超高效液相色譜-串聯質譜法測定小麥粉中福美雙殘留量

曹 秀，胡永建，劉秀娟，余明霞，楊亞琴，鐘紅艦

（河南省農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所，鄭州 450002）

福美雙（thiram），化學名稱為四甲基秋蘭姆二硫化物，是硫代氨基甲酸鹽類保護性廣譜殺菌劑，對多種病原真菌具有抑制作用[1]。福美雙主要用于種子和土壤處理[2]，也可直接噴霧于水果、蔬菜、糧食作物上，以防止其在貯存和運輸過程中發生腐爛。但福美雙具有較高的蓄積性，對哺乳類動物有一定的毒性[3-6]。

福美雙在小麥、水稻等作物上被研究廣泛[7-8]，我國已制定了小麥中福美雙最大殘留限量的食品安全國家標準[9]。然而，福美雙在小麥粉中殘留研究尚未見報道。小麥粉中福美雙殘留可能來源于生產過程中受到小麥中殘留福美雙的污染[10]，或者企業在小麥粉中非法添加福美雙，以抑制有害微生物繁殖，防止小麥粉發生霉變。因此，對小麥粉中福美雙殘留檢測方法的研究很有必要。

目前，福美雙的檢測方法有：比色法[8]、光譜法[11-12]、氣相色譜法[1]、頂空氣相色譜法[13]、高效液相色譜法[14]和高效液相色譜-串聯質譜法[7,15-16]。比色法是間接測定福美雙的方法，選擇性差，且易受多種離子的干擾，不能滿足日益嚴格的殘留檢測要求；光譜法和氣相色譜法只能測定硫代氨基甲酸鹽類農藥總量，不能確定單一福美雙的含量，缺乏專一性；高效液相色譜法靈敏度和選擇性較差，且整個操作過程繁瑣、耗時長；高效液相色譜-串聯質譜法選擇性強，靈敏度高，能滿足低殘留檢測的要求。

本文建立了超高效液相色譜-串聯質譜法快速定量測定小麥粉中福美雙殘留量的方法。對比不同溶劑對小麥粉中福美雙的提取效率，調節儀器的參數，建立了快速測定小麥粉中福美雙樣品的前處理和液相色譜-質譜聯用分析方法。該方法前處理過程簡單，儀器分析速度快，準確度高，可滿足市場監管和日常檢測的需求。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

小麥粉，市購；福美雙（純度99.0%），德國Dr.Ehrenstofer公司；乙腈、甲醇、二氯甲烷和三氯甲烷（色譜純），美國Fisher公司；乙醇（分析純），國藥試劑；甲酸（色譜純），上海麥克林公司；乙酸銨（分析純），國藥試劑；試驗用水均為超純水。

1.2 儀器與設備

超高效液相色譜-串聯質譜儀，配有電噴霧離子源（ESI），美國Waters公司；BS224S分析天平（精確至0.000 1 g），德國Sartorius公司；AE 240分析天平（精確至0.000 01g），日本Mettler公司；Milli-Q@Synthesis純水儀，Millipore公司；SK-1快速混勻器，金壇市中大儀器廠；GL-21B高速冷凍離心機，上海安亭科學儀器廠；QGC-36T氮吹儀，上海全島公司。

1.3 方法

1.3.1 福美雙標準溶液的配制

福美雙標準儲備液（1.00 mg/mL）：稱取福美雙10 mg標準品于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。放置于冰箱冷凍，有效期1年。

福美雙標準中間液（10.00 μg/mL）：移取0.1 mL福美雙標準儲備液于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。放置于冰箱冷凍，有效期6個月。

福美雙標準工作液（1.00 μg/mL）：移取1 mL福美雙標準中間液于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。放置于冰箱冷凍，有效期6個月。

1.3.2 樣品處理

稱取1 g（精確至0.000 1 g）小麥粉試樣，置于50 mL離心管中，加入20 mL提取溶劑，渦旋5 min，使試劑與試樣充分混勻后，超聲提取30 min，再渦旋混勻2 min，在8 000 r/min、4℃條件下離心5 min。精密移取10 mL上清液于試管中，氮吹至干。殘留物用2 mL甲醇＋水（體積比1∶1）溶解，超聲渦旋，混勻后過0.45 μm油膜過濾，濾液待上機分析。

1.3.3 色譜及質譜檢測條件

色譜柱：ACQUITY UPLC@BEH C18色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；柱溫：40℃；進樣量1 μL；流動相：A相為乙腈，B相為0.05%甲酸水溶液；流速：0.3 mL/min；采用梯度洗脫模式：0～4.0 min，40%A相、60%B相；4.0～5.5 min，75%A相、25%B相；5.5～6.5 min，40%A相、60%B相。

