至2000年的2.1例/10萬；然而，2008年的梅毒發病率上升了114%，達到4.5例/10萬。梅毒的發病率隨時間發生變化，約每10年出現一次局部峰值[2]。20世紀70年代，同性戀和雙性戀男性的風險明顯增加；然而，隨著艾滋病時代的到來，他們采用安全的性技術，導致了這一風險組梅毒發病率的顯著下降。根據癥狀，神經梅毒分為無癥狀和有癥狀，根據受累組織可分為早期和晚期，早期神經性梅毒是指梅毒螺旋體只涉及腦膜和相關血管，而晚期神經性梅毒涉及腦實質和脊髓，本研究以無癥狀神經梅毒、輕癱性神經梅毒患者為研究對象。

由于神經梅毒的實驗室診斷困難，需要新的標記物，CSF-B細胞趨化因子(c-x-c motif)配體13(cxcl13)作為一種標記物被廣泛應用。CXCL13是CXC趨化因子家族的成員，主要由次級淋巴組織、淋巴結和樹突細胞分泌，反映中樞神經系統感染后的免疫反應[4]。CXCL13在富含B淋巴細胞的腦脊液中被證明是升高的。腦脊液CXCL13對神經疏螺旋體病的敏感性高于已建立的診斷標記物，如腦脊液多細胞增多癥和疏螺旋體特異性抗體[5]。梅毒性腦膜炎患者的腦脊液中也觀察到大量的B淋巴細胞[6]。CXCL13決定B細胞在淋巴組織中的歸巢和運動，在B細胞向腦脊液遷移中起著關鍵作用[7]。因此，研究腦脊液 CXCL13作為神經梅毒的診斷標志物是有必要的。研究表明，腦脊液Cxcl13濃度對HIV感染患者的神經性梅毒的診斷特別有用，而這與腦脊液的多細胞增生和HIV疾病的標志物無關[5]。趨化因子是一些細胞分泌的一組細胞因子。研究表明，腦脊液CXCL13濃度可能有助于診斷有癥狀/無癥狀的神經梅毒，有效治療后腦脊液CXCL13含量降低，提示腦脊液CXCL13可用于臨床療效評價[8]。本研究發現，無癥狀神經梅毒組、輕癱性神經梅毒組血清CXCL13水平均高于健康對照組(P<0.05)；無癥狀神經梅毒組、輕癱性神經梅毒組血清CXCL13水平差異無統計學意義(P>0.05)，而輕癱性神經梅毒組受試者腦脊液中CXCL13水平高于無癥狀神經梅毒組(P<0.05)，提示神經梅毒患者CXCL13水平升高，且這一現象在輕癱性神經梅毒患者腦脊液中更為明顯。

神經侵襲性、宿主細胞免疫性和HIV感染與神經性梅毒的發生有關。在梅毒螺旋體感染后，對梅毒螺旋體的免疫反應在神經性梅毒的發生發展和恢復中起著重要作用，特別是對中樞神經系統中梅毒螺旋體的T淋巴細胞反應[9,10]。在人體免疫系統中，T淋巴細胞主要負責殺滅梅毒螺旋體，保護人體免受感染。T淋巴細胞可分泌多種細胞因子，發揮免疫調節和殺傷作用，在抗梅毒螺旋體感染中起重要作用。研究表明，免疫細胞對梅毒螺旋體的反應與TH1和TH1細胞因子有關,TH1淋巴細胞產生的細胞因子參與細胞介導的免疫反應，并且它們的分泌可能由TH2淋巴細胞的細胞因子調節[11]。Th1細胞因子包括IL-2、IL-12和IFN-γ，TH2細胞因子包括IL-6、IL-10等。在梅毒和其他細菌在細胞內的疾病中，細胞介導的免疫反應在宿主防御感染因子中起著關鍵作用。在一個研究中，研究人員提出了TH1向TH2轉移的假設來解釋梅毒的進展，他們推測，進入人體后的梅毒螺旋體可能誘導細胞反應(TH1樣反應)，可能殺死大量梅毒螺旋體，但隨后單核巨噬細胞和淋巴細胞被激活，產生大量抑制TH1反應和選擇性激活TH2反應的前列腺素[12]。TH2細胞因子的產生進一步抑制了TH1反應，導致TH1抑制的惡化[13]。本研究中，無癥狀神經梅毒組、輕癱性神經梅毒組血清TH1水平低于健康對照組(P<0.05)、血清TH2水平高于健康對照組(P<0.05)，無癥狀神經梅毒組、輕癱性神經梅毒組血清TH1、TH2水平差異無統計學意義(P>0.05)，輕癱性神經梅毒組腦脊液中TH1水平低于無癥狀神經梅毒組、TH2水平高于無癥狀神經梅毒組(P<0.05)，表明神經梅毒患者免疫功能異常，且Th2細胞因子是顯性的，神經性梅毒患者由于TH1/TH2免疫反應失衡，抑制了梅毒螺旋體的清除，導致對梅毒螺旋體的長期耐受和梅毒螺旋體的潛伏期，相較于無癥狀神經梅毒患者，輕癱性神經梅毒患者免疫反應失衡情況更為嚴重。

綜上所述，神經梅毒患者血清及腦脊液中CXCL13、TH2水平升高，TH1水平降低，存在體液免疫反應異常；相較于無癥狀神經梅毒患者，輕癱性神經梅毒患者腦脊液中這一趨勢更為明顯。