離子源：電噴霧離子源，正離子掃描模式；毛細管電壓：0.5 kV；霧化氣溫度：400℃；霧化氣流量：800 L/h；監測模式：多反應監測模式。福美雙的質譜參數見表1。

表1 多反應監測模式下福美雙的質譜參數

2 結果與分析

2.1 流動相的優化

本研究考察了甲醇＋0.05%甲酸水溶液、甲醇＋5 mmol/L乙酸銨溶液、乙腈＋0.05%甲酸水溶液等流動相體系對福美雙的色譜峰及離子化的影響。結果表明，甲醇、乙腈作為強洗脫相，洗脫效果良好，沒有顯著差異。但以甲醇為有機相時，系統壓力高，而乙腈因黏度低使得系統壓力降低，因此選用乙腈作為有機相。以5 mmol/L乙酸銨溶液和0.05%甲酸水溶液作為流動相時都能獲得比較好的峰形。由于長期使用乙酸銨作為流動相時易損壞色譜柱，且用0.05%甲酸水溶液作為水相時，保留時間更短。因此，本次試驗中，采用乙腈＋0.05%甲酸水溶液作為流動相，福美雙標準溶液圖譜見圖1。

圖1 福美雙（100 ng/mL）標準溶液圖譜

2.2 提取溶劑的選擇

利用福美雙溶于甲醇、三氯甲烷等有機溶劑的特點，試驗中選取了乙腈、甲醇、乙醇、二氯甲烷和三氯甲烷對小麥粉中福美雙進行提取。采用在空白小麥粉基質中添加適量福美雙標準品，經1.3.2方法處理，5種提取溶劑加標回收率分別為15.6%、82.2%、106.0%、87.4%、92.6%。甲醇、乙醇、二氯甲烷和三氯甲烷對小麥粉中福美雙殘留物都有較好的提取效果。經甲醇、乙醇、二氯甲烷和三氯甲烷提取的小麥粉試樣出現了不同程度的溶脹，提取液變得黏稠，而經乙腈提取的小麥粉試樣，提取液澄清，提取效果差。由于二氯甲烷和三氯甲烷毒性大，乙醇揮發性小，不易氮吹至干，耗時長。因此，本試驗選用甲醇作為提取溶劑。

2.3 方法的線性范圍和定量限

2.3.1 標準曲線的繪制

移取適量的福美雙標準中間工作液（1.00 μg/mL），用甲醇＋水（體積比1∶1）溶液依次稀釋成質量濃度分別為5、10、25、50、100 ng/mL標準工作溶液，分別進樣測定。以標準工作溶液質量濃度x為橫坐標，以定量離子色譜峰面積y為縱坐標，繪制標準曲線。其線性方程為y=809.6x-3 194.5，相關系數為0.999 3，定量限為0.02 mg/kg。

2.3.2 添加回收率和方法精密度

在空白小麥粉中添加3個濃度水平的福美雙，以甲醇為提取溶劑，按照1.3.2方法進行添加回收率試驗，每個添加水平按試驗方法平行測定3次，計算添加回收率和相對標準偏差，結果見表2。空白小麥粉色譜圖和小麥粉加標色譜圖見圖2和圖3。

表2 添加回收率和相對標準偏差（n=5）

圖2 空白小麥粉色譜圖

圖3 小麥粉加標色譜圖

小麥粉空白基質樣品在添加水平分別為0.02、0.05和0.10 mg/kg時進行加標回收試驗，平均回收率為70.52%～85.20%，相對標準偏差為8.74%～9.42%。說明該方法對小麥粉中福美雙的測定有良好的準確度和精密度，符合殘留分析的要求。

2.4 實際樣品測定

采用優化后的前處理方法和儀器分析條件對市場中隨機購買的30批次小麥粉試樣中福美雙藥物殘留進行檢測，發現1批次小麥粉樣品檢出福美雙，福美雙殘留量為0.275 mg/kg。

3 結論

本研究采用甲醇提取小麥粉樣品中的福美雙，建立了小麥粉中福美雙殘留量的超高效液相色譜-串聯質譜檢測方法。正離子多反應監測模式測定，標準曲線外標法定量。該方法對小麥粉中福美雙進行了定性和定量分析，方法具有較高的回收率、良好的精密度和較高的準確度；且該方法前處理操作簡單、快速，適用于批量樣品處理，能夠滿足小麥粉中福美雙殘留量的快速檢測要求。